可用于需要低檢測限的測定具有用于研究基因調(diào)控和功能的快速,，簡單且均一的生物發(fā)光測定法與標準細胞生長培養(yǎng)基的使用兼容高斯熒光素酶近年來,，其他熒光素酶（例如高斯熒光素酶）的使用有所增加,，因為這些報告基因較小,，并且不需要ATP的存在。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì),，可通過氧氣催化腔腸素氧化,，產(chǎn)生光。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達后可有效地從哺乳動物細胞中分泌出來,。Amplite?高斯熒光素酶報告基因檢測試劑盒使用專有的發(fā)光配方來定量細胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性,。當該試劑與高斯熒光素酶相互作用時，產(chǎn)***光產(chǎn)物,，該發(fā)光產(chǎn)物提供強發(fā)光,。Amplite高斯熒光素酶報告基因測定試劑盒特點：提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度，可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進行半衰期為一小時的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號與標準細胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑（Renillareniformis）分離的36kDa蛋白,。與螢火蟲熒光素酶相比,，海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同,。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素，產(chǎn)生480nm的藍光,。與螢火蟲螢光素酶類似,。南京靠譜的D-熒光素鉀鹽測試公司。鎮(zhèn)江熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽使用說明

    可運用熒光素酶報告系統(tǒng)分析其相對活性,。c.驗證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用,，將該序列（通常為啟動子區(qū)域）插入報告基因載體，同時在實驗細胞***轉(zhuǎn)過表達該轉(zhuǎn)錄因子,，可分析轉(zhuǎn)錄因子過表達是否提高熒光素酶活性,。d.可以分析信號通路是否***，將該信號通路的下游響應(yīng)原件序列構(gòu)建入報告基因載體,，在不同上游信號條件下,，熒光素酶活性**了通路的下游響應(yīng)。例如在GPCR研究中,，將cAMPresponseelement（CRE）載入報告基因載體,，構(gòu)建穩(wěn)定表達細胞株后，可以用于分析GPRC的***與6b7a976f-99ae-4c48-8159-4bd篩選,。又如,，將HIF1α的響應(yīng)原件hypoxia-responsiveelement(HRE)插入luciferase報告載體構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，可以用于低氧相關(guān)通路的研究,。e.驗證microRNA的靶序列，將待測的3’UTR序列插入報告基因載體,，再共轉(zhuǎn)入該microRNA,，如果熒光素酶活性下降，則提示為其靶序列,。Q：在[信諾金達]做熒光素酶報告基因檢測,，需要提供什么？實驗結(jié)果包括哪些,？您需要提供：1.基因序列或模板,，需提供詳細的轉(zhuǎn)錄因子、目的基因或microRNA信息,；2.實驗細胞,，[信諾金達]默認為使用293T細胞，實驗結(jié)束后,，[信諾金達]會為您提供實驗流程及完整報告一份,，包括實驗原始數(shù)據(jù)、圖片,、分析結(jié)果等,。揚州ATPD-熒光素鉀鹽活題成像D-熒光素鉀鹽測試怎么樣,？

    2）按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液；3）腹腔注射10-15min后進行成像分析,。（對每只動物模型做熒光素動力學研究以確定峰值信號獲取時間）Firefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素分子式：C11H8N2O3S2分子量：g/mol外觀：白色至淺黃色粉末溶解：,，形成近乎無色至淺黃色的清夜保存：-15°C避光應(yīng)用：1）活細胞、組織或生物體內(nèi)luc標記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達的成像分析,；2）***用于報告基因分析,，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析,；報告基因分析,；高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸）,，D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）,。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,，可溶于甲醇和DMSO,；后者易溶于水或緩沖液中，使用方便,，溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性,，特別適合體內(nèi)實驗。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別,。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二。

    每孔加入100μl養(yǎng)24h后,，Luciferin使其終濃度為150μg/ml,，PBS，再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測,，分析發(fā)光強度與細胞數(shù)之間的相關(guān)性,。4)細胞生長曲線繪制MCF7-luc細胞和作為對照取表達熒光素酶的MCF-7細胞，接種于24孔板,，接種密度為2×104/孔,。細胞接種后1～7d，每天胰蛋白酶消化其中3孔細胞,，用細胞計數(shù)儀測定細胞數(shù),。以細胞生長天數(shù)為橫坐標，細胞數(shù)目為縱坐標,，分別繪制兩種細胞生長曲線,。二．動物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠，4～5周齡,，體重（15±2）g,，雌雄各3只,。取對數(shù)生長期的MCF-7用PBS重懸為2．5×10/ml懸液，每只裸鼠左右背側(cè)近腋部皮下接種100μl,，共接種6只,。接種后第5d采用德國BERTHOLD公司的活題成像系統(tǒng)檢測信號強度。以后每5d觀測一連續(xù)觀測30d,。觀測前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉（計量為：35mg/kg體重）,，按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin（invivograde），10min后,，進行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長情況,，定量分析各時間點的熒光值。繪制腫大的瘤皮下生長曲線.MCF-7-luc細胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學觀察MCF-7-luc細胞裸鼠皮下接種后25d,，脫頸處死小鼠,，取腫大的瘤組織，制成石蠟切片,，切片厚度為3μm,。熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽。

    這是一種小分子（19kDa）單體酶,，具有獨特的底物,，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報告基因有著***的應(yīng)用前景,，為進一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ),。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體,。一項針對各種能量受體熒光基團的深入研究發(fā)現(xiàn),，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn)?？蓪⑦@些熒光基團添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進行活細胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測,。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,，Promega的科學家努力將該報告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?,。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個氨基酸的小標簽和一個更大,，更精細的NanoLuc?亞基，LgBiT,。這兩部分結(jié)構(gòu)互補結(jié)合,，重組為一個明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,，從而可以進行蛋白質(zhì)相互作用的測定,；也可以和HiBiT一樣高,，從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究,。南京D-熒光素鉀鹽測試公司哪家便宜,。宿遷D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長

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    室溫培育30min后加入細胞孔板中,，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng),。2)單克隆細胞篩選轉(zhuǎn)染24h后胰酶消化細胞并按1∶6比例接種到新6孔板中，同時加入實驗確定的濃度G418,，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細胞抗性克隆的出現(xiàn),。分別挑選單一抗性克隆至96孔板，待其逐漸增殖后轉(zhuǎn)入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng),。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時用LuciferaseAs-sayAystem檢測熒光素酶活性,。檢測時，各克隆按1×105個/孔接種到24孔板,，24h后細胞裂解液裂解12000rpm,，4℃離心10min，收集裂解物,，取上清10μl加入96孔白板中,，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物，停留2s后,，取10s的熒光值（RLU）,，每個克隆設(shè)3個復(fù)孔，保留RLU值高的細胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng),，再過5代后進行熒光素酶活性檢測,。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代，熒光素酶活性更高的幾個克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數(shù)量細胞克隆的熒光值檢測7-luc陽性克隆細胞按細胞數(shù)將篩出的MCF-4×104,、2×104,、1×104、5000,、2500,、1250、625,、312和156分別接種到96孔黑板中,，另外一組只有細胞，一組只有培養(yǎng)基作對照,，設(shè)置2個復(fù)孔,，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次。鎮(zhèn)江熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽使用說明

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