這些小鼠在 2 至 3 個月內(nèi)出現(xiàn)低血糖,，胰島素陽性細胞大量擴增,。這種體內(nèi)擴增有助于維持大量增殖的胰島素細胞，并允許定義允許的培養(yǎng)條件,，在這種條件下,，可以在體外建立永生化細胞系。Human Cell Design（HCD）開發(fā)了一種用于在人類胎兒組織中使用靶向Zhong liu產(chǎn)生功能的人類β細胞系,。在胰島素啟動子的控制下,，用表達 SV40LT 的慢病毒載體轉(zhuǎn)導人類胎兒胰腺芽。Human Cell Design 開發(fā)了創(chuàng)新且安全的人類β細胞系生產(chǎn)方法,。首先,，將每個轉(zhuǎn)導的人類胎兒胰腺芽移植到 2 或 3 只 SCID 小鼠的腎被膜下，因為該部位是人類胰腺發(fā)育的允許部位,。在 6 到 8 個月內(nèi)，所有移植的小鼠都發(fā)生了原發(fā)性胰島素瘤,，這導致它們的血糖水平下降,。與其他胰腺移植相比，原發(fā)性胰島素瘤是高度血管化的,。然后將原發(fā)性胰島素瘤中這些高度血管化的區(qū)域分離,，用在大鼠胰島素啟動子控制下表達 hTERT 的慢病毒進行轉(zhuǎn)導，并移植到其他 SCID 小鼠中,。全世界有超過 5 億成年人患有糖尿病,，糖尿病細胞模型可用于研究胰腺內(nèi)分泌細胞功能、糖尿病機制和研究策略,。糖尿病糖尿病細胞模型RNA測序驗證胰島細胞基因表達

Human Cell Design 成立于 2001 年,，總部位于法國，專注于人源細胞模型開發(fā),，以助力科研和生物醫(yī)藥企業(yè)的發(fā)展,。其中可作為糖尿病細胞模型的 EndoC-BH5、EndoC-BH3,、EndoC-BH1 等人源胰島 B 細胞為其優(yōu)勢產(chǎn)品,，這些人源胰島 B 細胞誘導產(chǎn)生的胰島素接近于天然胰島細胞分泌的胰島素量,。人源胰島 B 細胞模型構(gòu)建技術(shù)性文章早期發(fā)表于 2011 年，相關(guān)文章總引用量達到 600+,，人源胰島 B 細胞模型已經(jīng)被全球 200 多家生物醫(yī)藥和生命科研機構(gòu)作為糖尿病細胞模型使用,。人源胰島B細胞糖尿病細胞模型細胞活力好糖尿病細胞模型——即用型 EndoC-BH5 細胞是第三代永生化人類胰腺 B 細胞系。

EndoC-βH5,GLTxEndoC-βH5,HLA-A2EndoC-βH5等細胞可在體外在葡萄糖劑量刺激下產(chǎn)生正常的胰島素分泌反應,，對GLP-1R/GLP-1等胰島素刺激因子產(chǎn)生正常響應,，可以響應細胞因子刺激，表達HLA-A2等T細胞受體,，因此可用于糖尿病炎癥相關(guān)等多種藥物開發(fā)實驗,。EndoC-BH5細胞可批量穩(wěn)定生產(chǎn)，因此可以進行基于siRNA的高通量篩選研究中,，用于鑒定出潛在的2型糖尿病藥物靶點,。另外，Humancelldesign根據(jù)法國生物倫理立法收集人類胎兒組織,，獲得法國生物醫(yī)學局（巴黎）的批準,，批準號為PFS08-005。

在胰島細胞刺激中,，基礎和高D-葡萄糖條件之間的刺激指數(shù)為11.6±1.8,。通過應用不引起胰島素分泌的L-葡萄糖(20mM)或完全阻斷D-葡萄糖誘導的鉀通道開放劑二氮嗪(100mM)，驗證了胰島素分泌對D-葡萄糖的特異性,。胰島素分泌以D-葡萄糖濃度依賴性方式增加,，從0mMD-葡萄糖時的68.827.3增加到16.7mMD-葡萄糖時的679.2±39.5ng/h/10⁶細胞。胰島素分泌增加Zui快的是5.5至8mMD-葡萄糖,，分別有204.7±51.3和414.9±94.8ng/h/10⁶細胞,。Human cell design 構(gòu)建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。通過多輪次優(yōu)化改良,，獲得的功能胰腺B細胞,，無限接近天然人源胰島B細胞，其胰島素分泌功能與天然細胞類似,，基于PDX1/NKX6.1關(guān)鍵基因驗證的細胞均一性達到90%以上（左圖）,，在2.8 mM and 11 mM葡萄糖劑量下表現(xiàn)出10倍的胰島素分泌反應（右圖），對GLP-1R激動劑,， Exendin4刺激產(chǎn)生明細那反饋,， 且可實現(xiàn)批量化生成，實現(xiàn)穩(wěn)定供應,。糖尿病細胞模型可用于類胰島構(gòu)建,、糖尿病細胞模型構(gòu)建。

人原代β細胞的可用性有限,，從人胰島制劑中純化β細胞具有挑戰(zhàn)性,。在嚙齒類動物中,，β細胞系自20世紀70年代初以來就已經(jīng)可用，并且在研究β細胞功能方面非常有用,。然而,，嚙齒動物的β細胞并不是研究人類β細胞的理想選擇，因為人類和嚙齒動物的β細胞在許多方面彼此不同,。例如,，在嚙齒類動物中，胰島素由2個基因編碼,，而在人類中,，只有1個基因編碼。嚙齒動物和人類β細胞的功能差異是由于葡萄糖轉(zhuǎn)運和磷酸化在葡萄糖感知中的相對作用不同,。表達 EndoC-BH5 的 HLA-A2 重新利用抗yan藥物或發(fā)現(xiàn) I 類抗原肽加工和呈遞的抑制劑,其細胞因子反應與原發(fā)性類似,。上海糖尿病細胞模型廠家技術(shù)指導

糖尿病研究中較好的胰島B細胞模型？糖尿病糖尿病細胞模型RNA測序驗證胰島細胞基因表達

Humancelldesign（HCD）通過將永生化轉(zhuǎn)基因hTERT和SV40大T以及單純皰疹病毒-1胸苷激酶整合基因轉(zhuǎn)移至人胎兒胰腺中,，產(chǎn)生EndoC-βH5細胞,。擴增后使用CRE ji huo去除永生化轉(zhuǎn)基因，并使用更昔洛韋消除剩余的未切除細胞,，所得細胞作為可立即使用的EndoC-βH5細胞進行分發(fā),。EndoC-βH5已經(jīng)成功進行了轉(zhuǎn)錄組、免疫學和的功能測定,。即用型EndoC-βH5細胞顯示出高效的葡萄糖依賴性胰島素分泌,。歐洲四個du li實驗室觀察并再現(xiàn)了強勁的10倍胰島素分泌指數(shù)。EndoC-βH5細胞響應葡萄糖以動態(tài)方式分泌胰島素,。GLP1R和GIPR介導的信號增強葡萄糖刺激EndoC-βH5細胞的胰島素分泌,。糖尿病糖尿病細胞模型RNA測序驗證胰島細胞基因表達