單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)(SingleCellSequencing)從一種新興的研究角度,,借助已有的高通量測(cè)序手段,,幫助研究者在樣本中細(xì)胞的異質(zhì)性,、免疫微環(huán)境,、發(fā)育學(xué)、免疫學(xué)以及其他領(lǐng)域中進(jìn)行單細(xì)胞層面的數(shù)據(jù)解析,,解決了BulkPopulationSequencing所無(wú)法解決的問(wèn)題,。這樣一個(gè)新的研究領(lǐng)域必然也需要足夠可靠的實(shí)驗(yàn)手段來(lái)支撐,。BDRhapsody單細(xì)胞分選系統(tǒng)為此提供了完善的硬件設(shè)備,,保證了從單細(xì)胞懸液質(zhì)量評(píng)估到單細(xì)胞分選標(biāo)記過(guò)程中每一個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟的準(zhǔn)確質(zhì)控,。NovelBio單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)借助BDRhapsody單細(xì)胞分選系統(tǒng),在實(shí)驗(yàn)實(shí)施層面對(duì)單細(xì)胞測(cè)序結(jié)果的可靠性提供了強(qiáng)有力的保證,。繼單細(xì)胞懸液制備之后,,又在另一道關(guān)鍵關(guān)卡提供了可靠的支持,幫助研究者在單細(xì)胞測(cè)序領(lǐng)域收獲更多的成果,。全線搭建10X Genomics Chromium Controller單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái),。南京10X Genomics單細(xì)胞測(cè)序商業(yè)化服務(wù)
單細(xì)胞RNA-seq,、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR(RT-qPCR)都采用一個(gè)共同過(guò)程,即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析,。不過(guò),每種分析在開展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同,。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA,,然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA。RNA-seq是使用cDNA來(lái)構(gòu)建新一代測(cè)序文庫(kù),,從而測(cè)定整個(gè)轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá),。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn),并通過(guò)熒光測(cè)定表達(dá)水平,。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn),,而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無(wú)偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析。然而,,這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況,。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或單個(gè)微反應(yīng)容器中。然后用細(xì)胞特異性的條形碼標(biāo)記RNA,,確保來(lái)自每個(gè)細(xì)胞的cDNA可以追溯到起源細(xì)胞,。與RNA-seq相似,帶有條形碼的cDNA也被用于構(gòu)建新一代測(cè)序文庫(kù),,從而能夠?qū)γ總€(gè)細(xì)胞的整個(gè)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行基因表達(dá)測(cè)定,。蘇州10X單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)支持烈冰引進(jìn)國(guó)際主流單細(xì)胞和空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序平臺(tái),保障細(xì)胞精度的前提下提供組織內(nèi)部精細(xì)區(qū)域的空間信息,。
基因和基因產(chǎn)物并不是單獨(dú)運(yùn)作的,,而是參與了相互關(guān)聯(lián)的復(fù)雜通路、網(wǎng)絡(luò)和分子系統(tǒng),,這些合在一起實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞,、組織和生物體的運(yùn)作。定義這些系統(tǒng)并確定它們的特征和相互作用,,對(duì)于了解生物系統(tǒng)如何運(yùn)作至關(guān)重要,。”為了推動(dòng)科學(xué)發(fā)現(xiàn),,科學(xué)家們需要各種能夠幫助多方位了解其樣本的潛在生物復(fù)雜性的研究工具,。對(duì)于越來(lái)越多的研究人員來(lái)說(shuō),單細(xì)胞RNA測(cè)序和單細(xì)胞多組學(xué)——即在單細(xì)胞分辨率下對(duì)基因表達(dá)及其他基于DNA,、RNA或蛋白質(zhì)的分析物進(jìn)行定量分析的基因組方法——在幫助解決他們面臨的生物學(xué)問(wèn)題上已證實(shí)是行之有效的,。
