材料:質粒DNA指數(shù)生長的真核細胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,,0.2μm濾膜過濾,儲存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,,加入20ml1M的HEPES,,調pH值到7.4,定容至1L,,過濾(0.2μm濾膜)后儲存于4℃?zhèn)溆?。方法?.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%),。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基,。更多產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物,!哪個品牌的PEI轉染試劑性價比較高,?北京GMPPEI轉染試劑官方代理
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多關于PEI轉染試劑相關產品技術問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-Bio.PolyplusPEI轉染試劑使用注意事項PEI轉染試劑用什么溶劑配制,?
上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年,依托于集團公司泉心泉意深厚的資源和超過400家國內客戶群體,,生命科學領域一站式供應鏈體系,,以及高風險生物危險材料進出口平臺的優(yōu)勢,曼博生物嚴格篩選國際創(chuàng)新且經過同行驗證過的產品和技術,,引入中國市場,,開發(fā)、孵育和推廣,,致力于將全球創(chuàng)新產品和前沿技術帶入中國,,集中在為細胞/基因領域、/免疫,,抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產品,,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質,轉染試劑,、病毒轉導試劑,、基因編輯工具等產品和定制服務,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉化,。更多關于Polysciences PEI相關產品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-Bio.
細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染,。轉染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基,。2、制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應總體積為例,。準備兩支1.5mL離心管,,一管將質粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻,。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min,。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育,。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,,保證所取的濃度一致。3,、培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養(yǎng)基,,繼續(xù)培養(yǎng),16h左右可以觀測到報告基因的表達,。PEI轉染試劑使用的注意事項有哪些,?
KyforaBiobyPolysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產品,,因其較高的轉染效果,,已廣泛應用于工業(yè)化生產。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,,每相隔二個碳原子,,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”體(protonsponge),。PEI可用作轉染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實驗證明,,分子量為25000的線性PEI即KyforaBiobyPolysciences23966(PEI25K)轉染效率表現(xiàn)優(yōu)良,。請關注我們的公眾號:Mine-bioPEI轉染試劑主要包括25K和40K的分子量?Thermo FisherPEI轉染試劑怎么樣
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對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平,。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性,。Polysciences 是一家化學品制造公司,,產品廣泛應用于各個科研領域,。公司成立于1961年,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,,幫助科學家揭示未知領域,。更多關于Polysciences PEI相關產品信息,歡迎咨詢上海曼博生物,!也歡迎關注我們的公眾號:Mine-bio,,查看更多技術文章!北京GMPPEI轉染試劑官方代理