酶法提取是指可溶性膠原和酸溶性膠原被提取后,，需用一些蛋白酶,，如膠原酶,、胃蛋白酶,、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶等水解，得到不同的酶促溶性膠原蛋白,。所使用的蛋白酶主要分3種：動物蛋白酶（如胰蛋白酶,，胃蛋白酶），植物蛋白酶（如木瓜蛋白酶,，菠蘿蛋白酶）,，微生物蛋白酶（如堿性蛋白酶,，中性蛋白酶）。在對酶法水解膠原蛋白的研究中,，以堿性蛋白酶應用較多,。將膠原進行限制性降解，即將末端肽切割下來,，由于膠原肽鏈間的共價鍵都是通過分子末端肽里的賴氨酸或羥賴氨酸的相互作用形成的,，末端肽被切下后，含三螺旋結構的主體部分可溶于稀有機酸而被提取出來,。用酶處理，可以水解掉膠原纖維蛋白的末端肽,，提高膠原蛋白的產(chǎn)率,；而且還不會破壞膠原蛋白的三股螺旋結構，保持其特性,。影響酶提取的因素有很多,，如酶濃度、酶與底物的比例,、酶解時間,、酶解溫度、pH值以及料液比等,。在實際操作中,，大多數(shù)采用酶復合法提取膠原蛋白，較多的是使用胃蛋白酶提取,，有機酸多為乙酸,。 而且膠原蛋白對環(huán)境的污染也較小。河北小分子膠原蛋白肽廠家

    堿法提取即利用一定濃度的堿在一定的外界條件下提取膠原蛋白,，堿處理法中常用的處理劑為石灰,、氫氧化鈉、碳酸鈉等,，用氫氧化鈉浸提時效果較好,。一般的是把樣品勻漿后，用堿溶液多次溶脹后,，再離心提取,。但由于易引起蛋白質變性，如膠原肽鍵水解,，含羥基,、疏基的氨基酸全部被破壞；所得產(chǎn)物等電點pH值較低,，天冬酞胺和谷氨酞胺分別轉變?yōu)樘於彼岷凸劝彼?，得到的水解產(chǎn)物分子量較在酸性溶液中比低等問題,，若比較嚴重的話，還會產(chǎn)生D,、L-型氨基酸消旋混合物,，若D型氨基酸含量高過L型氨基酸，則會抑制L-型氨基酸的吸收,，有些D型氨基酸有毒,，甚至有致ai、致畸和致突變的作用,。而且堿法提取的含量較低,，用氫氧化鈉從魷魚皮中提取堿溶性膠原蛋白，其得率只有3%（以濕基計）,。所以,，若想提取結構完整、使用安全的膠原蛋白,，很少采用此方法,。有關單獨采用堿法提取膠原蛋白的報道不多，一般是堿法提取和酸法提法結合使用,。比如在4℃條件下,，魚骨用，再用,，用10%的異丙醇溶液去除脂肪,，，現(xiàn)在得到無色無味的膠原蛋白,，提取率為,。 江西大豆膠原蛋白肽原液膠原蛋白已廣泛應用于各種化學試劑交聯(lián)膠原。

    一般是白色,、透明的粉狀物,，分子呈細長的棒狀，相對分子質量從約2kD至300kD不等,。膠原蛋白具有很強的延伸力,，不溶于冷水、稀酸,、稀堿溶液,，具有良好的保水性和乳化性。膠原蛋白不易被一般的蛋白酶水解,，但能被動物膠原酶斷裂,，斷裂的碎片自動變性，可被普通蛋白酶水解,。當環(huán)境pH為酸性時,，膠原的變性溫度為38~39℃,。[42]膠原蛋白紅外光譜圖冊參考資料。膠原蛋白DSC圖譜膠原蛋白是一種兩性電解質,，這取決于兩個因素,，其一，膠原每個肽鏈具有許多酸性或堿性的側基,；其二,，每個肽鏈的兩端有α-羧基和α-氨基，都具有接受或給予質子的能力,，它們可在特定的pH值范圍內(nèi),，解離產(chǎn)生正電荷或負電荷，換句話說,，隨著介質的pH值,，不同膠原即成為帶有許多正電荷或負電荷的離子。膠原肽鏈側基的pKa值與其組成氨基酸側基的pKa值略有不同,，這是由于在蛋白質分子中受到鄰近電荷的影響所造成的,。等電點是,，呈現(xiàn)出偏堿性,，因為膠原的肽鏈中堿性氨基酸比酸性氨基酸多一點。由于是高分子,，在水溶液中具有膠體性質和一定粘度,，粘度在等電點時比較低，而且溫度越低,，粘度越大,。

