單細(xì)胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個(gè)共同過程，即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析,。不過，每種分析在開展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同,。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA，然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA,。RNA-seq是使用cDNA來構(gòu)建新一代測(cè)序文庫,，從而測(cè)定整個(gè)轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá)。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn),，并通過熒光測(cè)定表達(dá)水平,。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn)，而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析,。然而,，這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或單個(gè)微反應(yīng)容器中,。然后用細(xì)胞特異性的條形碼標(biāo)記RNA,，確保來自每個(gè)細(xì)胞的cDNA可以追溯到起源細(xì)胞。與RNA-seq相似,，帶有條形碼的cDNA也被用于構(gòu)建新一代測(cè)序文庫,，從而能夠?qū)γ總€(gè)細(xì)胞的整個(gè)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行基因表達(dá)測(cè)定。烈冰單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序助您探究細(xì)胞類型特異性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)特征,。長沙10X單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)支持

基于10XGeomics動(dòng)態(tài)微流控技術(shù),，利用Tn5轉(zhuǎn)座酶酶切開放染色質(zhì)，形成短片段,，單細(xì)胞ATAC測(cè)序在表觀基因組學(xué)水平上,，揭示單細(xì)胞染色質(zhì)的可及性問題，區(qū)分細(xì)胞異質(zhì)性,，獲得開放染色質(zhì)的位置,、轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)、核小體的調(diào)控區(qū)域和染色質(zhì)狀態(tài)等信息,，是單細(xì)胞表觀遺傳學(xué)的重要突破：分析每個(gè)細(xì)胞數(shù)千個(gè)獨(dú)特的染色質(zhì)開放區(qū)域,，識(shí)別細(xì)胞類型和細(xì)胞狀態(tài)；識(shí)別重要的轉(zhuǎn)錄因子,，進(jìn)行譜系和發(fā)育追蹤,；探究驅(qū)動(dòng)細(xì)胞類型和狀態(tài)之間基因表達(dá)差異的非編碼序列；探究細(xì)胞類型特異性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)特征等,。是當(dāng)前重要的多組學(xué)研究基因表達(dá)和表觀遺傳學(xué)的手段,。10X Chromium X單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)遍地開花，烈冰服務(wù)讓您的醫(yī)學(xué)研究如虎添翼,。

二代測(cè)序技術(shù)在測(cè)序方法上取得了重大突破,，基于“邊合成邊測(cè)序”（sequencingbysynthesis）和大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)（massiveparallelanalysis,MPS）,，使測(cè)序通量和讀取速度得到極大提升，例如IlluminaSolexa測(cè)序儀,。Illumina的測(cè)序原理可以簡(jiǎn)化為四步：樣品文庫構(gòu)建,、簇生成、測(cè)序和數(shù)據(jù)分析,。由于讀長限制,，樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段，并在3和5端接上3種序列：1）Index,，用于區(qū)分樣品來源,；2）Adapter，用于結(jié)合測(cè)序通道上的位點(diǎn),；3）Primerbindingsite,，用于結(jié)合PCR引物啟動(dòng)擴(kuò)增反應(yīng)。

針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié)：主要是對(duì)細(xì)胞數(shù)量,、基因表達(dá)量,、測(cè)序質(zhì)量進(jìn)行整體描述。過濾標(biāo)準(zhǔn)：由于細(xì)胞破碎后游離RNA會(huì)釋放到環(huán)境或孔中,，并且測(cè)序中也會(huì)存在一些死細(xì)胞,，導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值。因此,，我們需要設(shè)定一定的標(biāo)準(zhǔn)來過濾掉假細(xì)胞或死細(xì)胞,。以10×Genomics為例，細(xì)胞數(shù)量判斷主要通過分析UMICounts-Barcode曲線斜率拐點(diǎn),，當(dāng)存在多個(gè)斜率拐點(diǎn)的時(shí)候,，結(jié)合預(yù)期UMI=500時(shí)的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行過濾。當(dāng)斜率拐點(diǎn)低于UMI=500的時(shí)候,，選擇UMI=500作為細(xì)胞的判斷的標(biāo)準(zhǔn),；否則，選擇和預(yù)期細(xì)胞數(shù)量接近的拐點(diǎn)作為細(xì)胞判斷的位置,。這樣我們能夠有效獲得真實(shí)的并且在基因數(shù)量上可以分析的數(shù)據(jù),。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)提供了單個(gè)細(xì)胞水平下的科學(xué)研究視角。

從單細(xì)胞測(cè)序描述性分析轉(zhuǎn)向復(fù)雜樣本中不同細(xì)胞類型的功能解析,，越來越需要一種多組學(xué)的細(xì)胞生物學(xué)視角,。通過單細(xì)胞多組學(xué)——即對(duì)不同組學(xué)的數(shù)據(jù)集進(jìn)行分析和整合——科學(xué)家能夠從同一個(gè)單細(xì)胞來源中檢測(cè)多種細(xì)胞特征,。這些特征包括全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá),、細(xì)胞表面蛋白表達(dá)、免疫組庫序列（包括T細(xì)胞和B細(xì)胞受體）以及用于了解表觀基因組調(diào)控的開放染色質(zhì)區(qū)域,。隨著單個(gè)實(shí)驗(yàn)可提供更多信息豐富的數(shù)據(jù),，研究人員的獲益更多,，包括保留珍貴樣本、提高生產(chǎn)力,、減少因批次效應(yīng)引起的錯(cuò)誤,，并節(jié)省更多的高科技資源（從資助基金到人員時(shí)間）。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次突破性的改變,，一次對(duì)幾十萬到幾百萬條核酸序列進(jìn)行測(cè)定,。南通高通量測(cè)序單細(xì)胞測(cè)序

十二年測(cè)序經(jīng)驗(yàn)，累計(jì)服務(wù)與5000余項(xiàng)重要科研項(xiàng)目,。長沙10X單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)支持

烈冰與國內(nèi)高校,、研究所、醫(yī)院和藥企單位開展深度合作,，服務(wù)于600+臨床與研究機(jī)構(gòu),，1000+客戶和5000+重要科研項(xiàng)目，助力并聯(lián)合發(fā)表300+篇CNS等國際學(xué)術(shù)期刊（不完全統(tǒng)計(jì)）,，在單細(xì)胞領(lǐng)域,，烈冰助力用戶發(fā)表單細(xì)胞文獻(xiàn)30+篇，總IF＞300+,，IF＞10+以上文章占比65%以上,，包含Immunity、NatureCellBiology,、NaturePlants,、AdvancedScience等生物領(lǐng)域國際主流學(xué)術(shù)期刊，已發(fā)表文章研究領(lǐng)域涵蓋包括COVID-19研究,、疾病發(fā)生轉(zhuǎn)移機(jī)制,，免疫研究、腦神經(jīng),、白血病,、胚胎發(fā)育、糖尿病,、退行性疾病和植物領(lǐng)域研究等,。長沙10X單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)支持

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