單細(xì)胞RNA-seq,、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個(gè)共同過程,，即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析。不過,，每種分析在開展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同,。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA，然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA,。RNA-seq是使用cDNA來構(gòu)建新一代測序文庫,，從而測定整個(gè)轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá)。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn),，并通過熒光測定表達(dá)水平,。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn)，而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析,。然而,，這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或單個(gè)微反應(yīng)容器中,。然后用細(xì)胞特異性的條形碼標(biāo)記RNA,，確保來自每個(gè)細(xì)胞的cDNA可以追溯到起源細(xì)胞。與RNA-seq相似,，帶有條形碼的cDNA也被用于構(gòu)建新一代測序文庫,，從而能夠?qū)γ總€(gè)細(xì)胞的整個(gè)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行基因表達(dá)測定。全線搭建10x Genomics單細(xì)胞測序平臺,。重慶10X Chromium X單細(xì)胞測序價(jià)格

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序是在單細(xì)胞水平上高通量測序分析基因表達(dá)譜的技術(shù),，突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性，組織解離后,，單個(gè)樣本一次上機(jī)能捕獲500-20000個(gè)細(xì)胞,， 基于每個(gè)細(xì)胞分別建庫測序，獲得單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài),，并鑒定細(xì)胞的類型,，可以在不同樣本間從細(xì)胞類型的組成和豐度角度進(jìn)行比較,，反映細(xì)胞間的異質(zhì)性。而2021年橫空出世的10X Genomics Chromium X平臺實(shí)現(xiàn)了單塊chip上的百萬級別通量的細(xì)胞捕獲,，系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)16個(gè)通道同時(shí)運(yùn)行，每個(gè)通道可捕獲2000-20000個(gè)細(xì)胞（不混樣）,，并支持原Chromium Controller體統(tǒng)外的多種細(xì)胞捕獲百萬級別通量實(shí)驗(yàn),，可準(zhǔn)確鑒別稀有細(xì)胞類型和適配大規(guī)模單細(xì)胞研究。烈冰生物單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析可視化烈冰實(shí)驗(yàn)室包含從樣本處理到測序下機(jī)的全套實(shí)驗(yàn)平臺,。

科技的發(fā)展讓單細(xì)胞測序已經(jīng)應(yīng)用于疾病發(fā)展過程中的關(guān)鍵過程和事件,，如前病變向惡性的轉(zhuǎn)化、惡性向轉(zhuǎn)移性的發(fā)展,，以及對多種用藥的反應(yīng),。單細(xì)胞測序技術(shù)作為一個(gè)需要將組織解離成為單細(xì)胞懸液，或者是采用細(xì)胞核捕獲的策略捕獲單細(xì)胞核,，進(jìn)而對于每一個(gè)單細(xì)胞或者細(xì)胞核進(jìn)行測序得到結(jié)果的技術(shù),，其空間定位信息是丟失的。這就衍生出了一個(gè)問題就是如果單細(xì)胞A與B并不出現(xiàn)在一個(gè)組織區(qū)域中他們會互相影響或者轉(zhuǎn)化么,？免疫研究中,，兩個(gè)具有非常強(qiáng)的PDL1-PD1的配對關(guān)系的細(xì)胞在組織切片上風(fēng)馬牛不相及，這樣PDL1-PD1的關(guān)系會生效么,？

RNA測序（RNA-seq）或芯片分析等大量樣本的轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法作為一類強(qiáng)大的工具,，可提供混合樣本的基因表達(dá)平均數(shù)據(jù)，幫助科學(xué)家開始揭示這種異質(zhì)性,。隨后,，技術(shù)創(chuàng)新的飛躍在單細(xì)胞技術(shù)上達(dá)到新高度——使得科學(xué)家能夠定義細(xì)胞類型特異的基因表達(dá)，從過去的平均數(shù)據(jù)中分辨出真正驅(qū)動(dòng)其表達(dá)模式的細(xì)胞異質(zhì)性,。這讓研究人員能夠更詳細(xì)地表征組織異質(zhì)性,，鑒定稀有細(xì)胞類型，并逐個(gè)細(xì)胞地仔細(xì)分析其分子機(jī)制,。當(dāng)獲得了對其研究的生物系統(tǒng)更為真實(shí)的圖譜后,，研究人員就有了更為堅(jiān)實(shí)可靠的知識基礎(chǔ)，并能在這個(gè)基礎(chǔ)上規(guī)劃下一步實(shí)驗(yàn),，以獲取更深入的可行動(dòng)見解,。單細(xì)胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破。

關(guān)于10X Genomics單細(xì)胞平臺的樣本類型和樣本制備 ：10X平臺在上機(jī)前需要注意細(xì)胞消化后的細(xì)胞團(tuán)塊,，獲得分離良好的細(xì)胞懸液,、無細(xì)胞隨便、極少的細(xì)胞團(tuán)塊,，且細(xì)胞活力高（＞70%）,；此外,，了解您所研究細(xì)胞的大小范圍也很重要。細(xì)胞大小通常與細(xì)胞表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本數(shù)量有關(guān),。各種尺寸不同的細(xì)胞（一般直徑不大于50μm）均可與我們基因表達(dá)解決方案中使用的10X Genomics平臺兼容,。一般來說，細(xì)胞制備方案將根據(jù)組織來源和細(xì)胞類型而變化,。每種組織類型都是獨(dú)特的,，因此，必須在開始任何單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)之前優(yōu)化樣本制備,，烈冰多年樣本解離消化經(jīng)驗(yàn),，累積10+物種、50+組織的消化protocol,，若您的樣本為組織,，且尚未成功將組織樣本消化成單細(xì)胞懸液，烈冰將盡可能提供技術(shù)及實(shí)驗(yàn)上的幫助,。烈冰全線實(shí)驗(yàn)平臺滿足超深度,、大規(guī)模發(fā)現(xiàn)和復(fù)雜疾病研究的測序。西安二代測序單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析培訓(xùn)班

個(gè)性化制定測序項(xiàng)目方面,，滿足從檢測基因到蛋白的多組學(xué)測序要求,。重慶10X Chromium X單細(xì)胞測序價(jià)格

10X Genomics和Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,，一列縱向孔道輸入細(xì)胞,，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術(shù),，將之輸入到第二縱向孔道,，即油相孔道中。這時(shí)候,，就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中,。每一個(gè)油滴中會落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠，那么在每一個(gè)凝膠微珠中上長滿了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列,，再加上一端PolyT的抓手,，構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠。而這個(gè)凝膠微珠抓手就會使用oligo dT抓住mRNA構(gòu)建文庫,。重慶10X Chromium X單細(xì)胞測序價(jià)格

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