在Genovis,，我們的策略是幫助客戶進(jìn)行中級(jí)（或亞基）分析,，這是我們的工作，特別是我們的蛋白質(zhì)酶切產(chǎn)品,。完整質(zhì)量和肽圖譜是蛋白質(zhì)表征的常用方法,，我們發(fā)現(xiàn)，與簡(jiǎn)單但信息有限的完整質(zhì)量和高度復(fù)雜但信息豐富的肽圖譜相比,，中級(jí)方法具有優(yōu)勢(shì),。通過(guò)執(zhí)行中級(jí)描述，您可以生成從完整的質(zhì)量實(shí)驗(yàn)中獲得的所有信息,，具有額外的優(yōu)勢(shì),。在對(duì)抗體進(jìn)行完整質(zhì)量分析時(shí)，很難明確地識(shí)別某些修飾,。質(zhì)譜儀器正在改進(jìn),，可以更有效地分析更大的分子,，但通過(guò)使用我們的SmartEnzymes，如IdeS,，可以將抗體分解成更小的片段,，這提高了這些實(shí)驗(yàn)可以執(zhí)行的分辨率，因此,，增加了鑒定修飾的信心,。此外，你不僅能夠更好地識(shí)別修改,，而且你能夠?qū)⑺鼈兌ㄎ坏降鞍踪|(zhì)上的單個(gè)結(jié)構(gòu)域,，這是你在完整水平上無(wú)法做到的。中級(jí)分析已成為分析單克隆抗體療法的標(biāo)準(zhǔn)方法,，并為產(chǎn)品質(zhì)量屬性提供特定領(lǐng)域的信息,。重慶FabRICATOR ZIdeS蛋白酶

與IdeS不同，為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產(chǎn)物,，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白質(zhì)消化該蛋白質(zhì),，該蛋白由與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的GlySERIAS酶組成。通過(guò)將酶偶聯(lián)到樹(shù)脂上,，可以增加酶與蛋白質(zhì)的比率,，從而可以進(jìn)一步加速反應(yīng)，以獲得更完整的連接子消化,。此外,，該酶不會(huì)存在于樣品制備中，可能會(huì)干擾樣品分析,。為了進(jìn)行比較,，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化過(guò)夜，或用GlySERIAS凍干1小時(shí)并在37°C下過(guò)夜消化,。 為了降低樣品復(fù)雜性,，使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR凍干去除Fc聚糖，并減少鏈間二硫鍵,。通過(guò)反相LC-MS對(duì)樣品的分析表明,，GlySERIAS Immobilized幾乎完全消化了Fc結(jié)構(gòu)域中的連接子，留下了接近均質(zhì)的Fc/2產(chǎn)物,，其中含有來(lái)自連接子的一個(gè)絲氨酸殘基。用 GlySERIAS 凍干 1 小時(shí)或過(guò)夜消化,，兩者都會(huì)產(chǎn)生幾種 Fc 產(chǎn)物,，并附著不同數(shù)量的絲氨酸和甘氨酸殘基。GLP-1肽在所有三個(gè)樣品中以兩種變體存在,。使用GlySERIAS固定化消化的均質(zhì)Fc/2能夠詳細(xì)研究特定于Fc區(qū)域的質(zhì)量屬性,。此外,，在樣品中未觀察到干擾分析的酶峰。作為補(bǔ)充,，F(xiàn)c/2 產(chǎn)物在用 GlySERIAS 凍干消化后殘留部分連接子,，有助于研究位于 GS 連接子的修飾。河南GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與FabRICATOR活性兼容,。

Genovis除了提供IdeS酶以外,，還提供很多種特異性蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE）,。IgdE 在鉸鏈正上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人 IgG1,，產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段的均質(zhì)池。它在pH值和鹽濃度范圍內(nèi)具有活性,，不需要任何還原劑或輔助因子,。因此，與許多其他常用的蛋白酶相比,，F(xiàn)abALACTICA不需要任何優(yōu)化來(lái)避免過(guò)度消化,。這使得FabALACTICA成為一種有吸引力的酶，例如在還原和非還原條件下的LC-MS分析,、抗體高階結(jié)構(gòu)（HOS）的結(jié)晶和NMR研究,、雙特異性或多特異性抗體的表征、單價(jià)結(jié)合研究和完整的Fc聚糖分析,。

