螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號(hào)分子，可以用來標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報(bào)告基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7,，利用G418篩選,，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc，并在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評(píng)價(jià)其發(fā)光能力,。通過建立裸鼠移植瘤模型,，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測(cè)腫大的瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移情況，為下一步監(jiān)測(cè)裸鼠移植瘤對(duì)藥物作用的變化情從而為分析藥物對(duì)腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0,、200,、400、600,、800,、1000μg/ml設(shè)置6個(gè)濃度梯度。在細(xì)胞接種24h后,，加入6孔板中,，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)孔在10～14d內(nèi)全部死亡。每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,，死亡更低的G418濃度,，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細(xì)胞的濃度。1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF－7細(xì)胞，將細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)待細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%孔培養(yǎng)板中,，TM即可轉(zhuǎn)染,。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在250μl無血清,、無雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無血清,、無雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000，室溫培育5min,。將上述2種稀釋液混勻,。D-熒光素鉀鹽使用濃度怎么樣？南通熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    每孔加入100μl養(yǎng)24h后,，Luciferin使其終濃度為150μg/ml,，PBS，再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測(cè),，分析發(fā)光強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)之間的相關(guān)性,。4)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線繪制MCF7-luc細(xì)胞和作為對(duì)照取表達(dá)熒光素酶的MCF-7細(xì)胞，接種于24孔板,，接種密度為2×104/孔,。細(xì)胞接種后1～7d，每天胰蛋白酶消化其中3孔細(xì)胞,，用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定細(xì)胞數(shù),。以細(xì)胞生長(zhǎng)天數(shù)為橫坐標(biāo)，細(xì)胞數(shù)目為縱坐標(biāo),，分別繪制兩種細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,。二．動(dòng)物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠，4～5周齡,，體重（15±2）g,，雌雄各3只。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF-7用PBS重懸為2．5×10/ml懸液,，每只裸鼠左右背側(cè)近腋部皮下接種100μl,，共接種6只。接種后第5d采用德國(guó)BERTHOLD公司的活題成像系統(tǒng)檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度,。以后每5d觀測(cè)一連續(xù)觀測(cè)30d,。觀測(cè)前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉（計(jì)量為：35mg/kg體重），按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin（invivograde）,，10min后,，進(jìn)行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長(zhǎng)情況，定量分析各時(shí)間點(diǎn)的熒光值,。繪制腫大的瘤皮下生長(zhǎng)曲線.MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學(xué)觀察MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下接種后25d,，脫頸處死小鼠，取腫大的瘤組織，制成石蠟切片,，切片厚度為3μm,。泰州熒光素D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存D-熒光素鉀鹽長(zhǎng)期保存是有效期一年。

    但是上一次底物的殘留曲線可以知道,，可以控制對(duì)下一次觀察結(jié)果的影響。儲(chǔ)存與運(yùn)輸一般放在-20℃的冰箱即可,，半年以上不使用放在-80℃的冰箱,，溶解配制后放在4℃冰箱，短期運(yùn)輸放在4℃環(huán)境,。建議現(xiàn)用現(xiàn)配,，D熒光素鉀鹽在液體中容易降解。應(yīng)用領(lǐng)域腫大的瘤,，干細(xì)胞,，藥物開發(fā)，基因治的好,，轉(zhuǎn)基因小鼠,，免疫學(xué)等等。英文名字firefly.中文名稱熒光素酶,，重組熒光素貨號(hào)AAT-12500規(guī)格￥1430/1mL背景資料：熒光素酶是來自北美螢火蟲（Photinuspyralis）中熒光素酶基因的克隆和重組表達(dá),，它為實(shí)驗(yàn)研究或者用生物熒光試劑制備試劑盒檢測(cè)ATP或者熒光素底物提供了可信度和可靠性。這種重組酶可以克服由天然資源純化獲得熒光素酶時(shí)受季節(jié)和地方區(qū)域變化的影響,。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,，在luciferin氧化的過程中，會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence),，可通過熒光測(cè)定儀設(shè)備測(cè)定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光,，常應(yīng)用于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗(yàn)證等方向研究。產(chǎn)品形式提供的熒光素酶*重組熒光素*產(chǎn)品為溶液形式,。作者：思存鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有,。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處,。

