可用于膠原蛋白的純化方法包括鹽析法,、透析法,、離心法、電泳法和色譜法,，其中鹽析法,、離心法和電泳法較為常用。由于單一方法難以完全分離純化膠原蛋白,，實(shí)際操作都是通過復(fù)合法來達(dá)到分離純化膠原蛋白的目的,。鹽析法一般采用高濃度NaCl；離心法常選用制備型低溫超速離心機(jī),；電泳法多采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDS-PAGE）,，該法既可用于膠原蛋白的分離純化，還可用來測定膠原蛋白分子的相對分子質(zhì)量,。像有人用破碎,、酶解、鹽析三步法提純蘇尼特羊骨骼I型膠原蛋白,。先去除骨頭里的非膠原物質(zhì),，然后往沉淀中10%的胃蛋白酶，在4℃的條件下消化24h,，以14000r/min離心40min,。棄沉淀往上清液中加NaCL，使它終濃度達(dá)到,，靜止過夜,，再離心,，現(xiàn)在的沉淀就是I型膠原蛋白。 膠原的熱穩(wěn)定性是指測定其在水系中纖維的熱收縮溫度,。重慶牡蠣膠原蛋白粉

    IV型膠原蛋白非常細(xì)小而且呈線性分布在組織內(nèi)部,，是連接表皮和真皮的主要要素。Ⅴ型膠原的肽鏈由2條α1鏈和1條α2鏈或由3條α1鏈組成,，存在3種組裝形式：[α1(Ⅴ)]3,、[α1(Ⅴ)]2α2(Ⅴ)和α1(Ⅴ)、α2(Ⅴ),、α3(Ⅴ),，其中以[α1(Ⅴ)]2α2(Ⅴ)為主。Ⅴ型膠原分布在細(xì)胞周圍以及Ⅰ型膠原的周圍,，可能在基膜和結(jié)締組織之間起著橋梁作用,，已經(jīng)從數(shù)種魚類肌肉中分離出來。XV型膠原蛋白分布較廣而且多分布在血管,、神經(jīng)組織的外面地帶,，而且其與角化細(xì)胞**黑素細(xì)胞分子發(fā)生有關(guān)。[33-36]膠原,、明膠和水解膠原蛋白的電泳分析[37]Ⅺ型膠原是異三聚體,，其組成為α1(Ⅺ)α2(Ⅺ)α3(Ⅺ)，Ⅺ型膠原是軟骨的微量成分,，在軟骨膠原纖維的形成和軟骨基質(zhì)的組成中起著重要作用,，且常與Ⅱ型膠原共存。陸生生物的軟骨組織較水生生物含量高的多,，所以Ⅱ型膠原的研究的對象大多是陸生生物,，雖然在1984年已經(jīng)從鯊魚的軟骨中分離出來Ⅱ型膠原，但是從水產(chǎn)動(dòng)物提?、蛐湍z原的研究并不多,。 上海深海鱈魚膠原蛋白原料廠家水解后其吸收利用率可以提高很多，且可以促進(jìn)食品中的其它蛋白質(zhì)的吸收,。

    不同分子量分布膠原蛋白溶液的黏度與溶質(zhì)濃度,、溶劑、pH,、溫度和外加電解質(zhì)有關(guān),。在等電點(diǎn)時(shí)膠原蛋白溶液的黏度比較低，pH值低于或高于等電點(diǎn)時(shí),，膠原蛋白及多肽均將帶一定電荷,，溶液的黏度相應(yīng)增大，離等電點(diǎn)越遠(yuǎn),，溶液的黏度越大,；不同分子量分布膠原蛋白及多肽溶液的黏度均隨溫度升高而下降,。膠原蛋白分子量越大，濃度越大,，溶液的黏度越高,，高分子量膠原蛋白溶液的黏度隨濃度增加呈指數(shù)上升，而低分子量膠原蛋白溶液的黏度則隨濃度增加近似直線上升,；在膠原蛋白及多肽溶液中加入電解質(zhì)會(huì)導(dǎo)致其黏度明顯上升,。膠原蛋白的水解產(chǎn)物含有多種氨基酸，其中以甘氨酸較為豐富,。其次為丙氨酸,、谷氨酸和精氨酸，半胱氨酸,、色氨酸,、酪氨酸以及蛋氨酸等必需氨基酸含量低，因此,，膠原蛋白屬不完全蛋白質(zhì),。水解豬皮膠原所得的肽類產(chǎn)物中含有19種氨基酸，其中包括7種成人必需氨基酸和2種幼兒必需的半必需氨基酸,；而且氨基酸總量高達(dá)90%以上,。在八種人體必需氨基酸中含有六種：異亮氨酸（Ile）為，亮氨酸（Leu）和苯丙氨酸（Phe）為,，纈氨酸（Val），蘇氨酸（Thr）為,，賴氨酸（Lys）為,。

