大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離自脂肪組織；脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 ( adipose-derived stemcells，ADSCs)源自于胚胎發(fā)育時(shí)期的中胚層,，是一類具有自我更新和多分化潛能的成體干細(xì)胞,。其可以在特定的條件下誘導(dǎo)分化為脂肪、骨,、軟骨,、胰島 β 細(xì)胞和心肌等多種細(xì)胞，另外其免疫原性較低,，因此,，廣泛應(yīng)用于臨床；與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比,，在來源,、細(xì)胞群特點(diǎn)以及分化潛能等多方面極為相似。但是,，脂肪干細(xì)胞更易獲得足夠的細(xì)胞數(shù)量切對(duì)患者損傷較小,，是更為理想的字體干細(xì)胞源。脂肪組織分離得到脂肪干細(xì)胞,，脂肪干細(xì)胞形態(tài)以梭形為主,。BrdU可標(biāo)記其核。菩禾生產(chǎn)的人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用胰蛋白酶和膠原酶混合消化制備而來,。表皮角化細(xì)胞細(xì)胞技術(shù)指導(dǎo)

目前面部或口腔重大神經(jīng)損傷的標(biāo)準(zhǔn)策略是采用神經(jīng)自體移植（Nerveautograft）,，即從患者手臂或腿部取下神經(jīng)并移植。盡管顯微外科技術(shù)不斷進(jìn)步,，神經(jīng)自體移植仍然存在一定局限,，不對(duì)未受損部位造成損傷，并且在修復(fù)較大的神經(jīng)損傷時(shí)，完整性和功能性神經(jīng)再生效果不佳,。研究表明,，干細(xì)胞聯(lián)合神經(jīng)引導(dǎo)導(dǎo)管(NGCs)具有替代神經(jīng)移植的潛力。近日,，研究人員展示了一種牙齦來源間充質(zhì)干細(xì)胞（GMSC）結(jié)合生物支架修復(fù)外周神經(jīng)的策略,。研究人員將GMSC引入膠原蛋白水凝膠中并誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)變?yōu)槭┩?xì)胞樣細(xì)胞（Schwann-likecell），即神經(jīng)系統(tǒng)中產(chǎn)生髓鞘和神經(jīng)生長(zhǎng)因子的促再生性細(xì)胞,。將這些細(xì)胞遷移到神經(jīng)導(dǎo)管中,，形成功能化的神經(jīng)導(dǎo)管，軸突受到引導(dǎo)在損傷留下的間隙中產(chǎn)生,。隨后研究人員構(gòu)建了面部神經(jīng)損傷的嚙齒動(dòng)物模型以驗(yàn)證GMSC細(xì)胞結(jié)合神經(jīng)導(dǎo)管移植的功效,。結(jié)果顯示，與移植空的神經(jīng)導(dǎo)管的空白組相比,，接受GMSC結(jié)合神經(jīng)導(dǎo)管移植的動(dòng)物模型的面部下垂程度較低,，神經(jīng)導(dǎo)管也得到了恢復(fù)。在移植后,，植入的GMSC也在嚙齒動(dòng)物體內(nèi)存活了幾個(gè)月,。此外，GMSC結(jié)合神經(jīng)導(dǎo)管移植后的修復(fù)效果與神經(jīng)自體移植效果相同,。肝星形細(xì)胞細(xì)胞特價(jià)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自肺,；

    三、實(shí)驗(yàn)用品1,、試劑：三尖杉酯堿（HT）,，300μg/ml，100mmol/LTris-HCl（）,，5mol/LEDTA緩沖液,、堿性裂解液：，1%SDS,、醋酸鈉：3mol/LKAc（）;異丙醇;70%乙醇;溴酚藍(lán),，蔗糖指示劑。TBE電泳緩沖液,，1%瓊脂糖,，溴乙錠。PI母液：500μg/ml;Ho33342母液：2mmol/L,。2,、儀器設(shè)備：熒光顯微鏡，電泳儀,，電泳槽,，微量加樣器（1ml,，100μl）、,，載玻片,，蓋玻片。四,、實(shí)驗(yàn)材料人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞,，用含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基在37°C，5%CO2條件下培養(yǎng),。五,、方法步驟1、三尖杉酯堿誘發(fā)HL-60細(xì)胞凋亡（1）實(shí)驗(yàn)前約24小時(shí),，接種兩瓶HL-60細(xì)胞,，標(biāo)記（6）、（37）,，每瓶含約5ml培養(yǎng)液,，置2°C，<>%CO<>培養(yǎng)箱培養(yǎng),。（2）實(shí)驗(yàn)前約,，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到70%，（200）號(hào)瓶加入三尖杉酯堿1μl,，使終濃度為7μg/ml，（4）號(hào)瓶中加入同等量PBS（）作對(duì)照,。共同放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)<>.<>小時(shí),。2、Ho33342和PI雙重染色鑒別三種細(xì)胞（1）染色：將瓶中的細(xì)胞搖勻取200μl于,，加入Ho33342母液2μl,，PI20μl，染色15分鐘,。（2）滴片：取一載玻片用雙面膠圍成一小室,，從離心管中各取以上染色后的細(xì)胞懸液10μl，加入小室內(nèi)蓋上蓋玻片,，熒光鏡下用紫外激發(fā)光,。

