穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細(xì)胞濃度,，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管,，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。

PEI轉(zhuǎn)染試劑有沒有毒性呢,？血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑市場報價

方法：1．細(xì)胞分盤：通過胰酶消化收集細(xì)胞,，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）,。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。2.制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例,。準(zhǔn)備兩支1.5mL離心管,，一管將質(zhì)粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻,。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,，充分混勻后室溫靜置20-30min,。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動平皿混勻,，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育,。注：每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致,。3.培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基,，繼續(xù)培養(yǎng)，16h左右可以觀測到報告基因的表達(dá),。

25KPEI轉(zhuǎn)染試劑如何儲存哪個品牌的GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好,？

對大多數(shù)細(xì)胞來而言,，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。.PEIMAX(MW40,000)為Polysciences公司生產(chǎn)的化合物產(chǎn)品，每批產(chǎn)品出廠前都經(jīng)過嚴(yán)格的檢測,保證每批產(chǎn)品都100%合格,、穩(wěn)定且品質(zhì)高,但由于作為轉(zhuǎn)染試劑使用過程中有很多實驗室因素(配置方法,，PH,水純度,稱量的準(zhǔn)度,dnaRNA純度,細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞品系…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉(zhuǎn)染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產(chǎn)品純度,，分子量及重量缺失破損等相關(guān)投訴,，針對極個別客戶溶解問題和轉(zhuǎn)染效率問題我們能友善解決。

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）,。通過260nm光吸收測定DNA濃度,，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能,，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性,。細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌,、或支原體污染,。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞,。

PEI轉(zhuǎn)染試劑的工作原理是什么呢？

1.對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,，可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細(xì)胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。

PEI轉(zhuǎn)染試劑哪個品牌的比較好用？PEI轉(zhuǎn)染試劑使用比例

有哪些品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑,？血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑市場報價

特別提醒1.對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,，可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細(xì)胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。 血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑市場報價

上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司辦公設(shè)施齊全，辦公環(huán)境優(yōu)越,，為員工打造良好的辦公環(huán)境,。專業(yè)的團(tuán)隊大多數(shù)員工都有多年工作經(jīng)驗，熟悉行業(yè)專業(yè)知識技能,，致力于發(fā)展PL Bioscienc,Quan-Lab,Polysciences,Sirion Biote,CN-Bio,Dharmacon,Horizon,Pfenex,Visual Prote的品牌,。我公司擁有強(qiáng)大的技術(shù)實力，多年來一直專注于生物醫(yī)藥科技（人體干細(xì)胞,、基因診斷與zhiliao技術(shù)開發(fā)和應(yīng)用除外）領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā),、自有技術(shù)轉(zhuǎn)讓，并提供相關(guān)的技術(shù)咨詢和技術(shù)服務(wù),；計算機(jī)軟件的開發(fā),、設(shè)計、制作（音像制品,、電子出版物除外）,、銷售自產(chǎn)產(chǎn)品；實驗室試劑及耗材（藥品,、危險品除外）,、化工原料及產(chǎn)品（除危險化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品,、煙花爆竹,、民用baozha物、易制毒化學(xué)品）,、儀器儀表,、機(jī)械設(shè)備,、電子設(shè)備、塑料制品,、玻璃制品,、辦公用品,、電子產(chǎn)品的批發(fā),、進(jìn)出口、傭金代理（拍賣除外）,?！疽婪毥?jīng)批準(zhǔn)的項目，經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動】的發(fā)展和創(chuàng)新,，打造高指標(biāo)產(chǎn)品和服務(wù),。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司主營業(yè)務(wù)涵蓋血小板裂解液，WB自動孵育系統(tǒng),，微流控器官芯片,，藍(lán)牙無線標(biāo)簽機(jī)，堅持“質(zhì)量保證,、良好服務(wù),、顧客滿意”的質(zhì)量方針，贏得廣大客戶的支持和信賴,。