Genovis提供FabRICATOR（IdeS）驗(yàn)證包,。三種不同批次的凍干酶，用于驗(yàn)證基于FabRICATOR的分析方法,。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶,，可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段,。FabRICATOR酶已成為生物制藥行業(yè)中使用的工具,，用于表征用于zhiliao用途的單克隆抗體、Fc融合蛋白,、ADC和生物仿制藥,。每批FabRICATOR酶在釋放前都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的酶活性、特性和純度測(cè)試,。FabRICATOR驗(yàn)證試劑盒由三批凍干酶組成,，使方法驗(yàn)證更容易。每批都附有一份分析證書(shū),。QC應(yīng)用的簡(jiǎn)化方法驗(yàn)證,；批次間變異性評(píng)估的理想形式；提高批量放行檢測(cè)性能的可信度。發(fā)現(xiàn)GingisREX精氨酸殘基的特異性,，Arg-C在賴氨酸和其他殘基的非特異性,。

與IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶,，可在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgA1,，產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1,。消化在1小時(shí)內(nèi)完成,，并且由于酶的特異性，如果孵育時(shí)間延長(zhǎng),，則不存在過(guò)度消化的風(fēng)險(xiǎn),。該酶在pH值6.5至8.0下具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可發(fā)揮活性,?；钚允窃?7°C下，但也可以在室溫下使用增加孵育時(shí)間進(jìn)行消化,。IgASAPSub1是從口腔鏈球菌克隆而來(lái)的,，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽,，分子量為148kDa,。IgASAPSub1凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個(gè)單位的小瓶中,，用于消化1mgIgA1,。Genovis的GingisREX （RgpB）可用于肽圖分析、從頭肽測(cè)序和翻譯后修飾分析,；產(chǎn)生更長(zhǎng)的肽 - 提高序列覆蓋率,。山西FabDELLOIdeS蛋白酶抗體酶切

有效消化，適用于靈敏的體內(nèi)或基于細(xì)胞的檢測(cè),。重慶FabRICATOR ZIdeS蛋白酶

Genovis的FabRICATOR MagIC自動(dòng)樣品制備可用于分析和監(jiān)測(cè)不同的CQA,。mAb在生產(chǎn)或儲(chǔ)存過(guò)程中的氧化就是這樣一種CQA，可能會(huì)影響zhiliao產(chǎn)品的質(zhì)量,。為了展示FabRICATOR MagIC如何解決這個(gè)問(wèn)題,，對(duì)6種mAb的混合物進(jìn)行強(qiáng)制降解（室溫下3個(gè)月），并通過(guò)反相LC-MS進(jìn)行分析,。當(dāng)在完整水平上分析mAb時(shí),，可以檢測(cè)到mAb5豐度的顯著差異，同時(shí)出現(xiàn)許多新的峰,。然而,，無(wú)法獲得可靠的質(zhì)量數(shù)據(jù)。使用FabRICATOR MagIC，mAb5變化的來(lái)源在Fab區(qū)域內(nèi),。隨后還原為 Fc/2、LC 和 Fd' 片段,，可以識(shí)別差異是由于 mAb5 Fd' 片段上的色氨酸氧化,，通過(guò)形成氧代內(nèi)酯 （+14 Da） 和二氧代內(nèi)酯 （+30 Da） 以及 mAb5 LC （-18 Da） 的琥珀酰亞胺化來(lái)揭示。此外,，還可檢測(cè)到mAb3輕鏈的異構(gòu)化,。該示例說(shuō)明了FabRICATOR MagIC在mAb中級(jí)分析中的強(qiáng)大功能，它創(chuàng)建的片段足夠小,，可以精確定位特定的修飾,，而無(wú)需耗時(shí)耗費(fèi)資源的肽圖分析，所有這些都以相對(duì)較少的手動(dòng)操作時(shí)間快速完成,。重慶FabRICATOR ZIdeS蛋白酶