    化學方法比物理方法改。聯(lián)度高,，且能獲得均勻一致的交聯(lián),，對調節(jié)、控制膠原的各性質均有效,。已廣泛應用于各種化學試劑交聯(lián)膠原,，以提高其交聯(lián)度、力學性能及生物相容性,?；瘜W改性法具體又可分為使用化學試劑交聯(lián)、側鏈的修飾,、生理活性物的固定化三種方法,。[130]化學試劑交聯(lián)法中常用的化學交聯(lián)劑有戊二醛、己異二氰酸酯,、碳化二亞胺,、疊氮二苯基磷等,，其中戊二醛是應用較比較廣的試劑，大量實驗證明：戊二醛能提供有效交聯(lián),，但有細胞毒性,，且其用量難以控制。另外,，隨著交聯(lián)度的增加,，吸水能力和膨脹度卻會降低。?；B氮化物,、聚環(huán)氧化物或京尼平交聯(lián)等，不會引入明顯的毒性,，且可獲得理想的交聯(lián)效果,。所見報道中，多使用單一交聯(lián)劑對膠原蛋白交聯(lián)改性,，但也有使用混合交聯(lián)劑的,，如為了解決人工心臟瓣膜晚期鈣化問題，篩選出環(huán)氧丙烷化學改性戊二醛處理生物瓣的方法,，可明顯減低瓣膜組織膠原蛋白末端游離羧基含量,。動物實驗表明，經(jīng)改性后的瓣膜組織能保持較好的組織穩(wěn)定性和機械抗張強度,、免疫原性測試為陰性,，符合臨床應用。 作用營養(yǎng)性,、修復性,、保濕性、親和性,。

    在實際提取過程中,，不同提取方法之間往往相互結合，可以得到較好的提取效果,。采用超高壓處理系統(tǒng)對原料給予高壓處理一段時間,，使其組織結構和膠原蛋白的三股螺旋結構發(fā)生松弛、變性,，便于分離提取,。熱水提取法是將原料經(jīng)過除雜蛋白等前處理之后，在一定條件下直接用熱水浸提已經(jīng)變性了的膠原蛋白或膠原蛋白水解物,，使用的溫度有100℃沸水浴,、60-70℃、40-45℃,。膠原蛋白的提取一般有三種方法：一是高壓輔助的物理方法,；二是用溶劑預處理結合低溫或熱水抽提的化學方法,，根據(jù)溶劑的不同，可分為熱水浸提法,、酸法,、堿法、鹽法,；三是用酶的生物化學法,。一般來說，高壓輔助和熱水抽提針對明膠的提取,，而低溫抽提和酶法針對膠原的提取,，但其基本原理都是根據(jù)膠原蛋白的特性改變蛋白質所在的外界環(huán)境，把膠原蛋白從其他蛋白質中分離出來,。 水解后其吸收利用率可以提高很多,，且可以促進食品中的其它蛋白質的吸收。黑龍江深海鱈魚膠原蛋白口服液

補充膠原三肽,，能更有效的將皮膚細胞撐起,，結合保濕和抑制皺紋的作用。河北小分子膠原蛋白肽廠家

膠原有三種類型的抗原分子：首先類是膠原肽鏈非螺旋的端肽,，在天然和變性膠原中均存在,。由于2個不同種類的哺乳動物中間的膠原蛋白，其整個氨基酸序列變化不是很大,，而且膠原蛋白的三螺旋區(qū)域有高度的進化穩(wěn)定性,，但在非螺旋的末端區(qū)域中有很大的變化性,，在這區(qū)域中幾乎50%以上的氨基酸殘基表現(xiàn)出種屬性變化,，大量的研究和生產(chǎn)都集中在如何完全去除端肽，只要去除端肽就認為是安全的,。第二類是膠原的三股螺旋的構象,，只存在于天然膠原分子中，即位于天然膠原蛋白的三螺旋結構中的抗原決定簇,，會在分離和純化過程中暴露出來,，尤其是含α1和α2單鏈暴露出的中間端情況下更為明顯。第三類是α-鏈螺旋區(qū)的氨基酸順序,，只出現(xiàn)在變性膠原中,。河北小分子膠原蛋白肽廠家

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