探針的標記方式有放射性標記和非放射性標記,。標記物質(zhì)有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(zhì)(如生物素,、地高辛等),。32P是**常用的核苷酸標記同位素,,被標記的dNTP本身就帶有磷酸基團,便于標記,。特點是比活性高,,可達9000Ci/mmol;發(fā)射的β射線能量高,。用它標記的探針自顯影時間短,,靈敏度高。32P的半壽期短,,雖使用不方便,,但為廢棄物的處理減輕了壓力。非放射性標記法有酶標法和化學物標記法,。酶標方法與免疫測定ELISA方法相似,,只是被標記的核酸代替了被標記的抗體,事實上被標記的抗體也稱為探針,,現(xiàn)有許多商品是生物素,、地高辛標記的。電子探針的構(gòu)成除了與掃描電鏡結(jié)構(gòu)相似的主機系統(tǒng)以外,,還主要包括分光系統(tǒng),、檢測系統(tǒng)等部分。嘉定區(qū)優(yōu)勢探針維修價格
血凝素與生物素有非常高的親和性,,當血凝素標記上過氧化物酶或堿性磷酸酶,,經(jīng)雜交反應**終形成探針-生物素-血凝素酶復合物(ABC法),酶催化底物顯色,,觀察結(jié)果,。ABC法底物顯色生成不溶物,以便觀測結(jié)果,。酶標記法復雜,、重復性差,,成本高,,但便于運輸,、保存,靈敏度與放射物標記法相當,。探針標記方法①缺口平移標記法,。利用的是DNA聚合酶I能修復DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機切出切口,,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸,,同時在3´端修復加入被標記核苷酸,切口平行推移,。缺口平移法快速,、簡便、成本相對較低,、比活性相對較高,、標記均勻,多用于大分子DNA標記,,(>1000bp比較好),,但單鏈DNA、RNA不能用該法標記,。虹口區(qū)標準探針推薦貨源電子束轟擊樣品表面將產(chǎn)生特征X射線,,不同的元素有不同的X射線特征波長和能量。
利用電子探針分析方法可以探知材料樣品的化學組成以及各元素的重量百分數(shù),。分析前要根據(jù)試驗目的制備樣品,,樣品表面要清潔。用波譜儀分析樣品時要求樣品平整,,否則會降低測得的X射線強度,。定性分析1 點分析用于測定樣品上某個指定點的化學成分。下圖是用能譜儀得到的某鋼定點分析結(jié)果,。能譜儀中的多道分析器可使樣品中所有元素的特征X射線信號同時檢測和顯示,。不像波譜儀那樣要做全部譜掃描,甚至還要更換分光晶體,。2 線分析用于測定某種元素沿給定直線分布的情況,。方法是將X射線譜儀(波譜儀或能譜儀)固定在所要測量的某元素特征X射線信號(波長或能量)的位置上,把電子束沿著指定的方向做直線軌跡掃描,,便可得到該元素沿直線特征X射線強度的變化,,從而反映了該元素沿直線的濃度分布情況。改變譜儀的位置,,便可得到另一元素的X射線強度分布,。下圖為50CrNiMo鋼中夾雜Al2O3的線分析像??梢?,在Al2O3夾雜存在的地方,,Al的X射線峰較強。
缺口平移法是**常用的探針標記法,,反應體系的主要成分有DNA酶I(DNase I),、大腸桿菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三種三磷酸脫氧核糖核苷酸,、一種同位素標記的核苷酸(如dATP,、dTTP、dCTP,,”P—dGTP),,其原理如圖1。首先用適當濃度的DNA酶I在探針DNA雙鏈分子上隨機切開若干個缺口(不是切斷DNA或?qū)⑵浣到猓?,然后再借助于DNA聚合酶I的5 '→3'的外切酶活性,,切去5’末端的核苷酸;同時又利用該酶的5’→3’聚合酶活性,,使32P標記的互補核苷酸補入缺口.DNA聚合酶I的這兩種活性的交替作用,,使缺口不斷向3’的方向移動,DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標記的核苷酸所取代,。由于反應體系中含有同位素標記的單核苷酸,,使新合成的鏈帶有同位素標記,所以缺口平移實際上是同位素標記的核苷酸取代了原DNA鏈中不帶同位素的同種核苷酸,。波譜儀的關(guān)鍵在于怎樣實現(xiàn)將未知的特征譜線與已知元素Z聯(lián)系起來,?
電子探針是運用電子所形成的探測針(細電子束)作為X射線的激發(fā)源來進行顯微X射線光譜分析的儀器。分析對象是固體物質(zhì)表面細小顆?;蛭⑿^(qū)域,,**小范圍直徑為1μm。電子探針可測量的化學成分的元素范圍一般從原子序數(shù)12(Mg)至92(U),,原子序數(shù)大于22的元素可在空氣通路的X射線光譜儀上進行測量,。電子探針的靈敏度低于X射線熒光光譜儀,原因是電子探針X射線的本底值高于后者,,但電子探針的***感量比其他儀器都高,。此外,后期生產(chǎn)的儀器,,可作X射線背散射照相,、******照相。能兼作透射電鏡,、能進行電子衍射,、能作電子熒光觀察等。當某一X射線光子進入計數(shù)管后,管內(nèi)氣體電離,,并在電場作用下產(chǎn)生電脈沖信號,。閔行區(qū)標準探針五星服務(wù)
把電子顯微鏡和電子探針結(jié)合,可把在顯微鏡下觀察到的顯微組織和元素成分聯(lián)系起來,。嘉定區(qū)優(yōu)勢探針維修價格
在不損耗試樣的情況下,,電子探針通常能分析直徑和深度不小于1微米范圍內(nèi),、原子序數(shù)4以上的所有元素,;但是對原子序數(shù)小于12的元素,其靈敏度較差,。常規(guī)分析的典型檢測相對靈敏度為萬分之一,,在有些情況下可達十萬分之一。檢測的***靈敏度因元素而異,,一般為10-14~10-16克,。用這種方法可以方便地進行點、線,、面上的元素分析,,并獲得元素分布的圖象。對原子序數(shù)高于10,、濃度高于10%的元素,,定量分析的相對精度優(yōu)于±2%。電子探針儀是 X射線光譜學與電子光學技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的,。1948年法國的R.卡斯坦制造了***臺電子探針儀,。1958年法國首先制造出商品儀器。電子探針儀與掃描電子顯微鏡在結(jié)構(gòu)上有許多共同處,。70年代以來生產(chǎn)的電子探針儀上一般都帶有掃描電子顯微鏡功能,,有的還附加另一些附件,使之除作微區(qū)成分分析外,,還能觀察和研究微觀形貌,、晶體結(jié)構(gòu)等。嘉定區(qū)優(yōu)勢探針維修價格
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