芯片平臺作為目前比較成熟的篩選工具,,已經(jīng)在很多領(lǐng)域有了相應(yīng)的應(yīng)用。多家芯片公司在DNA甲基化這塊兒有了相應(yīng)的產(chǎn)品提供,,其中應(yīng)用**為***的就Agilent平臺和Illumina平臺,相應(yīng)的產(chǎn)品包括Agilent Human CpG Island Microarray Kit,Infinium HumanMethylation27 BeadChip和Infinium HumanMethylation450K BeadChip,。另外Roche NimbleGen和Affymetrix也有相應(yīng)的芯片推出,,但是NimbleGen的芯片今年下半年已經(jīng)停產(chǎn)不同的芯片平臺,,各自的實(shí)驗(yàn)過程也是不一樣的。安捷倫前期采用的甲基化DNA免疫共沉淀(MeDIP)技術(shù),。將基因組DNA分成兩份,,一份用來做 MeDIP,另一份作為對照,。兩個(gè)樣品都標(biāo)記熒光(富集的樣品用Cy5標(biāo)記,,對照用Cy3標(biāo)記),,然后與芯片雜交,。芯片上每個(gè)探針的Cy5/Cy3強(qiáng)度比例顯示出該區(qū)域的甲基化程度。ChIP-Seq 能實(shí)現(xiàn)真正的全基因組分析,。上海MeDIP-SeqDNA甲基化方案
低甲基化,,原*基因***正常細(xì)胞中,由于甲基化作用原*基因多處于沉默狀態(tài),,但在多種**細(xì)胞中,,均發(fā)現(xiàn)原*基因處于低甲基化狀態(tài),并且低甲基化狀態(tài)與其蛋白表達(dá)升高密切相關(guān),,表明低甲基化狀態(tài)可使原*基因***,。轉(zhuǎn)座子活化轉(zhuǎn)座子是可移動的基因序列,包括LINE-1,、HERV-K等,,在人類基因組中含量豐富,正常情況下處于被甲基化狀態(tài)而轉(zhuǎn)錄沉默,。而在**細(xì)胞中,,由于基因組總體甲基化水平的降低,這些序列也因去甲基化而活化,,轉(zhuǎn)移位置導(dǎo)致基因片段的插入和缺失,。天津hMeDIP-SeqDNA甲基化歡迎咨詢?nèi)祟惢蚪M有約56M的CpG位點(diǎn),CpG島約3萬個(gè),。
NA甲基化(DNA methylation)是指在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)催化下,,以S-腺苷甲硫氨酸為甲基供體,將活性甲基轉(zhuǎn)移至DNA鏈中特定堿基上的化學(xué)修飾過程,。哺乳動物基因組中,,DNA甲基化多發(fā)生在CpG二核苷酸中的胞嘧啶的5位碳原子。DNA甲基化是一種表觀(epigenetic)修飾,,它在不改變DNA序列的情況下,,對個(gè)體的生長、發(fā)育,、基因表達(dá)模式以及基因組的穩(wěn)定性起到重要的調(diào)控作用,,并且這種修飾在發(fā)育和細(xì)胞增殖的過程中是可以穩(wěn)定傳遞的,。近年來的大量研究表明,DNA異常甲基化與**的發(fā)生,、發(fā)展,、細(xì)胞*變有著密切的聯(lián)系。
高通量BSP——目標(biāo)位點(diǎn)/基因甲基化驗(yàn)證方案,??茖W(xué)方案:設(shè)計(jì)從項(xiàng)目背景了解、協(xié)助方案設(shè)計(jì),、實(shí)驗(yàn)材料選取,、建庫測序,到數(shù)據(jù)分析每個(gè)項(xiàng)目有特定的科學(xué)問題,;需要專業(yè),、有價(jià)值的建議;科學(xué),、縝密的設(shè)計(jì)及時(shí)高效的溝通,;以保障高質(zhì)量研究成果。樣本要求:基因組DNA:>=1ug(20個(gè)區(qū)域/位點(diǎn)),;樣品濃度>30ng/ul,;無RNA和蛋白污染建庫測序:測序策略:IlluminaHiSeq,PE150;測序深度:>100X,。信息分析:基于靶向序列的甲基化分析,,數(shù)據(jù)質(zhì)控,5mCCalling,,5mC在組間樣本的可視化,,多樣本甲基化聚類與臨床樣本特征關(guān)聯(lián)分析等。中小樣本篩選, 大樣本中進(jìn)一步驗(yàn)證,。
industryTemplate850K芯片為半金標(biāo)準(zhǔn),,價(jià)格低,分析簡單,,較為適合EWAS類型的課題,。四川TAB-SeqDNA甲基化歡迎咨詢
FFPE樣本只需要室溫運(yùn)輸。上海MeDIP-SeqDNA甲基化方案
上皮型鈣黏附素(E-cadherin)是介導(dǎo)細(xì)胞間粘附的一種跨膜糖蛋白,,其編碼基因CDH-1屬于**侵襲轉(zhuǎn)移抑制基因,。在**組織中,E-cadherin表達(dá)的下調(diào)或沉默可導(dǎo)致細(xì)胞間相互黏附力減弱,,造成**細(xì)胞的分散,,脫離原發(fā)灶處而轉(zhuǎn)移。而E-cadherin下調(diào)的因素之一就是其啟動子區(qū)域CpG島的超甲基化,。**細(xì)胞突破血管內(nèi)皮及基底膜進(jìn)入血循環(huán)是**細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的重要步驟,?;啄そM成蛋白Nidogen的缺失將嚴(yán)重影響基底膜的完整性,有利于**細(xì)胞順利通過進(jìn)入血循環(huán)進(jìn)而發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移,。有研究表明,,Nidogen基因啟動子在**細(xì)胞中表現(xiàn)出很高的甲基化水平,而在正常細(xì)胞中卻極少或沒有發(fā)生甲基化,。另外,,某些miRNA(如MiR-148a、miR-34b/c,、miR-9)能夠起到抑制**細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的作用,,而在**細(xì)胞中,這些miRNA通常由于發(fā)生超甲基化而沉默,。上海MeDIP-SeqDNA甲基化方案