單細(xì)胞測序是指針對單個細(xì)胞進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測序分析,，可精確地描述每一個細(xì)胞的狀態(tài),，在異質(zhì)性發(fā)育過程中具有特殊的應(yīng)用價值,。然而,，單細(xì)胞測序無法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息，對于揭示發(fā)育過程,、病理微環(huán)境都存在很大的局限性,。空間轉(zhuǎn)錄組測序以點(diǎn)陣形式記錄病理切片細(xì)胞的空間信息并進(jìn)行測序,，可以精確指示點(diǎn)陣內(nèi)的全部基因表達(dá)情況,。空間轉(zhuǎn)錄組測序的加入,，無疑讓單細(xì)胞測序如虎添翼,，更精確地勾勒了組織水平的異質(zhì)性。助力探索生命時空多維度的動態(tài)變化的生物學(xué)信息,；助力醫(yī)療健康時代,！武漢10X Chromium X單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析

一味的追求高細(xì)胞數(shù)量的捕獲，小心得不償失,，原因在這：單細(xì)胞測序所有的分析都是基于細(xì)胞聚類進(jìn)行,，而細(xì)胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后,，獲得細(xì)胞基因表達(dá)譜，通過降維（pca）,，無監(jiān)督聚類以及可視化（t-SNE）得到的,。進(jìn)行細(xì)胞聚類時需要考慮到每個細(xì)胞的基因表達(dá)模式，因此即使是相同的數(shù)據(jù),，在剔除幾個細(xì)胞的情況下,，前后獲得的聚類圖也會出現(xiàn)明顯不同。而當(dāng)細(xì)胞捕獲數(shù)過多時,，無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細(xì)胞數(shù)據(jù),，都會對正常細(xì)胞聚類產(chǎn)生影響，造成聚類結(jié)果失真,。這也是很多文章,，特別是很多高分文章，為什么單個樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在2000-3000的原因了,。烈冰建議單個樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在3000-5000個時,，數(shù)據(jù)量在100G左右時，可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求,。上海10X Genomics單細(xì)胞測序商業(yè)化服務(wù)單細(xì)胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破,。

FluidigmC1平臺作為應(yīng)用于單細(xì)胞測序（SingleCellRNASequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù)，基于富魯達(dá)（Fluidigm®）的微流控技術(shù),，大約在幾個小時中可以捕獲96個左右的細(xì)胞,，進(jìn)行各類的Single-Cell測序建庫。當(dāng)然,，通量還是比較小。但不可否認(rèn)的是,，現(xiàn)在很多非RNA類SingleCell測序,，仍然在采用這樣的技術(shù)，如SingleCellDNA-Seq,，SingleCellATAC-Seq等,，都是采用此技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞分選后再分別用不同試劑盒建庫。所以可以說,，至少在10X和BD,，或者其他企業(yè)推出有效的SingleDNA測序技術(shù)之前，C1仍然會是市場上的重要組成部分,。

關(guān)于單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)樣本制備,，這與流式細(xì)胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致，也就是通過酶促或機(jī)械消化,、細(xì)胞分選或其他細(xì)胞分離技術(shù)從整個樣本中制備生成活的單細(xì)胞懸液,。隨后是細(xì)胞計(jì)數(shù)和質(zhì)量控制步驟,，以確保您的樣本有適當(dāng)濃度的活細(xì)胞，并且不含細(xì)胞團(tuán)塊和死細(xì)胞碎片,。如有必要,，您還可以使用抗體對樣本進(jìn)行染色，標(biāo)記細(xì)胞表面蛋白或其他生物分析物,，或者通過FACS來富集感興趣的細(xì)胞類型,。解離樣本時采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)而定。也許需要額外的制備步驟,，具體取決于組織質(zhì)量,、樣本豐度、細(xì)胞大小,，以及是否需要提取出細(xì)胞核進(jìn)行染色質(zhì)可接近性分析,。無論具體的考慮因素如何，所有樣本類型都遵循同一個基本原則,，那就是生成高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液,。烈冰生物成立于2010年，專注于單細(xì)胞測序領(lǐng)域科研服務(wù),。

現(xiàn)有的單細(xì)胞測序技術(shù)陣營在幾個主要領(lǐng)域存在差別,。一個是分隔單個細(xì)胞以在其中進(jìn)行微反應(yīng)的物理平臺。在這個空間,，單個細(xì)胞的內(nèi)容物釋放,，轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引，以便下游識別?，F(xiàn)有技術(shù)的另一個主要區(qū)別是如何添加索引,，就像生成測序文庫所涉及的流程步驟一樣。10XGenomics單細(xì)胞測序平臺采用動態(tài)微流控技（Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理）,。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,，其中一列縱向孔道輸入細(xì)胞，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上,，并通過微流控技術(shù),，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中,。這時候,，就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細(xì)胞以及一個凝膠微珠,，那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的CellBarcode和UMIBarcode連接形成的序列,，再加上一端PolyT的抓手，構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠,。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligodT抓住mRNA構(gòu)建文庫,。烈冰對于一個細(xì)胞群體中的每個細(xì)胞單獨(dú)進(jìn)行建庫測序分析,。長沙10X Chromium X單細(xì)胞測序商業(yè)化服務(wù)

測序可準(zhǔn)確地分析基因表達(dá)差異、基因結(jié)構(gòu)變異,、篩選分子標(biāo)記（SNPs或SSR）等生命科學(xué)重要問題,。武漢10X Chromium X單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析

樣本制備后的保存為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化，在對細(xì)胞進(jìn)行清洗和計(jì)數(shù)后,，單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上,，直至用于后續(xù)的上機(jī)和文庫制備步驟。在理想狀況下,，一旦制備好樣本,，應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟。然而,，您還有必要了解各類細(xì)胞的不同性質(zhì),，因?yàn)檫@可能會影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時間，以及它們在制備后多久便應(yīng)當(dāng)被盡快使用,。例如,，有些細(xì)胞（如PBMC）如果在冰上放置一段時間，它們就開始形成團(tuán)塊,。這些團(tuán)塊很難解離,，增加了堵塞的風(fēng)險，而且每個團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計(jì)數(shù),，又降低了細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,。此外，有些細(xì)胞更加粘稠,，形成團(tuán)塊的速度更快,。對于這些細(xì)胞，必須盡量減少制備和使用之間的時間差武漢10X Chromium X單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析

上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司總部位于江月路999號奇亞特中心22幢,，是一家生物科技,、醫(yī)藥科技、信息科技,、計(jì)算機(jī)科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)服務(wù),、技術(shù)轉(zhuǎn)讓,、技術(shù)咨詢，市場營銷策劃,，市場信息咨詢與調(diào)查（不得從事社會調(diào)查,、社會調(diào)研、民意調(diào)查,、民意測驗(yàn)）,，從事貨物及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù),，計(jì)算機(jī)、軟件及耗材（除?？兀?，軟件開發(fā)【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目，經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動】的公司,。烈冰生物深耕行業(yè)多年,，始終以客戶的需求為向?qū)В瑸榭蛻籼峁└哔|(zhì)量的單細(xì)胞測序,，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺,，空間轉(zhuǎn)錄組測序，單細(xì)胞多組學(xué)測序,。烈冰生物繼續(xù)堅(jiān)定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路,，既要實(shí)現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長，又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域,，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破,。烈冰生物始終關(guān)注醫(yī)藥健康行業(yè)。滿足市場需求,，提高產(chǎn)品價值,，是我們前行的力量。