近年來，AAV在cancer疾病的醫(yī)治中顯示出巨大的價(jià)值,。AAV作為基因藥物的載體已在肺,、肝、眼,、腦,、肌肉等多個(gè)臨床試驗(yàn)(超過100次)中得到應(yīng)用，并在盲癥和血友病方面取得了巨大成功,。2012年,，AAV1載體編碼的脂蛋白脂肪酶成為歐盟批準(zhǔn)的shou個(gè)用于醫(yī)治脂蛋白脂肪酶缺乏癥的基因產(chǎn)物(Glybera)。5年后,，另一種AAV介導(dǎo)的基因藥物(Luxturna)隨后獲準(zhǔn)在美國上市,。基于AAV9的基因療(Zolgensma)也被用于醫(yī)治脊髓性肌肉萎縮,。腺病毒在基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)研究有這么強(qiáng)的生命力原因在于：宿主范圍廣,，對人致病率低；腺病毒粒子相對穩(wěn)定,，病毒基因重排頻率低,；安全性高，不整合到染色體中,，無插入致病基因,，不干擾其他宿主基因。無需為了保持高酶活而進(jìn)行脫鹽操作,，簡化工藝,、節(jié)省時(shí)間；南通SAN HQ高鹽核酸酶使用方法

核酸酶活性受到很多因素影響,，如鹽濃度,、pH、底物,、溫度等,。因此,，不同客戶、不同項(xiàng)目中核酸酶的使用條件都不一樣,。目前,，生物制藥行業(yè)對Benonase全能核酸酶的使用比較熟悉,，如生理鹽或低鹽濃度,、脫鹽操作等。對于AdV/AAV等項(xiàng)目,，使用SAN HQ高鹽核酸酶替代Benzonase時(shí),，只需提高反應(yīng)體系總鹽濃度到400mM-500mM即可，溫度,、Mg2+濃度等條件不用做任何調(diào)整,，同樣酶量的SAN HQ對宿主細(xì)胞DNA（HCD）的去除效果更好、病毒載體得率更高,。經(jīng)過工藝優(yōu)化后,，可以將SAN HQ高鹽核酸酶的用量減少到原來的1/3-1/4，且HCD去除效果及產(chǎn)品得率更高,。鹽城70921-150高鹽核酸酶供應(yīng)商SAN HQ高鹽核酸酶的改善效果與血清型無關(guān),。

三種AAV載體的生產(chǎn)體系（三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)體系、桿狀病毒表達(dá)載體體系以及包裝細(xì)胞體系） 中都會(huì)出現(xiàn)三種衣殼：完整衣殼（full capsid）,、部分衣殼（partial capsid）,，和空衣殼（empty capsid）。其中完整衣殼包含正確的DNA序列,，是人們所期待的產(chǎn)品,；部分衣殼和空衣殼包含部分不包含目的基因，屬于生產(chǎn)中的雜質(zhì),，約占細(xì)胞生產(chǎn)的總AAV顆粒的50%-90%,。空衣殼/部分衣殼有如下幾種危害：1), 影響產(chǎn)品的純度,，2), 增加終產(chǎn)品的免疫原性,，3), 與完整衣殼競爭infection細(xì)胞上的載體結(jié)合受體，抑制完整衣殼的轉(zhuǎn)導(dǎo),，4),增加總體病毒載量,。部分衣殼與空衣殼地存在嚴(yán)重地影響了AAV產(chǎn)品的安全性和有效性，因此監(jiān)管機(jī)構(gòu)強(qiáng)烈建議在整個(gè)生產(chǎn)過程中監(jiān)控空/完整衣殼比（空殼率）,。

在生物工藝流程中,，需要使用核酸酶去除終產(chǎn)品中的核酸污染，而核酸酶作為外源成份,，也需要在生產(chǎn)流程中去除,。核酸酶去除工藝包括熱滅活法,、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等,。AAV衣殼亞種之間因表面電荷的差異導(dǎo)致不同的的等電點(diǎn),，——空衣殼pI在6.3左右，包裝了完整基因組DNA后的病毒顆粒pI大致為5.9,。而來自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右,，SAN HQ高鹽核酸酶pI 9.6左右。因此,，在同樣的條件下,，從AAV溶液中去除SAN HQ高鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底,。SAN HQ高鹽核酸酶有兩個(gè)級(jí)別,，分別是生物工藝級(jí)別SAN HQ和GMP級(jí)別SAN HQ GMP。

AAV病毒滴度通常分為物理滴度和infection滴度,。物理滴度一般是指基因組滴度或者衣殼滴度,。在測定AAV的含量時(shí)，通常采用基因組滴度或者衣殼滴度作為單位,，其中基因組滴度為攜帶基因組的AAV的濃度,，衣殼滴度為AAV物理顆粒的濃度?；蚪M滴度一般采用qPCR,、ddPCR、染料法,、UV/Vis等方法來測定,；衣殼滴度主要是通過ELISA、HPLC等方法來測定,。AAV基因組滴度檢測的關(guān)鍵在于盡可能徹底去除AAV衣殼外的HCD殘留,，減少污染核酸對qPCR或ddPCR的影響。經(jīng)典方法是加入常規(guī)核酸酶（如Dnase I,、Benzonase等）消化AAV衣殼外的HCD殘留,，然后加入Proteinase K破碎病毒衣殼，進(jìn)行后續(xù)檢測,。經(jīng)過對比發(fā)現(xiàn),，用SAN HQ高鹽核酸酶替代常規(guī)核酸酶處理AAV病毒，能夠更高效去除衣殼外的核酸殘留,，qPCR或ddPCR結(jié)果重復(fù)性更高,、更穩(wěn)定。鑒于生物制品藥物更嚴(yán)格的質(zhì)量要求,，廠家對SAN HQ高鹽核酸酶的生產(chǎn)及質(zhì)控符合更高標(biāo)準(zhǔn),。濟(jì)南70921-150高鹽核酸酶銷售電話

SAN HQ高鹽核酸酶有助于減少了宿主細(xì)胞殘留DNA的污染,，提高了基因藥物的安全性。南通SAN HQ高鹽核酸酶使用方法

ArcticZymes Technologies成立于20世紀(jì)80年代后期,，總部位于挪威北部的特羅姆瑟(Troms?),；立足北極海洋區(qū)，致力于從海洋生物中識(shí)別新的冷適應(yīng)酶,，用于分子研究,、體外診斷和藥物領(lǐng)域。以其產(chǎn)品的獨(dú)特性質(zhì)及超過30年的生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)積淀,，ArcticZymes Technologies得到國際分子診斷及生物藥物領(lǐng)域客戶的肯定及大力支持,，ArcticZymes產(chǎn)品線已用于診斷產(chǎn)品及生物藥物生產(chǎn)中。2005年,，ArcticZymes在Olso證券交易所上市，并且持續(xù)得到挪威國家基金的支持,。南通SAN HQ高鹽核酸酶使用方法