預(yù)處理除膠原蛋白外，動(dòng)物骨中還含有油脂,、多種礦物質(zhì)和其他雜質(zhì),，因此在被用于提取膠原蛋白之前必須進(jìn)行預(yù)處理。先剔除動(dòng)物骨上殘留的肉質(zhì)和肌腱等雜物,，粉碎后用正丁醇或正己烷萃取出骨油?，F(xiàn)在除去骨中無(wú)機(jī)物以提高膠原蛋白的得率。除去骨中的礦物質(zhì)可用稀酸或EDTA溶液,。有人用原料用5倍質(zhì)量的,，用正乙烷脫脂后再用胃蛋白酶酶解，在加酶量150U/g,，pH值,，37℃條件下處理120min，然后在固液比1∶6的情況下抽提5h,，在此條件下,，提取率可達(dá)18%；還有人用EDTA溶液（）浸泡骨料5d,，可有效脫去骨料中的羥基磷灰石,。[87-89]膠原蛋白的提取一般有三種方法：一是高壓輔助的物理方法；二是用溶劑預(yù)處理結(jié)合低溫或熱水抽提的化學(xué)方法,，根據(jù)溶劑的不同,，可分為熱水浸提法、酸法,、堿法,、鹽法；三是用酶的生物化學(xué)法,。一般來(lái)說(shuō),，高壓輔助和熱水抽提針對(duì)明膠的提取，而低溫抽提和酶法針對(duì)膠原的提取,，但其基本原理都是根據(jù)膠原蛋白的特性改變蛋白質(zhì)所在的外界環(huán)境,，把膠原蛋白從其他蛋白質(zhì)中分離出來(lái)。 在這些酶的較適作用溫度下提取可能會(huì)破壞膠原蛋白的某些功能特性和生物活性,。湖南玻尿酸膠原蛋白原料廠家

    化學(xué)方法比物理方法改,。聯(lián)度高，且能獲得均勻一致的交聯(lián),，對(duì)調(diào)節(jié),、控制膠原的各性質(zhì)均有效。已廣泛應(yīng)用于各種化學(xué)試劑交聯(lián)膠原,，以提高其交聯(lián)度,、力學(xué)性能及生物相容性,。化學(xué)改性法具體又可分為使用化學(xué)試劑交聯(lián),、側(cè)鏈的修飾,、生理活性物的固定化三種方法。[130]化學(xué)試劑交聯(lián)法中常用的化學(xué)交聯(lián)劑有戊二醛,、己異二氰酸酯,、碳化二亞胺、疊氮二苯基磷等,，其中戊二醛是應(yīng)用較比較廣的試劑,，大量實(shí)驗(yàn)證明：戊二醛能提供有效交聯(lián)，但有細(xì)胞毒性,，且其用量難以控制,。另外，隨著交聯(lián)度的增加,，吸水能力和膨脹度卻會(huì)降低,。酰基疊氮化物,、聚環(huán)氧化物或京尼平交聯(lián)等,，不會(huì)引入明顯的毒性，且可獲得理想的交聯(lián)效果,。所見(jiàn)報(bào)道中,，多使用單一交聯(lián)劑對(duì)膠原蛋白交聯(lián)改性,，但也有使用混合交聯(lián)劑的,，如為了解決人工心臟瓣膜晚期鈣化問(wèn)題，篩選出環(huán)氧丙烷化學(xué)改性戊二醛處理生物瓣的方法,，可明顯減低瓣膜組織膠原蛋白末端游離羧基含量,。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)改性后的瓣膜組織能保持較好的組織穩(wěn)定性和機(jī)械抗張強(qiáng)度,、免疫原性測(cè)試為陰性,，符合臨床應(yīng)用。 山東海鯛魚(yú)膠原蛋白肽廠家而魚(yú)皮和魚(yú)骨所含的Ⅰ型膠原蛋白是其主要膠原蛋白,。

所以,，若想提取結(jié)構(gòu)完整、使用安全的膠原蛋白,，很少采用此方法,。有關(guān)單獨(dú)采用堿法提取膠原蛋白的報(bào)道不多，一般是堿法提取和酸法提法結(jié)合使用,。比如在4℃條件下,，魚(yú)骨用0.1moL/L的NaOH浸泡6h,，再用2.5%NaCl浸泡6h去除雜蛋白，用10%的異丙醇溶液去除脂肪,，0.1moL/L的檸檬酸浸泡3d,，現(xiàn)在得到無(wú)色無(wú)味的膠原蛋白，提取率為11.87%,。注意,，無(wú)論酸法或堿法，均可有效地提取膠原蛋白,，有人分別采用醋酸-鹽酸的混合酸液（pH3.0）和NaOH溶液（pH12.0）提取骨膠原蛋白,，提取率基本相當(dāng)。但是,，這兩種方法提取膠原蛋白不僅容易影響膠原蛋白的生物活性,，而且提取后產(chǎn)生的酸性或堿性廢液必須進(jìn)行適當(dāng)處理，以避免對(duì)環(huán)境造成污染,。

