外泌體來源及內(nèi)含物幾乎所有類型的細胞都可以分泌外泌體,，同時外泌體也***存在于體液中，包括血液,、眼淚,、尿液、唾液,、乳汁,、腹水等。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸（microRNA,、lncRNA,、circRNA、mRNA,、tRNA等）,、蛋白、膽固醇等,。外泌體的表面marker主要有CD63,、CD81、CD9,、TSG101,、HSP27等。外泌體的來源及內(nèi)含物外泌體鑒定目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）,、Nanosight,、WesternBlot、流式細胞術,。外泌體鑒定方法參考文獻：EGTrams,CJLauter,NSalem,[J].BiochimBiophysActa,1981,645:[J].JExpMed,1996,183(3):?mK,BossiosA,[J].NatCellBiol,2007,9(6):á[J].AnnualReviewofPhysiology,2016,78(1):[J].JournalofClinicalInvestigation,2014,124,?？蒲袑嶒灥耐饷隗w檢測服務介紹。全自動專業(yè)做外泌體研究
外泌體膜染料：PKH67,、PKH26產(chǎn)品組成：方法一：外泌體直接染色1.適量（10ug,，BCA法測量）外泌體溶于500ulDiluentC中（可以用DPBS代替）；2.適量的PKH26（10ug外泌體推薦用量不超過1ul）染料溶于等體積的DiluentC中（可以用DPBS代替）,，溫和吹打混勻,；3.將步驟2中的溶液加入1中并迅速吹打混勻。4.避光,，室溫靜置孵育5-10min,；5.加入等體積（2ml）的血清（exosomefree），或者1%BSA終止染色反應,；6.使用超濾/超離方式洗凈未與外泌體結合的PKH26染料,。南京外泌體膜染料翌科生物做外泌體檢測服務嘛？
10）請參閱圖21所示的細胞在靜力狀態(tài)下和細胞受到牽張力狀態(tài)下的電鏡對比圖,，其中,，左圖為細胞在靜力狀態(tài)下的電鏡圖，右圖為細胞受到牽張力狀態(tài)下的電鏡圖,。具體的,，細胞受到了牽張力的作用而發(fā)生變形，變形幅度為30%,。綜上,，通過本實施例的細胞外泌體優(yōu)化培養(yǎng)方法培養(yǎng)的細胞不僅可以提高細胞的外泌體分泌量，而且分泌的外泌體的生物學質量更強,。相比現(xiàn)有技術中的例如對于細胞進行的氣壓應力刺激的培養(yǎng)方法,，本實施例的細胞外泌體優(yōu)化培養(yǎng)方法擁有以下幾點優(yōu)勢：（1）本實施例的細胞外泌體優(yōu)化培養(yǎng)方法無需額外的應力刺激系統(tǒng),，只靠細胞培養(yǎng)生長的過程必需的培養(yǎng)基的循環(huán)供給即可產(chǎn)生循環(huán)的應力刺激,，即對于本實施例中的培養(yǎng)基既是細胞生長的營養(yǎng)來源，又形成了拉伸凝膠產(chǎn)生細胞應力刺激的原動力?，F(xiàn)有技術中例如氣壓產(chǎn)生的應力刺激,，氣壓屬于細胞培養(yǎng)生長的非必需的因素，本質意義上可以說,，氣壓刺激屬于外部的額外刺激因素,。（2）本實施例采用的細胞外泌體優(yōu)化培養(yǎng)系統(tǒng)中的培養(yǎng)基時刻處于循環(huán)流動狀態(tài)，這樣可以及時將細胞產(chǎn)生并分泌道培養(yǎng)基中的外泌體排出并搜集,，減少外泌體被其他細胞攝取的可能性,，從而提高了外泌體的產(chǎn)量，并且時刻為細胞提供更充沛的營養(yǎng)物質,。
除了RAB蛋白,，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1,、2、4,、5,、6、7,、11等),。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易?CD63,CD81和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源),、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源),、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶(數(shù)值DH,烯醇化酶1,醛縮酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB,LDH,親環(huán)素A,FASN,MDH1和CNP),、核糖體蛋白(RPS3),、信號轉導因子(黑色素瘤分化相關因子,ARF1,CDC42,人類紅細胞膜整合蛋白,SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8,、整合素),、細胞骨架蛋白以及泛素等。