單細(xì)胞測(cè)序是指針對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析,，可精確地描述每一個(gè)細(xì)胞的狀態(tài),，在異質(zhì)性發(fā)育過(guò)程中具有特殊的應(yīng)用價(jià)值。然而,，單細(xì)胞測(cè)序無(wú)法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息,，對(duì)于揭示發(fā)育過(guò)程,、病理微環(huán)境都存在很大的局限性,。空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序以點(diǎn)陣形式記錄病理切片細(xì)胞的空間信息并進(jìn)行測(cè)序,，可以精確指示點(diǎn)陣內(nèi)的全部基因表達(dá)情況,。空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的加入,，無(wú)疑讓單細(xì)胞測(cè)序如虎添翼,，更精確地勾勒了組織水平的異質(zhì)性。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次顛覆性的改變,，一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條核酸序列進(jìn)行測(cè)定,。吉林10X Chromium X單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)

單細(xì)胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個(gè)共同過(guò)程,，即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析,。不過(guò),，每種分析在開(kāi)展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA,，然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA,。RNA-seq是使用cDNA來(lái)構(gòu)建新一代測(cè)序文庫(kù)，從而測(cè)定整個(gè)轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá),。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn),，并通過(guò)熒光測(cè)定表達(dá)水平。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn),，而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無(wú)偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析,。然而，這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況,。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或單個(gè)微反應(yīng)容器中,。然后用細(xì)胞特異性的條形碼標(biāo)記RNA，確保來(lái)自每個(gè)細(xì)胞的cDNA可以追溯到起源細(xì)胞,。與RNA-seq相似,，帶有條形碼的cDNA也被用于構(gòu)建新一代測(cè)序文庫(kù)，從而能夠?qū)γ總€(gè)細(xì)胞的整個(gè)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行基因表達(dá)測(cè)定,。沈陽(yáng)單細(xì)胞測(cè)序百萬(wàn)通量平臺(tái)過(guò)去的十年,，我們是知識(shí)的承載者；現(xiàn)在,，我們?cè)谂?gòu)建醫(yī)學(xué)的大數(shù)據(jù)時(shí)代,；未來(lái)我們將重新定義知識(shí)形態(tài)！

基于10XGeomics動(dòng)態(tài)微流控技術(shù),，利用Tn5轉(zhuǎn)座酶酶切開(kāi)放染色質(zhì),，形成短片段，單細(xì)胞ATAC測(cè)序在表觀基因組學(xué)水平上,，揭示單細(xì)胞染色質(zhì)的可及性問(wèn)題,，區(qū)分細(xì)胞異質(zhì)性，獲得開(kāi)放染色質(zhì)的位置,、轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn),、核小體的調(diào)控區(qū)域和染色質(zhì)狀態(tài)等信息，是單細(xì)胞表觀遺傳學(xué)的重要突破：分析每個(gè)細(xì)胞數(shù)千個(gè)獨(dú)特的染色質(zhì)開(kāi)放區(qū)域,，識(shí)別細(xì)胞類(lèi)型和細(xì)胞狀態(tài),；識(shí)別重要的轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)行譜系和發(fā)育追蹤,；探究驅(qū)動(dòng)細(xì)胞類(lèi)型和狀態(tài)之間基因表達(dá)差異的非編碼序列,；探究細(xì)胞類(lèi)型特異性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)特征等。是當(dāng)前重要的多組學(xué)研究基因表達(dá)和表觀遺傳學(xué)的手段。

