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蘇州專業(yè)做D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

來源: 發(fā)布時間:2022-05-25

    海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報告檢測,。Amplite?海腎熒光素酶報告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報告基因檢測試劑盒提供了一種快速,,靈敏的方法,,可以使用專有的發(fā)光配方在基于細胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性,,與海腎螢光素酶相互作用后,,該試劑產(chǎn)生具有強光的產(chǎn)物,。Amplite?海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒特點:該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達或基因表達每個試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分,。熒光素酶是生物體內(nèi)催化熒光素等物質(zhì)氧化發(fā)光的一類酶的總稱,。自然界中,,不同的發(fā)光生物擁有不同的熒光素酶,,除了螢火蟲熒光素酶(FireflyLuciferase)之外,還有發(fā)光細菌體內(nèi)的細菌熒光素酶,、發(fā)光海星的海星熒光素酶等,。目前,人們對螢火蟲熒光素酶的研究**多,、應(yīng)用***,。一則關(guān)于手機上的細菌的新聞里,**在用ATP熒光檢測儀檢測手機表面的細菌,。ATP是一種在動物,、植物和細菌等活細胞中都存在的能量物質(zhì),由前述的反應(yīng)式可知,,ATP與熒光素,、熒光素酶反應(yīng)發(fā)出熒光。檢測樣品中的微生物越多,,ATP就越多,,熒光反應(yīng)的光亮就越大。D-熒光素有時候也叫游離酸,。蘇州專業(yè)做D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol純度:高級純()應(yīng)用:1)體外化學(xué)發(fā)光分析(invitro),;2)***成像實驗(invivo);3)高靈敏度ATP分析,;步驟:Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1)用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽,,配制成100mM的儲存液(200×,濃度30mg/ml),?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2)用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液,,配置工作液(終濃度150μg/mL),。3)去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,,向細胞內(nèi)添加1×熒光素工作液,,然后進行圖像分析,。Protocol2:Invivoanalysis/***成像分析1)用無菌的PBS(w/oMg2+、Ca2+)配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL),,,。一旦使用,保持冰冷且避光,。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,,普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域,尤其是體內(nèi)***成像技術(shù),。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下,,熒光素(底物)能夠被氧化發(fā)光(見下圖)。當(dāng)熒光素過量時,,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性,。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細胞后,導(dǎo)入研究動物如大,、小鼠體內(nèi),,之后注入熒光素,通過生物發(fā)光成像技術(shù)(BLI)來檢測光強度變化,。揚州D-熒光素鉀鹽活題成像D-熒光素鉀鹽適用于哪些領(lǐng)域?

    D-熒光素鉀鹽是一種化學(xué)品,。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,,普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是體內(nèi)活題成像技術(shù),。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下,,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時,,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見下圖),。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉(zhuǎn)染入細胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達細胞株,構(gòu)建原位腫大的瘤模型,,之后注入熒光素底物,,通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強度變化,從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進行藥物藥效評價等,。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響,,根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。注:在抗腫大的瘤藥物藥效評價試驗中,,由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達標(biāo)定腫大的瘤大小,,受腫大的瘤生長所發(fā)生的腫大的瘤內(nèi)部壞死影響,生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評價腫大的瘤生長,,在抗腫大的瘤藥效評價有較高要求的實驗中,,建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長,。D-熒光素也常用于體外研究。

    熒光素也就是FDAFDA可透過細胞膜并作為熒光素積蓄在活細胞內(nèi),。由于熒光素較BCECF或Calcein的親水性低,,因此熒光素從細胞中滲漏的量也高。FDA也可用于流式細胞儀,。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長分別為488nm和530nm,。熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶,。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP),。沒有熒光素酶的情況下,,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似),。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光,。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M,。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,,而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,雖然它們各不相同,。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng),。南京靠譜的D-熒光素鉀鹽測試公司。

    后者能夠易溶于水或緩沖液中,,使用方便,,溶劑無毒性,特別適合體內(nèi)實驗,。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運輸和保存運輸條件:4℃冰袋運輸,;短期保存:4℃干燥避光長期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,,配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),混勻,。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3)去除細胞培養(yǎng)基,。4)待圖像分析前,向細胞內(nèi)添加熒光素工作液,,37℃孵育5-10min,,然后進行圖像分析。2.***成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌,。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,。3)腹腔注射(.),,按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射,以小鼠為例,,每只小鼠體重假定20g,,每只小鼠用量3mg;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期)后進行成像分析,。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,,從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期。 D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司,。nanoluc 熒光素酶

熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽,。蘇州專業(yè)做D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

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