    堿法提取即利用一定濃度的堿在一定的外界條件下提取膠原蛋白,，堿處理法中常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉,、碳酸鈉等,，用氫氧化鈉浸提時(shí)效果較好。一般的是把樣品勻漿后,，用堿溶液多次溶脹后,，再離心提取。但由于易引起蛋白質(zhì)變性,，如膠原肽鍵水解,，含羥基、疏基的氨基酸全部被破壞,；所得產(chǎn)物等電點(diǎn)pH值較低,，天冬酞胺和谷氨酞胺分別轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼岷凸劝彼幔玫降乃猱a(chǎn)物分子量較在酸性溶液中比低等問(wèn)題,，若比較嚴(yán)重的話,，還會(huì)產(chǎn)生D、L-型氨基酸消旋混合物,，若D型氨基酸含量高過(guò)L型氨基酸,，則會(huì)抑制L-型氨基酸的吸收，有些D型氨基酸有毒,，甚至有致ai,、致畸和致突變的作用。而且堿法提取的含量較低，用氫氧化鈉從魷魚(yú)皮中提取堿溶性膠原蛋白,，其得率只有3%（以濕基計(jì)）,。所以，若想提取結(jié)構(gòu)完整,、使用安全的膠原蛋白,，很少采用此方法。有關(guān)單獨(dú)采用堿法提取膠原蛋白的報(bào)道不多,，一般是堿法提取和酸法提法結(jié)合使用,。比如在4℃條件下，魚(yú)骨用,，再用,，用10%的異丙醇溶液去除脂肪，,，現(xiàn)在得到無(wú)色無(wú)味的膠原蛋白,，提取率為。 海南省華上生物科技有限公司生產(chǎn)鱈魚(yú)小分子膠原蛋白肽產(chǎn)品,、羅非魚(yú)膠原蛋白肽產(chǎn)品,。

    酶法提取是指可溶性膠原和酸溶性膠原被提取后，需用一些蛋白酶,，如膠原酶,、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶等水解,，得到不同的酶促溶性膠原蛋白,。所使用的蛋白酶主要分3種：動(dòng)物蛋白酶（如胰蛋白酶，胃蛋白酶）,，植物蛋白酶（如木瓜蛋白酶,，菠蘿蛋白酶），微生物蛋白酶（如堿性蛋白酶,，中性蛋白酶）,。在對(duì)酶法水解膠原蛋白的研究中,，以堿性蛋白酶應(yīng)用較多,。將膠原進(jìn)行限制性降解，即將末端肽切割下來(lái),，由于膠原肽鏈間的共價(jià)鍵都是通過(guò)分子末端肽里的賴氨酸或羥賴氨酸的相互作用形成的,，末端肽被切下后，含三螺旋結(jié)構(gòu)的主體部分可溶于稀有機(jī)酸而被提取出來(lái),。用酶處理,，可以水解掉膠原纖維蛋白的末端肽，提高膠原蛋白的產(chǎn)率；而且還不會(huì)破壞膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu),，保持其特性,。影響酶提取的因素有很多，如酶濃度,、酶與底物的比例,、酶解時(shí)間、酶解溫度,、pH值以及料液比等,。在實(shí)際操作中，大多數(shù)采用酶復(fù)合法提取膠原蛋白,，較多的是使用胃蛋白酶提取,，有機(jī)酸多為乙酸。 水解后其吸收利用率可以提高很多,，且可以促進(jìn)食品中的其它蛋白質(zhì)的吸收,。北京復(fù)合膠原蛋白原料廠家

膠原蛋白已廣泛應(yīng)用于各種化學(xué)試劑交聯(lián)膠原。湖南玻尿酸膠原蛋白原料廠家

膠原有三種類(lèi)型的抗原分子：首先類(lèi)是膠原肽鏈非螺旋的端肽,，在天然和變性膠原中均存在,。由于2個(gè)不同種類(lèi)的哺乳動(dòng)物中間的膠原蛋白，其整個(gè)氨基酸序列變化不是很大,，而且膠原蛋白的三螺旋區(qū)域有高度的進(jìn)化穩(wěn)定性,，但在非螺旋的末端區(qū)域中有很大的變化性，在這區(qū)域中幾乎50%以上的氨基酸殘基表現(xiàn)出種屬性變化,，大量的研究和生產(chǎn)都集中在如何完全去除端肽,，只要去除端肽就認(rèn)為是安全的。第二類(lèi)是膠原的三股螺旋的構(gòu)象,，只存在于天然膠原分子中,，即位于天然膠原蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu)中的抗原決定簇，會(huì)在分離和純化過(guò)程中暴露出來(lái),，尤其是含α1和α2單鏈暴露出的中間端情況下更為明顯,。第三類(lèi)是α-鏈螺旋區(qū)的氨基酸順序，只出現(xiàn)在變性膠原中,。湖南玻尿酸膠原蛋白原料廠家

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