接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度,，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,，歡迎咨詢上海曼博生物,！用PEI轉(zhuǎn)染時，一般和DNA的比例會是多少?PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案

注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）,。通過260nm光吸收測定DNA濃度,，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能,，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性,。細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌,、或支原體污染,。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞,。歡迎關(guān)注曼博生物公眾號：Mine-bioPolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑用途PEI轉(zhuǎn)染試劑，高效助力基因轉(zhuǎn)染研究,，試用裝輕松上手,。

KyforaBiobyPolysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的產(chǎn)品,，因其較高的轉(zhuǎn)染效果,，已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子,，每相隔二個碳原子,，即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞,。有實(shí)驗(yàn)證明，分子量為25000的線性PEI即KyforaBiobyPolysciences23966（PEI25K）轉(zhuǎn)染效率表現(xiàn)優(yōu)良,。請關(guān)注我們的公眾號：Mine-bio

材料：質(zhì)粒DNA指數(shù)生長的真核細(xì)胞PEI（聚乙烯亞胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI儲存液（100μM）：稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中,，0.2μm濾膜過濾，儲存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS（pH7.4）：將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,，加入20ml1M的HEPES,，調(diào)pH值到7.4，定容至1L,，過濾（0.2μm濾膜）后儲存于4℃?zhèn)溆?。方法?．細(xì)胞分盤：通過胰酶消化收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）,。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基,。歡迎咨詢上海曼博生物,。優(yōu)化配方，PEI轉(zhuǎn)染試劑減少細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng),，保護(hù)細(xì)胞活性,。

抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品，包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質(zhì),，轉(zhuǎn)染試劑,、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù),，支持ATMP（AdvanceTherapyMedicinalProducts）藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉(zhuǎn)化,；以及提供藥物開發(fā)和探索的抗體文庫定制和商業(yè)授權(quán)靈活的CHO工程細(xì)胞株以支持抗體藥物的商業(yè)化生產(chǎn)，以此希望幫助國內(nèi)科研工作者快速地接觸世界范圍內(nèi)的技術(shù),，分享研發(fā)工具進(jìn)步帶來的技術(shù)紅利,，終為細(xì)胞、基因產(chǎn)業(yè)以及再生醫(yī)學(xué)行業(yè)等乃至整個生命科學(xué)行業(yè)賦能,！若想咨詢更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)信息,，歡迎咨詢上海曼博生物！也歡迎關(guān)注曼博的公眾號Mine-bio,，查看更多技術(shù)文章,！PEI轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性如何？上海PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣

PEI轉(zhuǎn)染試劑的使用方法是怎樣的？PolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案

PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗(yàn),。當(dāng)初試驗(yàn)經(jīng)費(fèi)很有限,，被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000，選擇PEI,，以至于相當(dāng)長的時間內(nèi),，轉(zhuǎn)染試驗(yàn)都不順利。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點(diǎn)：1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,，所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時,，一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中，順序不可錯,，輕微混勻,，靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時，一定要換液,！換含有FBS的完全培養(yǎng)液,！因?yàn)镻EI對細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗(yàn)涉及到穩(wěn)定篩選，建議把血清濃度適當(dāng)提高,。PS：事實(shí)證明，PEI是可行的,，已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息，可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司,！歡迎關(guān)注曼博生物公眾號：Mine-bioPolyplusPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案