    酸法提取是利用一定濃度的酸溶液在一定的條件下提取膠原蛋白，主要采用低離子濃度酸性條件破壞分子間鹽鍵和希夫堿,，而引起纖維膨脹,、溶解，采用酸法提取的膠原蛋白通常成為酸溶性膠原蛋白,。酸溶解法可將沒有交聯(lián)的膠原分子溶解出來,，也可溶解含有醛胺類交聯(lián)鍵的膠原纖維，然后釋放到溶劑中,。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,，用低溫酸法提取的膠原很大程度的保持了其三螺旋結(jié)構(gòu)，適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備,。通常的做法是將適當(dāng)濃度的酸液按一定料液比加入到經(jīng)過預(yù)處理的骨粉中,，于0～25℃攪拌提取一定時(shí)間。在采用酸法進(jìn)行膠原蛋白的提取時(shí),，注意提取溫度不宜過高,，以免膠原蛋白的生物活性發(fā)生破壞,。取樣經(jīng)前處理后，勻漿在低溫下用酸浸提,，離心即可得酸溶性膠原蛋白（acid-solublecollagen,，ASC）。作為溶劑使用的酸,，主要有鹽酸,、磷酸、甲酸,、乙酸,、蘋果酸、檸檬酸等,，但大多數(shù)研究集中于乙酸抽提,，像MariaSadowska等用，其提取率略低于乙酸提取,。檸檬酸因不產(chǎn)生顏色和異味得以比較廣使用于食品工業(yè)的膠原蛋白的提取,。 結(jié)合保濕和抑制皺紋的作用，共同達(dá)到舒展粗紋,，淡化細(xì)紋的功效,！

    酸法處理時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)烈,，水解徹底,，多生成氨基酸混合物，而且使用酸提取時(shí),，根據(jù)酸濃度,、水解溫度、水解時(shí)間等條件的不同,，可以得到分子量不均的膠原水解物,。但是在即使中等濃度酸徹底水解過程中色氨酸也會(huì)全部被破壞，絲氨酸和酪氨酸也會(huì)部分被破壞,，且設(shè)備腐蝕嚴(yán)重,。因此，酸法溶出生物醫(yī)用膠原要準(zhǔn)確控制酸度,、溫度,、時(shí)間等影響因素。由于各種不足,，酸法很少單獨(dú)使用,，一般和酶法配合。比如以豬皮為原料,，在檸檬酸（）和胃蛋白酶協(xié)同下提取膠原蛋白,。在處理后的豬皮中加（）處理一段時(shí)間,，然后再用NaCL鹽析，現(xiàn)在提取率為,，提取物保持了完整三股螺旋結(jié)構(gòu)的I型膠原蛋白,。還有人以雛雞胸軟骨為原材料，在,，在4℃,，20000r條件下離心20min，現(xiàn)在應(yīng)用DEAE-SephadexA-50進(jìn)行離子交換層析,，之后透析,，再用NaCL鹽析，現(xiàn)在得到純化的膠原蛋白Ⅱ型,。 而魚皮和魚骨所含的Ⅰ型膠原蛋白是其主要膠原蛋白,。黑龍江玻尿酸膠原蛋白飲品

相對于較大分子膠原蛋白而言，膠原三肽更能有效的服務(wù)于人類的健康與美麗,。重慶牡蠣膠原蛋白粉

    膠原蛋白的熱變性溫度可以通過測定膠原蛋白溶液增比黏度的變化來確定,。其方法是將膠原蛋白樣品溶于一定量的緩沖溶液中，并配制成一定濃度的溶液,，然后用烏式黏度計(jì)測量溶液在一定溫度區(qū)間內(nèi)保持一定時(shí)間后的增比黏度,，以增比黏度對溫度作圖，當(dāng)增比黏度變化50%時(shí)所對應(yīng)的溫度即為熱變性溫度,。熱變性溫度還可通過拉曼光譜和差示掃描量熱法等進(jìn)行測定,。有人測得鱸魚、鯽魚和鳙魚魚皮膠原蛋白的熱變性溫度分別為25,、27和30℃,，它們的棲息水溫分別為26～27、29和32℃,，亞氨基酸含量分別為、,，與3種魚皮膠原的熱變性溫度相吻合Ⅱ型膠原和Ⅺ型膠原Ⅱ型膠原由三條α1肽鏈組成,，即[α1(Ⅱ)]3，富含羥賴氨酸,，并且糖化率高,，含糖量可達(dá)4%，是軟骨中的主要膠原,。另外,，即使同一生物，皮和骨膠原蛋白的熱變形溫度也可能不一,，像來自日本海鱸,、鮐魚,、大頭鯊和眼斑鲀的皮膠原蛋白的變性溫度為℃，而骨膠原蛋白的變性溫度則為℃,。附帶結(jié)論是骨膠原蛋白的變性溫度范圍整體上比皮膠原蛋白的變性溫度范圍要高,。而且骨膠原蛋白和皮膠原蛋白在不同pH時(shí)的溶解度不同。這表明皮和骨膠原蛋白的分子特性和構(gòu)型存在差異,。 重慶牡蠣膠原蛋白粉

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