由于高通量測(cè)序?qū)嶒?yàn)方法相關(guān)的測(cè)序成本，使得單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)往往非常昂貴,，烈冰生物BDRhapsody單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)珍視您的每一份樣本,，在平臺(tái)搭建前，我們測(cè)試評(píng)估了BDRhapsody的性能,，與BD官方公布的數(shù)據(jù)結(jié)合來(lái)看,，將人293T和小鼠NIH/3T3細(xì)胞的1:1混合物以不同濃度上樣到BDRhapsody卡式芯片上。存儲(chǔ)的cDNA分子普遍擴(kuò)增并進(jìn)行低通量測(cè)序（每個(gè)細(xì)胞月8700個(gè)讀數(shù)）,。在測(cè)序數(shù)據(jù)中檢測(cè)到1109個(gè)細(xì)胞的上樣條件下,，每個(gè)細(xì)胞中，來(lái)自每個(gè)細(xì)胞的平均99.4%的分子經(jīng)檢測(cè)為人或小鼠,，這表明微孔之間的串?dāng)_非常小,，在測(cè)序數(shù)據(jù)中檢測(cè)到1000個(gè)或更少細(xì)胞的上樣密度下，多重態(tài)發(fā)生率接近零,，并且在15000個(gè)細(xì)胞下小于5%,。烈冰生物為您提供一站式全流程高通量BD 單細(xì)胞測(cè)序服務(wù),。濟(jì)南BD Rhapsody單細(xì)胞服務(wù)機(jī)構(gòu)

現(xiàn)有的單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)陣營(yíng)在幾個(gè)主要領(lǐng)域存在差別。一個(gè)是基于微流控通道的細(xì)胞與Beads的在通道內(nèi)的動(dòng)態(tài)結(jié)合,，通過(guò)油相水相不相容的特點(diǎn)將結(jié)合了的細(xì)胞和Beads進(jìn)行分隔,，在這個(gè)空間，單個(gè)細(xì)胞的內(nèi)容物釋放，轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引,，以便下游識(shí)別。BDRhapsody單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)采用靜態(tài)微孔技術(shù)（Cyto-Seq具有類似的技術(shù)原理）。通過(guò)微孔板的物理分隔,，將一個(gè)個(gè)單個(gè)細(xì)胞和帶有標(biāo)簽的磁珠,，一對(duì)一的“框”在微反應(yīng)的物理平臺(tái)中,。這樣,，每一個(gè)細(xì)胞都會(huì)結(jié)合一個(gè)磁珠,，那么在每一個(gè)磁珠中上長(zhǎng)滿了不同的CellBarcode和UMIBarcode連接形成的序列,，再加上一端PolyT的抓手，這個(gè)抓手就會(huì)使用oligodT抓住mRNA構(gòu)建文庫(kù),。廣州scRNA單細(xì)胞平臺(tái)搭建多種測(cè)序數(shù)據(jù)的生物信息分析平臺(tái),，5000+項(xiàng)目檢驗(yàn)，真實(shí)可信賴,。

為什么需要單細(xì)胞分辨率,？生物學(xué)就像宇宙一樣。它非常復(fù)雜,，有許多獨(dú)特的單體,，也就是細(xì)胞。這些細(xì)胞相互作用并扮演不同的角色,，在更大的體系中構(gòu)建并驅(qū)動(dòng)多個(gè)過(guò)程,。就像伽利略探索宇宙的努力一樣，發(fā)現(xiàn)和定義這些細(xì)胞也需要高分辨率的工具,，才能解開(kāi)促成生物學(xué)復(fù)雜性的基因表達(dá)異質(zhì)性,。單細(xì)胞測(cè)序能夠在以一個(gè)細(xì)胞為功能單位中開(kāi)展生物學(xué)研究，闡明具體細(xì)節(jié),，構(gòu)建出一幅更大,、更精細(xì)的圖譜，說(shuō)明導(dǎo)致產(chǎn)生某種外在表型的不同類型的分子和細(xì)胞之間是如何相互作用的：患者為什么會(huì)復(fù)發(fā),？是什么讓這種疫苗能夠有效防止傳染等等諸多問(wèn)題,。

