大腸桿菌表達系統(tǒng)在實際應用中具有一系列優(yōu)勢和局限性:優(yōu)勢:1.高表達水平:大腸桿菌能夠實現(xiàn)高水平的目標蛋白表達,,通常能夠達到目標蛋白總細胞蛋白的10-50%左右,。2.簡單易用:培養(yǎng)和操作相對簡單,不需要復雜的培養(yǎng)條件和設備,。3.高純度蛋白:目標蛋白通常以包涵體形式存在,,通過簡單的離心和洗滌步驟,可以得到高純度的蛋白。4.經(jīng)濟實惠:培養(yǎng)成本相對較低,,成本效益高,。5.高生物活性:表達的蛋白通常具有較高的生物活性,適合功能研究和生物活性測試,。局限性:1.蛋白質折疊問題:作為原核細胞,,大腸桿菌可能無法正確折疊某些復雜蛋白質,導致表達產(chǎn)物不具功能性,。2.內毒的素產(chǎn)生:表達系統(tǒng)中細胞壁內毒的素的產(chǎn)生可能導致細胞毒性,,并對目標蛋白的純化和功能造成困擾。3.限制于溶解態(tài)蛋白質:主要適用于溶解態(tài)蛋白質表達,,對于聚集態(tài)或難溶性蛋白質的表達可能存在困難,。Pfu Master Mix (2x)(With Dye)在突變研究中的作用 低錯誤率特性使其成為點突變、插入確保結果準確性,。上海漢遜酵母表達技術服務研發(fā)
漢遜酵母表達系統(tǒng)是一種新型的酵母菌表達平臺,,它具有高密度培養(yǎng)和高效表達外源蛋白的能力。在臨床前研究中,,漢遜酵母被用于表達瘤病毒(HPV)病毒樣顆粒(VLPs),,這為開發(fā)HPV疫苗提供了一種有希望的策略。HPVB19是一種高度傳染性的病毒,,對免疫功能低下者和胎兒可能造成嚴重后果,。目前,尚無針對HPVB19的批準疫苗或抗病毒藥物,,因此開發(fā)有效的疫苗顯得尤為重要,。漢遜酵母表達的VLPs,特別是VP1與VP2共組裝的VLP(VP1/VP2VLP),,可能成為HPVB19疫苗開發(fā)的候選免疫原,。在一項研究中,漢遜酵母成功表達了HPV68bL1蛋白,,并形成了VLPs,。這些VLPs在小鼠模型中顯示出良好的免疫原性,能夠誘導產(chǎn)生較高滴度的中和抗體,,并且對HPV68a型也表現(xiàn)出一定的交叉保護作用,。這表明漢遜酵母表達的HPV68bVLPs可能作為多價HPV疫苗的組分,用于疫苗生產(chǎn),。漢遜酵母表達系統(tǒng)還提供了一整套從表達載體構建到產(chǎn)業(yè)化發(fā)酵和蛋白純化的通用技術平臺,適合不同規(guī)模的企業(yè)使用,。在HPV68bL1蛋白的VLPs研究中,,通過高密度發(fā)酵和系列純化步驟,獲得了純度超過95%的VLPs,這些VLPs在形態(tài)上與天然病毒顆粒相似,,并通過假病毒體外中和試驗證明了其免疫學效果,。北京人源膠原蛋白技術服務技術服務在保存方面,DNA Marker I可在室溫下穩(wěn)定保存3個月,,長期保存建議置于-20℃,。
Fc融合蛋白技術通過將Fc片段(免疫球蛋白G的恒定區(qū))融合到目標蛋白上,可以帶來以下提高蛋白穩(wěn)定性的優(yōu)勢:1.提高溶解度:Fc片段通常具有較高的溶解性,,能夠減少目標蛋白的聚集,,從而提高其在細胞內的溶解度。2.延長半衰期:Fc片段具有較長的體內半衰期,,這一特性可以傳遞給融合蛋白,,延長其在體內的循環(huán)時間。3.增強穩(wěn)定性:Fc片段的結構穩(wěn)定性有助于維持融合蛋白的構象,,減少變性和降解,。4.免疫效應:Fc片段可以與體內多種免疫相關細胞和因子相互作用,如通過Fcγ受體介導的效應,,增強蛋白的免疫原性或免疫調節(jié)功能,。5.易于純化:Fc片段可以利用蛋白A或蛋白G親和層析高效地從培養(yǎng)液中純化融合蛋白。6.改善藥代動力學特性:Fc片段的融合可以改善蛋白的藥代動力學特性,,例如改變其在體內的分布和清理速率,。7.減少免疫原性:Fc片段有時可以掩蓋目標蛋白的免疫原性表位,減少其在體內的免疫反應,。8.促進ADCC效應:Fc片段可以介導抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)效應,,增強對特定細胞的靶向作用。
