接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細(xì)胞濃度,，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同）,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請用圓底聚丙烯管,，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,，歡迎咨詢上海曼博生物,！PEI轉(zhuǎn)染試劑在使用時(shí)出現(xiàn)沉淀的原因是什么?低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法

抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品，包括從Researchgrade到cGMP等級的無動(dòng)物源培養(yǎng)基質(zhì),，轉(zhuǎn)染試劑,、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù),，支持ATMP（AdvanceTherapyMedicinalProducts）藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉(zhuǎn)化,；以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權(quán)靈活的CHO工程細(xì)胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn)，以此希望幫助國內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術(shù),，分享研發(fā)工具進(jìn)步帶來的技術(shù)紅利,，終為細(xì)胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學(xué)行業(yè)等乃至整個(gè)生命科學(xué)行業(yè)賦能！若想咨詢更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)信息,，歡迎咨詢上海曼博生物,！低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法專為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，PEI轉(zhuǎn)染試劑提升基因表達(dá)效率,。

1.對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度,，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細(xì)胞來而言,，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問題,，歡迎咨詢上海曼博生物,。也可關(guān)注我們的公眾號：Mine-bio，查看更多技術(shù)文章,！

PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗(yàn),。當(dāng)初試驗(yàn)經(jīng)費(fèi)很有限，被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,，選擇PEI,，以至于相當(dāng)長的時(shí)間內(nèi)，轉(zhuǎn)染試驗(yàn)都不順利,。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點(diǎn)：1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,，所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時(shí)，一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,，順序不可錯(cuò),，輕微混勻，靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時(shí),，一定要換液,！換含有FBS的完全培養(yǎng)液,！因?yàn)镻EI對細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗(yàn)涉及到穩(wěn)定篩選，建議把血清濃度適當(dāng)提高,。PS：事實(shí)證明,，PEI是可行的，已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息,，可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司！歡迎關(guān)注曼博生物公眾號：Mine-bio哪里可以買到23966-1,？

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度,，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請用圓底聚丙烯管,，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測,。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá),。請自行確定適合檢測時(shí)間。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息,，歡迎咨詢上海曼博生物,！配制PEI轉(zhuǎn)染試劑的注意事項(xiàng)有哪些,？江蘇細(xì)胞擴(kuò)增PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理

PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種穩(wěn)定的具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子。低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法

對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,，可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到宜轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細(xì)胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。更多產(chǎn)品信息，歡迎咨詢上海曼博生物,！低毒性PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測方法