針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié)：主要是對(duì)細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量,、測(cè)序質(zhì)量進(jìn)行整體描述,。過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)：由于細(xì)胞破碎后游離RNA會(huì)釋放到環(huán)境或孔中，并且測(cè)序中也會(huì)存在一些死細(xì)胞，導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值,。因此,，我們需要設(shè)定一定的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)過(guò)濾掉假細(xì)胞或死細(xì)胞。以10×Genomics為例,，細(xì)胞數(shù)量判斷主要通過(guò)分析UMICounts-Barcode曲線斜率拐點(diǎn),，當(dāng)存在多個(gè)斜率拐點(diǎn)的時(shí)候，結(jié)合預(yù)期UMI=500時(shí)的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行過(guò)濾,。當(dāng)斜率拐點(diǎn)低于UMI=500的時(shí)候,，選擇UMI=500作為細(xì)胞的判斷的標(biāo)準(zhǔn)；否則,，選擇和預(yù)期細(xì)胞數(shù)量接近的拐點(diǎn)作為細(xì)胞判斷的位置,。這樣我們能夠有效獲得真實(shí)的并且在基因數(shù)量上可以分析的數(shù)據(jù)。烈冰生物全國(guó)五大實(shí)驗(yàn)中心,，多地部署B(yǎng)D Rahpsody平臺(tái),，助您的樣本更快速抵達(dá)“戰(zhàn)場(chǎng)”。

據(jù)不完全統(tǒng)計(jì),，截至2022年6月,，烈冰生物助力發(fā)表單細(xì)胞文章近40篇，從平臺(tái)應(yīng)用比例來(lái)看,，應(yīng)用10XGenomics和BDRhapsody兩大平臺(tái)發(fā)文比例各占50%左右,，研究類型涵蓋疾病發(fā)展，靶點(diǎn)探索,，免疫研究,，神經(jīng)發(fā)育，干細(xì)胞分化,，植物發(fā)育,，退行病變，糖尿病,，COVID-19等等研究；從發(fā)表期刊水平來(lái)看,，烈冰生物聯(lián)合發(fā)表的單細(xì)胞文章,，CNS一區(qū)期刊占比在30%以上，其中包括immunity三篇,，Nature子刊3篇（Naturecellbiology,NaturePlants,，Naturecommunication）,風(fēng)濕類領(lǐng)域ARD期刊1篇，CUT1篇,，AdvancedScience多篇,，IF大于10分以上文章占比高達(dá)68.5%，烈冰專屬單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)團(tuán)隊(duì)，將與您攜手譜寫(xiě)下一篇“高分”新文章,。單細(xì)胞測(cè)序是高通量測(cè)序下的又一重大技術(shù)突破,。廣州scRNA單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序

BD平臺(tái)基于cyto-seq技術(shù)，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞和磁珠的一對(duì)一結(jié)合,。濟(jì)南BD Rhapsody單細(xì)胞服務(wù)機(jī)構(gòu)

什么時(shí)候要用到去死細(xì)胞的操作呢,？跟進(jìn)烈冰生物多年單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，當(dāng)細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)量和活性檢測(cè)后,，考慮對(duì)細(xì)胞活性在50%-70%的懸液進(jìn)行去除死細(xì)胞的操作,。而太低活性的懸液（小于30%），懸液中細(xì)胞大量死亡,，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細(xì)胞比例和狀態(tài),，失真嚴(yán)重，建議重新收集樣本進(jìn)行新的實(shí)驗(yàn),，保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。但需要注意到，去除死細(xì)胞的操作會(huì)損失一定的細(xì)胞數(shù)量,，因此希望您在提供樣本時(shí),，盡可能提供足量的細(xì)胞，以備實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能存在的細(xì)胞死亡的問(wèn)題,，BDRhapsody單細(xì)胞捕獲平臺(tái)對(duì)樣本起始細(xì)胞量的要求較低,，一般提供10萬(wàn)個(gè)細(xì)胞以上均可滿足需求，特殊樣本可詳細(xì)咨詢烈冰生物,。濟(jì)南BD Rhapsody單細(xì)胞服務(wù)機(jī)構(gòu)

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