    熒光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶,、馬鈴薯等一些生物可以合成熒光素酶,。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段，可以對(duì)整個(gè)動(dòng)物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析：將不同類型的細(xì)胞（骨髓干細(xì)胞,、T細(xì)胞等）標(biāo)記上（即表達(dá)）熒光素酶,，就可以用高敏感度的CCD相機(jī)進(jìn)行對(duì)動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行活ti觀察而不會(huì)傷害到動(dòng)物本身。在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光，而發(fā)出的光子可以被光敏感元件,，如熒光探測(cè)器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測(cè)到,。這就使得對(duì)包括影響在內(nèi)的多種生命活動(dòng)進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能。例如,，熒光素酶可以被用于檢測(cè)血庫(kù)中所存血液中的紅血球是否開始破裂,。法醫(yī)可以用含有熒光素酶的溶液來檢測(cè)犯罪現(xiàn)場(chǎng)中殘留的血跡。醫(yī)院用熒光素酶的發(fā)光來發(fā)現(xiàn)特定的疾病,。熒光素酶還可以作為“報(bào)告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中,，例如，用于在轉(zhuǎn)染過熒光素酶的細(xì)胞中檢測(cè)特定啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測(cè)細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平,；這一技術(shù)被稱為報(bào)告基因檢測(cè)法或熒光素酶檢測(cè)法（LuciferaseAssay）,。熒光素酶是一個(gè)熱敏感蛋白，因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護(hù)能力,。D-熒光素鉀鹽運(yùn)輸條件是4℃冰袋運(yùn)輸,。

    SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級(jí)純（）應(yīng)用：1）體外化學(xué)發(fā)光分析（invitro）；2）***成像實(shí)驗(yàn)（invivo）,；3）高靈敏度ATP分析,；步驟：Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測(cè)1）用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽，配制成100mM的儲(chǔ)存液（200×,，濃度30mg/ml）,。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存,。2）用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液,，配置工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基,。4）待圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析,。Protocol2：Invivoanalysis/***成像分析1）用無菌的PBS（w/oMg2+,、Ca2+）配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL)，,。一旦使用,，保持冰冷且避光。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物,，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,，尤其是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光（見下圖）,。當(dāng)熒光素過量時(shí),，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后,，導(dǎo)入研究動(dòng)物如大,、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素,，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測(cè)光強(qiáng)度變化,。D-熒光素也常用于身體的外部研究。鹽城熒光素D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商

D-熒光素鉀鹽測(cè)試需要滿足哪些條件,？南通熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號(hào)在大量檢測(cè)板之間提供一致的信號(hào)與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑（Renillareniformis）分離的36kDa蛋白,。與螢火蟲熒光素酶相比，海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同,。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素,，產(chǎn)生480nm的藍(lán)光,。與螢火蟲螢光素酶類似,，海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報(bào)告檢測(cè)。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定Amplite?Renilla螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（#AAT-12535）提供了一種快速,，靈敏的方法,，可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測(cè)中檢海腎螢光素酶的活性，與海腎螢光素酶相互作用后,，該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物,。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒特點(diǎn)：該測(cè)定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測(cè)量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個(gè)試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測(cè)所必不可少的組分各類螢光素酶底物，輔因子和物理特性：近幾十年來,，腺苷三磷酸(ATP)生物發(fā)光技術(shù)得到了很大的發(fā)展,，已經(jīng)在細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性和生物量計(jì)數(shù)等方面廣泛應(yīng)用,。南通熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

南京翌科生物科技有限公司位于仙林街道緯地路9號(hào)江蘇生命科技園F7棟301-3室,。公司業(yè)務(wù)涵蓋外泌體提取，非編碼RNA試劑,，檢測(cè)試劑,，轉(zhuǎn)染試劑等，價(jià)格合理,，品質(zhì)有保證,。公司注重以質(zhì)量為中心，以服務(wù)為理念,，秉持誠(chéng)信為本的理念,，打造商務(wù)服務(wù)良好品牌。翌科生物立足于全國(guó)市場(chǎng),，依托強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力,，融合前沿的技術(shù)理念,，飛快響應(yīng)客戶的變化需求。