基于10XNextGEM技術(shù),單細(xì)胞測(cè)序一次實(shí)驗(yàn)可以同時(shí)檢測(cè)近萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,,可在一個(gè)樣本中同時(shí)獲3端mRNA表達(dá)譜,、如需和免疫組庫(kù)(TCR和BCR)的數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合時(shí),,即某些研究還需結(jié)合基因的表達(dá)譜和V(D)J數(shù)據(jù)進(jìn)行復(fù)雜組織樣本的是影響免疫應(yīng)答分析,監(jiān)測(cè)免疫療法的效果,,研究疾病發(fā)生,、發(fā)展的分子機(jī)制,可進(jìn)行單細(xì)胞免疫組庫(kù)測(cè)序:烈冰單細(xì)胞免疫組庫(kù)平臺(tái)具備:1000+項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn),,一次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)獲取1000-20000個(gè)細(xì)胞的文庫(kù)構(gòu)建,,獲得轉(zhuǎn)錄組和免疫組數(shù)據(jù);具備完善的免疫組庫(kù)測(cè)序和實(shí)驗(yàn)質(zhì)控流程,,獲取V(D)J全長(zhǎng)序列的配對(duì)信息,;豐富的免疫組庫(kù)測(cè)序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗(yàn),實(shí)現(xiàn)專屬個(gè)性化數(shù)據(jù)分析服務(wù),,搭配單細(xì)胞分析云平臺(tái),,一鍵導(dǎo)出交互性的動(dòng)態(tài)結(jié)果報(bào)告。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次突破性的改變,,一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條核酸序列進(jìn)行測(cè)定,。
現(xiàn)有的單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)陣營(yíng)在幾個(gè)主要領(lǐng)域存在差別。一個(gè)是分隔單個(gè)細(xì)胞以在其中進(jìn)行微反應(yīng)的物理平臺(tái),。在這個(gè)空間,,單個(gè)細(xì)胞的內(nèi)容物釋放,轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引,,以便下游識(shí)別?,F(xiàn)有技術(shù)的另一個(gè)主要區(qū)別是如何添加索引,就像生成測(cè)序文庫(kù)所涉及的流程步驟一樣,。10XGenomics單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)采用動(dòng)態(tài)微流控技(Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理),。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,其中一列縱向孔道輸入細(xì)胞,,凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會(huì)吸附在凝膠微珠上,,并通過(guò)微流控技術(shù),將之輸入到第二縱向孔道,,即油相孔道中,。這時(shí)候,就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中,。每一個(gè)油滴中會(huì)落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠,,那么在每一個(gè)凝膠微珠中上長(zhǎng)滿了不同的CellBarcode和UMIBarcode連接形成的序列,再加上一端PolyT的抓手,,構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠,。而這個(gè)凝膠微珠抓手就會(huì)使用oligodT抓住mRNA構(gòu)建文庫(kù)。烈冰一站式單細(xì)胞測(cè)序服務(wù):立足科學(xué)研究,,解碼生命本質(zhì),。陜西高通量測(cè)序單細(xì)胞測(cè)序多組學(xué)測(cè)序
豐富的測(cè)序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗(yàn),,烈冰配套全程個(gè)性化、定制化地?cái)?shù)據(jù)分析服務(wù),。南京10X Genomics單細(xì)胞測(cè)序商業(yè)化服務(wù)
細(xì)胞中基因的表達(dá)是嚴(yán)格按照時(shí)間和空間順序發(fā)生,,因此細(xì)胞類型和基因表達(dá)具有時(shí)間特異性和空間特異性。時(shí)間特異性可以通過(guò)收集不同時(shí)間點(diǎn)的樣本進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序來(lái)分析,。但是單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(scRNA-Seq)在單細(xì)胞懸液制備的過(guò)程中破壞了細(xì)胞的空間結(jié)構(gòu),,無(wú)法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息。而空間轉(zhuǎn)錄組可以解決這個(gè)問(wèn)題,,其以點(diǎn)陣形式記錄組織切片細(xì)胞的空間信息,在保留組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,,獲得細(xì)胞/基因的空間表達(dá)特異性,。南京10X Genomics單細(xì)胞測(cè)序商業(yè)化服務(wù)
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