DNA Marker III:高效,、精細的DNA分子量標準DNA Marker III 是一種即用型的DNA分子量標準,,廣應用于瓊脂糖凝膠電泳中,用于快速估算DNA片段的大小,。它由多條線狀雙鏈DNA片段組成,,能夠為DNA分析提供清晰、準確的分子量參考,。產(chǎn)品特點組成:DNA Marker III 通常包含7-9條不同長度的DNA片段,,覆蓋從100 bp到10,000 bp的范圍。具體片段長度可能因品牌而異,,但常見的片段包括100 bp,、200 bp、500 bp,、1,000 bp,、2,000 bp,、5,000 bp和10,000 bp。即用型設計:預混了1×Loading Buffer,,無需額外添加,,直接上樣,節(jié)省時間和操作步驟,。清晰的條帶:電泳圖像清晰,,背景干凈,條帶亮度均勻,,便于在紫外燈下觀察,。穩(wěn)定性高:在室溫下可穩(wěn)定保存6個月,長期保存建議置于-20℃,,避免反復凍融,。使用方法樣量:建議每次取5 μL直接加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中。如果加樣孔較寬,,可適當增加樣量,。電泳條件:推薦使用1.0%-2.0%的瓊脂糖凝膠,1×TAE或0.5×TBE緩沖液,,電壓5-10 V/cm,。染色與觀察:電泳結束后,使用溴化乙錠(EB)或其他DNA染料染色,,在紫外燈下觀察,。注意事項保存條件:建議低溫保存,避免反復凍融,,以防止核酸酶污染導致條帶降解,。瓊脂糖質量:電泳時應盡量選用高質量的瓊脂糖,獲得比較好分離效果,。TBE緩沖液因其穩(wěn)定的pH值和良好的導電性,,能夠為DNA電泳提供理想的條件。
DNA Marker VII:精細助力分子生物學實驗在分子生物學研究中,,DNA Marker VII是一種廣使用的DNA分子量標準,,主要用于瓊脂糖凝膠電泳中分析DNA片段的大小。它由6條帶狀雙鏈DNA條帶組成,,覆蓋300 bp到2500 bp的分子量范圍,,具體條帶大小分別為300 bp、500 bp,、1000 bp,、1500 bp、2000 bp和2500 bp,。DNA Marker VII具有明顯的實驗優(yōu)勢,。其中,,1500 bp的條帶濃度為100 ng/5 μL,顯示為加亮帶,,便于快速定位和半定量分析,而其他條帶濃度約為50 ng/5 μL,。此外,,該產(chǎn)品已預混1×loading buffer,可直接取2-5 μL進行電泳,,操作簡便,,電泳圖像清晰。在實驗中,,DNA Marker VII適用于多種瓊脂糖凝膠濃度,,建議電泳條件為1.0%的凝膠濃度、5-7 cm的凝膠長度,、4-10 V/cm的電壓,,電泳時間約為20-25分鐘。通過EB染色或Goldview等染料進行染色后,,可在紫外燈下清晰觀察條帶,。DNA Marker VII的保存條件為-20℃,有效期可達一年,,短期頻繁使用可置于4℃保存,。它不僅適用于DNA片段大小的確定,還可用于DNA含量的粗略定量,,但不適用于精確定量,。總之,,DNA Marker VII憑借其清晰的條帶,、便捷的操作和穩(wěn)定的性能,已成為分子生物學實驗中不可或缺的工具,,為科研人員提供了可靠的分子量參考,。Pfu DNA Polymerase是一種源自嗜熱菌Pyrococcus furiosus的高度熱穩(wěn)定DNA聚合酶廣泛應用于分子生物學研究中.北京人源膠原蛋白技術服務技術服務
Taq PCR Master Mix (2×) 的優(yōu)勢在于其高度優(yōu)化的配方和高質量的組分。該預混液含有高活性的Taq DNA聚合酶,。上海漢遜酵母表達技術服務研發(fā)
在分子生物學實驗中,,RNA的分離與分析是研究基因表達和調控的重要環(huán)節(jié)。BPTE電泳緩沖液(1×, RNase free)作為一種為RNA電泳設計的緩沖液,,因其高效,、穩(wěn)定且無核酸酶污染的特點,成為實驗室中不可或缺的工具,。BPTE電泳緩沖液的主要成分包括PIPES,、Tris和EDTA,,這些成分共同作用,為RNA電泳提供了理想的環(huán)境,。該緩沖液經(jīng)過0.1% DEPC處理,,確保了無RNase污染,從而保護RNA樣品免受降解,。其pH值約為6.5,,適合RNA在電泳過程中的穩(wěn)定遷移。優(yōu)勢與特點無核酸酶污染:BPTE緩沖液經(jīng)過DEPC處理,,確保無RNase污染,,適合RNA樣品的電泳分析。高效分離:該緩沖液能夠提供穩(wěn)定的電泳條件,,確保RNA條帶清晰,、分辨率高。即用型設計:BPTE電泳緩沖液(1×, RNase free)為即用型溶液,,無需額外配制,,直接使用即可。廣適用性:適用于多種類型的RNA電泳實驗,,包括小片段RNA和長片段RNA的分離,。使用方法BPTE電泳緩沖液(1×, RNase free)可以直接用于制備瓊脂糖凝膠或作為電泳槽的緩沖液。使用時需注意以下幾點:確保所有實驗器材和試劑均經(jīng)過RNase-free處理,。在電泳結束后,,建議使用RNase-free的核酸染料進行染色,以避免RNA降解,。