目前缺血性腦卒中患者為有效的藥物是組織纖溶酶原劑（tPA）。但tPA溶栓會(huì)引起血腦屏障（BBB）破壞,，導(dǎo)致出血轉(zhuǎn)化,，不僅減弱了藥物發(fā)揮的效果，并且與不良預(yù)后和死亡密切相關(guān),。因此找到有效的臨床干預(yù)措施對(duì)于改善tPA效益仍然十分迫切,。研究表明,，間充質(zhì)干細(xì)胞來源胞外囊泡（MSC-EVs）能夠自由通過BBB，具有良好的BBB保護(hù)作用以及促進(jìn)組織損傷修復(fù)功能,。采用MSC-EVs聯(lián)合tPA溶栓缺血性腦卒中具有理論依據(jù),。近日，研究人員報(bào)道MSC-EVs通過抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎癥,，從而發(fā)揮BBB保護(hù)作用,，進(jìn)而改善tPA缺血性腦卒中的效益。研究人員構(gòu)建大腦中動(dòng)脈閉塞后再通（MCAO/R）的缺血性腦卒中小鼠模型,，并在使用tPA前加用MSC-EVs處理,。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與tPA單獨(dú)處理相比,，經(jīng)MSC-EVs處理后BBB破壞程度減輕,，出血轉(zhuǎn)化減少，小鼠神經(jīng)功能改善,。熒光成像發(fā)現(xiàn)MSC-EVs可透過BBB并集聚在顱內(nèi)缺血區(qū),，增加了星形膠質(zhì)細(xì)胞的攝取。進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),，MSC-EVs通過miR-125b-5p靶向TLR4/NF-κB通路,，進(jìn)而抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎癥，從而發(fā)揮BBB保護(hù)作用,。大鼠大隱靜脈平滑肌細(xì)胞分離自大隱靜脈,。

大鼠牙周膜干細(xì)胞分離自牙齒組織；牙周組織是由牙周膜,、牙槽骨和牙齦三部分組成,，它的主要功能是支持、固定和營(yíng)養(yǎng)牙齒,。牙周膜它是一種致密的纖維組織,，一端埋入牙骨質(zhì)，一端連接牙槽骨,，實(shí)際上是牙齒通過牙周膜被懸吊在牙槽窩中,，使牙齒能牢固地固定在頜骨的牙槽窩內(nèi)，具有一定的彈性,，有利于緩沖牙齒承受的咀嚼力,。牙髓的神經(jīng)、血管通過根尖孔與牙槽骨和牙周膜的血管,、神經(jīng)相連接,。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通過血液供給牙髓，營(yíng)養(yǎng)牙齒,，所以牙齒和牙周組織關(guān)系密切,。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemcells,，MSCs）來源于胚胎時(shí)期的中胚層組織，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能,，具有向脂肪細(xì)胞,、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力,，運(yùn)用MSCs來修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景,，目前已能夠從骨髓、脂肪,、滑膜,、骨骼、肌肉等組織以及羊水,、臍帶,、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞。目前,，牙周支持組織重建主要依賴機(jī)械,、藥物或引導(dǎo)組織再生技術(shù)，隨著分子生物學(xué),、組織工程學(xué)和干細(xì)胞技術(shù)的飛速發(fā)展,，牙周組織再生工程技術(shù)成為牙周病***研究的熱點(diǎn)，牙周膜干細(xì)胞(Periodontalligamentstemcell,，PDLSC）是牙周組織再生工程的關(guān)鍵種子細(xì)胞之一,。菩禾生產(chǎn)的人頸動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶和膠原酶混合消化制備而來。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞廠家

大鼠軟骨細(xì)胞分離自關(guān)節(jié)軟骨,。表皮角化細(xì)胞細(xì)胞技術(shù)指導(dǎo)

皮膚創(chuàng)傷是一個(gè)普遍存在的健康問題,，隨著各類衰老、代謝性疾病的日益多發(fā),，遷延不愈的創(chuàng)面發(fā)生也呈現(xiàn)逐年增高趨勢(shì),，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量,，給家庭和社會(huì)帶來沉重經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),。脂肪干細(xì)胞來源外泌體（ADSC-Exos）被認(rèn)為是修復(fù)皮膚傷口的有前途的策略，其不僅具有與來源干細(xì)胞類似的生物學(xué)功能,，還具有低免疫原性,、易于存儲(chǔ)和高效的生物活性特點(diǎn)。研究表明,，ADSC-Exos的組成成分和效果高度依賴于其來源細(xì)胞的狀態(tài),，通過藥物處理、缺氧培養(yǎng)等均可影響ADSC-Exos的生物活性或提高特定疾病的效果,。因此通過工程化策略,，提高ADSCs-Exos促進(jìn)創(chuàng)面愈合效果具有實(shí)踐意義,。近日，研究人員報(bào)道了E2F1缺失的ADSCs-Exos（ADSCE2F1-/--Exos）促進(jìn)創(chuàng)面愈合的潛在機(jī)制,。研究人員構(gòu)建了小鼠皮膚全層缺損模型,，探討了ADSCE2F1-/--Exos皮膚損傷的作用和機(jī)制。結(jié)果顯示,，ADSCE2F1-/--Exos可促進(jìn)血管生成,，成纖維細(xì)胞膠原形成，進(jìn)而加速創(chuàng)面愈合,，并且效果優(yōu)于對(duì)照組ADSC-Exos,。miRNA測(cè)序發(fā)現(xiàn)E2F1-ADSC相比對(duì)照ADSC，高表達(dá)膠原形成相關(guān)miR-130b-5p,。進(jìn)一步機(jī)制研究,，E2F1通過與miR-130b-5p前體結(jié)合后調(diào)控miR-130b-5p表達(dá)。隨后,，ADSCE2F1-/--Exos可將miR-130b-5p傳遞至成纖維細(xì)胞中,。表皮角化細(xì)胞細(xì)胞技術(shù)指導(dǎo)