穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）,。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào)：Mine-bio PEI轉(zhuǎn)染試劑有沒(méi)有毒性？北京Kyfora Bio by PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑

接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）,。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),，請(qǐng)用圓底聚丙烯管,，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問(wèn)題,，歡迎咨詢上海曼博生物！PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑用途哪里有賣(mài)GMP等級(jí)的PEI轉(zhuǎn)染試劑,？

1.對(duì)于某些類(lèi)型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度,，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無(wú)蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問(wèn)題，歡迎咨詢上海曼博生物,！歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào)Mine-bio

注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量：請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無(wú)內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）,。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度,，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）,。如有可能，請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性,。細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞,。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌、或支原體污染,。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞,。如有更多關(guān)于PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問(wèn)題,，歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉(zhuǎn)染試劑包裝病毒的滴度有多高,？

材料：質(zhì)粒DNA指數(shù)生長(zhǎng)的真核細(xì)胞PEI（聚乙烯亞胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI儲(chǔ)存液（100μM）：稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中,，0.2μm濾膜過(guò)濾，儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS（pH7.4）：將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,，加入20ml1M的HEPES,，調(diào)pH值到7.4，定容至1L,，過(guò)濾（0.2μm濾膜）后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆?。方法?．細(xì)胞分盤(pán)：通過(guò)胰酶消化收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）,。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開(kāi)始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基,。更多產(chǎn)品信息,，歡迎咨詢上海曼博生物！用PEI轉(zhuǎn)染時(shí),，一般和DNA的比例是多少?云南iPSC培養(yǎng)PEI轉(zhuǎn)染試劑

PEI轉(zhuǎn)染試劑的使用方法是怎樣的,？北京Kyfora Bio by PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細(xì)胞濃度,，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）,。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，替換成無(wú)血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá),。請(qǐng)自行確定適合檢測(cè)時(shí)間,。如想申請(qǐng)?jiān)囉醚b，請(qǐng)關(guān)注公眾號(hào)：Mine-bio,，回復(fù)“申請(qǐng)PEI”,，即可參加！北京Kyfora Bio by PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