折疊編輯本段提純方式外泌體的提取主要包括以下幾種方式,。一是超速離心法,，這是目前外泌體提取更常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足,，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心，這種操作簡單,、省時,，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題,。翌科生物專做外泌體檢測服務,醫(yī)學實驗,醫(yī)學模型構建,。
也不利于流體中的細胞、蛋白和外泌體與通道中的抗體結合,。因此,，急需一種特異性分離外泌體的芯片，高通量,、體積小和操作簡單,，為**早期及伴隨診斷提供工具。技術實現(xiàn)要素：有鑒于此,，本發(fā)明的目的之一在于提供一種外泌體分離微流控芯片,；本發(fā)明的目的之二在于提供利用所述外泌體分離微流控芯片捕獲外泌體的方法,。為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：1,、外泌體分離微流控芯片,，所述芯片包括多個交錯人字型微混合器，每個shm的人字形凹槽呈周期性地交錯排列,。推薦的,，所述人字型微混合器每個循環(huán)周期由十個人字形的不對稱連續(xù)區(qū)域組成。推薦的,，所述交錯人字型微混合器組成八個單獨的人字形微通道,，八個人字形微通道通過集管與入口連接。推薦的,，通道的總高度(h)50μm,，凹槽的高度與通道的高度(α)的比率設定為；v字形和通道軸的夾角(θ)為45°,，主波矢量q＝2π/100μm,。2、利用所述外泌體分離微流控芯片捕獲外泌體的方法,，包括如下步驟：在芯片通道內(nèi)包被捕獲抗體,，加入體液樣本，用ph為～,，收集洗脫液,。推薦的，所述洗脫的緩沖液流速為80μl/min,。推薦的,，所述捕獲抗體的濃度為5～20μg/ml。推薦的,，所述外泌體胰腺*血漿外泌體,，包被抗體為gpc1抗體。翌科生物是專做外泌體檢測服務,醫(yī)學實驗,醫(yī)學模型構建,。研究所哪家做外泌體分離
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且及時帶走各種細胞代謝廢物，減少細胞代謝廢物對于細胞活性的影響,。對于細胞培養(yǎng)本身來說,，也需要更新培養(yǎng)基，以使得細胞實時處于比較好的生長環(huán)境,，因此,，利用循環(huán)更新的培養(yǎng)基來產(chǎn)生對于細胞的應力刺激,，相比創(chuàng)造提供額外的應力刺激原動力來說，本實施例在節(jié)約成本上有明顯的優(yōu)勢,。（3）對于本實施例的細胞外泌體優(yōu)化培養(yǎng)系統(tǒng)中,，使用的是循環(huán)更新的培養(yǎng)基來對細胞產(chǎn)生應力刺激，相比現(xiàn)有技術中例如公告號為cn公開的基于微流控芯片的加壓細胞培養(yǎng)系統(tǒng)和方法中采用的由壓力的調控來產(chǎn)生對于細胞的應力刺激,，雖然壓力可以產(chǎn)生對于細胞的應力刺激,，可以用于實驗環(huán)境下細胞受到應力刺激下的各種性能的檢測，但是對于細胞分泌外泌體來說,，壓力相對于細胞培養(yǎng)來說畢竟形成了外部的刺激因素,，這樣的外部刺激因素對于細胞外泌體的分泌存在影響，這樣的影響是正向影響還是反向影響需要驗證才能確定,，并且可以肯定的是是,，壓力對于細胞分泌外泌體來說不是必需的因素。而本實施例采用的培養(yǎng)基作為細胞應力刺激的原動力,，對于細胞本身培養(yǎng)的過程來說培養(yǎng)基本來就是必需品,，不是外部因素，因此可以有效避免例如壓力等外部刺激可能存在的對于細胞培養(yǎng)產(chǎn)生的方向的不利的影響,。全自動專業(yè)做外泌體研究
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