10XGenomics是一種基于drop的微流控技術(shù),，液體在配套芯片中的微管道中流動(dòng),，因此細(xì)胞直徑會(huì)受到芯片中微管道直徑的限制，微流體通道的直徑約為50~60um,，因此捕獲細(xì)胞的直徑不能超過(guò)40um,。當(dāng)細(xì)胞直徑過(guò)大時(shí)，容易出現(xiàn)管道堵塞,，造成GEM生成失敗,，對(duì)于神經(jīng)科學(xué)研究和心血管疾病研究的老師而言，準(zhǔn)備采用單細(xì)胞技術(shù)用于課題研究的時(shí)候,，往往會(huì)遇到一個(gè)尷尬的問(wèn)題,，就是目標(biāo)細(xì)胞，例如神經(jīng)元細(xì)胞,、成熟心肌細(xì)胞由于體積過(guò)大,，不適用于10X單細(xì)胞技術(shù)。其中神經(jīng)元細(xì)胞的直徑很大,，直接超過(guò)了芯片中管道的直徑,，雖然心肌細(xì)胞直徑低于50um，但是成熟心肌細(xì)胞的長(zhǎng)度很長(zhǎng),，有可能堵塞通道造成實(shí)驗(yàn)失敗,，這也是為什么現(xiàn)在很多已發(fā)表的心臟單細(xì)胞文章，主要研究方向是心臟發(fā)育的原因了,，主要還是因?yàn)槲窗l(fā)育成熟的心肌細(xì)胞比較小,，不會(huì)出現(xiàn)堵塞管道的風(fēng)險(xiǎn)。因此可以考慮組織解離后過(guò)40um濾網(wǎng),，過(guò)濾掉大細(xì)胞，避免出現(xiàn)管道堵塞,、實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn),。此種方案的缺點(diǎn)是大細(xì)胞被過(guò)濾掉，丟失相關(guān)細(xì)胞數(shù)據(jù),；另外組織解離獲得高質(zhì)量細(xì)胞懸液以后,，繼續(xù)做細(xì)胞裂解抽細(xì)胞核，開(kāi)展細(xì)胞核測(cè)序,。具體可訪問(wèn)烈冰官網(wǎng)給我們留言,，烈小冰將安排專(zhuān)業(yè)技術(shù)為您詳細(xì)解答。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的迅速發(fā)展和應(yīng)用推廣,，為從多維度揭示疾病發(fā)展提供了強(qiáng)有力的工具,。

科技的發(fā)展讓單細(xì)胞測(cè)序已經(jīng)應(yīng)用于疾病發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵過(guò)程和事件，如前病變向惡性的轉(zhuǎn)化,、惡性向轉(zhuǎn)移性的發(fā)展,，以及對(duì)多種用藥的反應(yīng),。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)作為一個(gè)需要將組織解離成為單細(xì)胞懸液，或者是采用細(xì)胞核捕獲的策略捕獲單細(xì)胞核,，進(jìn)而對(duì)于每一個(gè)單細(xì)胞或者細(xì)胞核進(jìn)行測(cè)序得到結(jié)果的技術(shù),，其空間定位信息是丟失的。這就衍生出了一個(gè)問(wèn)題就是如果單細(xì)胞A與B并不出現(xiàn)在一個(gè)組織區(qū)域中他們會(huì)互相影響或者轉(zhuǎn)化么,？免疫研究中,，兩個(gè)具有非常強(qiáng)的PDL1-PD1的配對(duì)關(guān)系的細(xì)胞在組織切片上風(fēng)馬牛不相及，這樣PDL1-PD1的關(guān)系會(huì)生效么,？單細(xì)胞測(cè)序因其強(qiáng)大的探究疾病--細(xì)胞--基因的關(guān)系,，一度成為高通量測(cè)序技術(shù)的“天花板”。吉林10X單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)支持

烈冰測(cè)序服務(wù)已助力300余篇國(guó)際期刊研究文章發(fā)表,。吉林10X Chromium X單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)

單細(xì)胞獲得困難,，不同組織要求不盡相同難以搞定？烈冰2000+項(xiàng)目消化經(jīng)驗(yàn),，100+組織類(lèi)型解離protocol,，精心設(shè)計(jì)不同組織實(shí)驗(yàn)的解離、細(xì)胞懸浮實(shí)驗(yàn)體系,，確保單細(xì)胞的獲得,。凍存樣本無(wú)法實(shí)驗(yàn)，珍貴樣本無(wú)法使用,？烈冰采用國(guó)際認(rèn)可的凍存組織復(fù)蘇技術(shù)以及死細(xì)胞過(guò)濾技術(shù),，確保凍存組織使用。珍貴樣本,，細(xì)胞數(shù)量太少,，消化背景雜無(wú)法做單細(xì)胞？采用國(guó)際認(rèn)可的10XGenomics,，BDRhapsody雙平臺(tái)模式,，根據(jù)樣本實(shí)際情況和用戶需求提供客觀有效的實(shí)驗(yàn)方案,細(xì)胞量少，背景雜也能做單細(xì)胞,。單細(xì)胞RNA分類(lèi)精度不足,，部分細(xì)胞無(wú)法細(xì)分？烈冰同時(shí)采用單細(xì)胞蛋白質(zhì)組與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù),，真正做到從上游到下游的全流程檢測(cè),，確保超高的細(xì)胞分類(lèi)精度。吉林10X Chromium X單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)

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