相對(duì)于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量上的問(wèn)題,，10X平臺(tái)普遍提供的細(xì)胞數(shù)量都在1000-20000不等的測(cè)序細(xì)胞量,，這個(gè)量級(jí)的測(cè)序細(xì)胞量已經(jīng)可以說(shuō)能夠完全覆蓋絕大部分組織的Single Cell群體類型,。因此,，這兩種技術(shù)對(duì)于基于基因表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞分型上,，無(wú)論是從細(xì)胞數(shù)量上來(lái)說(shuō)還是表達(dá)檢測(cè)可靠性來(lái)說(shuō),，都會(huì)更實(shí)用,。同時(shí)依托Random Cell Label技術(shù),，使得其對(duì)于NovaSeq,、HiSeq X Ten,、Hiseq 4000等設(shè)備存在的Index hooping現(xiàn)象，相對(duì)于Smart-Seq數(shù)據(jù)來(lái)說(shuō),，影響幾乎可以忽略不計(jì)（10X Genomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測(cè)試結(jié)果,，顯示無(wú)影響。烈冰單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序助您探究細(xì)胞類型特異性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)特征,。吉林二代測(cè)序單細(xì)胞測(cè)序百萬(wàn)通量平臺(tái)

10X Genomics和Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理,。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,，一列縱向孔道輸入細(xì)胞，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會(huì)吸附在凝膠微珠上,，并通過(guò)微流控技術(shù),，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中,。這時(shí)候,，就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中。每一個(gè)油滴中會(huì)落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠,，那么在每一個(gè)凝膠微珠中上長(zhǎng)滿了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列,，再加上一端PolyT的抓手，構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠,。而這個(gè)凝膠微珠抓手就會(huì)使用oligo dT抓住mRNA構(gòu)建文庫(kù),。武漢二代測(cè)序單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析可視化單細(xì)胞科聯(lián)合空間轉(zhuǎn)錄組，展示組織切片中不同區(qū)域的基因表達(dá)情況,，揭示精細(xì)病理區(qū)域中“喚醒”的信號(hào)通路,。

10× Genomics官方建議，當(dāng)單細(xì)胞懸液活性低于70%時(shí)應(yīng)做去除死細(xì)胞操作,，并推薦使用MACS? Dead Cell Removal Kit(Miltenyi Biotec),。需要注意到，去除死細(xì)胞的操作會(huì)損失一定的細(xì)胞數(shù)量,，10× Genomics和Miltenyi Biotec都沒(méi)有給出單細(xì)胞懸液含有多少細(xì)胞數(shù)量才建議做去除死細(xì)胞的操作,。基于烈冰多年單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)經(jīng)驗(yàn),，建議當(dāng)細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)量和活性檢測(cè)后,，考慮對(duì)細(xì)胞活性在50%-70%的懸液進(jìn)行去除死細(xì)胞的操作。而太低活性的懸液（小于30%）,，懸液中細(xì)胞大量死亡,，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細(xì)胞比例和狀態(tài)，失真嚴(yán)重,，建議重新收集樣本進(jìn)行新的實(shí)驗(yàn),，保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

為什么需要單細(xì)胞分辨率,？ 生物學(xué)就像宇宙一樣,。它非常復(fù)雜，有許多獨(dú)特的單體,，也就是細(xì)胞,。這些細(xì)胞相互作用并扮演不同的角色，在更大的體系中構(gòu)建并驅(qū)動(dòng)多個(gè)過(guò)程,。就像伽利略探索宇宙的努力一樣,，發(fā)現(xiàn)和定義這些細(xì)胞也需要高分辨率的工具，才能解開(kāi)促成生物學(xué)復(fù)雜性的基因表達(dá)異質(zhì)性,。單細(xì)胞測(cè)序能夠在以一個(gè)細(xì)胞為功能單位中開(kāi)展生物學(xué)研究,，闡明具體細(xì)節(jié)，構(gòu)建出一幅更大,、更精細(xì)的圖譜,，說(shuō)明導(dǎo)致產(chǎn)生某種外在表型的不同類型的分子和細(xì)胞之間是如何相互作用的：患者為什么會(huì)復(fù)發(fā)？是什么讓這種疫苗能夠有效防止傳染等等諸多問(wèn)題,。烈冰生物為您提供一站式全流程高通量測(cè)序服務(wù),。

樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化，在對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗和計(jì)數(shù)后,，單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上,，直至用于后續(xù)的上機(jī)和文庫(kù)制備步驟。在理想狀況下,，一旦制備好樣本,，應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟。然而,，您還有必要了解各類細(xì)胞的不同性質(zhì),，因?yàn)檫@可能會(huì)影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時(shí)間，以及它們?cè)谥苽浜蠖嗑帽銘?yīng)當(dāng)被盡快使用,。例如,，有些細(xì)胞（如PBMC）如果在冰上放置一段時(shí)間，它們就開(kāi)始形成團(tuán)塊,。這些團(tuán)塊很難解離,，增加了堵塞的風(fēng)險(xiǎn)，而且每個(gè)團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計(jì)數(shù),，又降低了細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,。此外，有些細(xì)胞更加粘稠,，形成團(tuán)塊的速度更快,。對(duì)于這些細(xì)胞，必須盡量減少制備和使用之間的時(shí)間差,。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的迅速發(fā)展和應(yīng)用推廣,，為從多維度揭示疾病發(fā)展提供了強(qiáng)有力的工具。高通量測(cè)序單細(xì)胞測(cè)序價(jià)格

測(cè)序可準(zhǔn)確地分析基因表達(dá)差異,、基因結(jié)構(gòu)變異,、篩選分子標(biāo)記（SNPs或SSR）等生命科學(xué)重要問(wèn)題。吉林二代測(cè)序單細(xì)胞測(cè)序百萬(wàn)通量平臺(tái)

基因和基因產(chǎn)物并不是單獨(dú)運(yùn)作的，而是參與了相互關(guān)聯(lián)的復(fù)雜通路,、網(wǎng)絡(luò)和分子系統(tǒng),，這些合在一起實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞、組織和生物體的運(yùn)作,。定義這些系統(tǒng)并確定它們的特征和相互作用,，對(duì)于了解生物系統(tǒng)如何運(yùn)作至關(guān)重要?！睘榱送苿?dòng)科學(xué)發(fā)現(xiàn),，科學(xué)家們需要各種能夠幫助多方位了解其樣本的潛在生物復(fù)雜性的研究工具。對(duì)于越來(lái)越多的研究人員來(lái)說(shuō),，單細(xì)胞RNA測(cè)序和單細(xì)胞多組學(xué)——即在單細(xì)胞分辨率下對(duì)基因表達(dá)及其他基于DNA,、RNA或蛋白質(zhì)的分析物進(jìn)行定量分析的基因組方法——在幫助解決他們面臨的生物學(xué)問(wèn)題上已證實(shí)是行之有效的。吉林二代測(cè)序單細(xì)胞測(cè)序百萬(wàn)通量平臺(tái)

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