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蘇州熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長(zhǎng)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-05-28

    后者能夠易溶于水或緩沖液中,使用方便,,溶劑無(wú)毒性,,特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的差別,。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件:4℃冰袋運(yùn)輸;短期保存:4℃干燥避光長(zhǎng)期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),,混勻。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,,37℃孵育5-10min,,然后進(jìn)行圖像分析。2.***成像分析1)用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,,混勻。2)用μm濾膜過(guò)濾除菌,。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,。3)腹腔注射(.),,按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,以小鼠為例,,每只小鼠體重假定20g,,每只小鼠用量3mg;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期)后進(jìn)行成像分析。注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,,從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期,。 D-熒光素鉀鹽測(cè)試方法是體外生物發(fā)光檢測(cè)。蘇州熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長(zhǎng)

    或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4)待圖像分析前,,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,,然后進(jìn)行圖像分析,。2.***成像分析1)用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,,混勻,。2)用μm濾膜過(guò)濾除菌。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。3)腹腔注射(.),,按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,。4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期)后進(jìn)行成像分析。注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,,從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期,。注意事項(xiàng)1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲(chóng)熒光素(beetleluciferin)只只是不同公司在命名上的差異,都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylicacid。2)注射方式,、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間,。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),,盡量避免外源ATP的污染,如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,,在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水,。徐州專業(yè)做D-熒光素鉀鹽試劑D-熒光素鉀鹽母液保存條件是-20℃避光。

    LAR)Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測(cè)試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),,為靈敏,、非放射性的報(bào)告基因檢測(cè)拉開(kāi)了序幕。LAR與螢火蟲(chóng)螢光素酶(luc)報(bào)告基因一起,,為研究人員開(kāi)始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具,。[1]1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)(DLR)DLR是第一種允許在單個(gè)樣本中依次檢測(cè)兩個(gè)報(bào)告基因的試劑,。通過(guò)允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化,在提高報(bào)告基因檢測(cè)的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展,。此外,,pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲(chóng)螢光素酶基因,luc+,。這個(gè)改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來(lái)被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上,,通過(guò)生物信息學(xué)和合成方法,,實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn),。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲(chóng)螢光素酶(Enliten)基礎(chǔ)上,改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶,。UltraGlo?的開(kāi)發(fā)是在各種檢測(cè)和儲(chǔ)藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測(cè)的關(guān)鍵,。此后,通過(guò)開(kāi)發(fā)新的方法來(lái)改變螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)的信號(hào)動(dòng)力學(xué),,例如Bright-Glo?,、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測(cè)。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡(jiǎn)化了樣品處理,。

    可用熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)靈敏方便地測(cè)定熒光素酶基因的表達(dá),。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn):①非放射性;②比CAT及其他報(bào)告基因速度快,;③比CAT靈敏100倍,;④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí),在植物中的半衰期為3.5小時(shí),。由于半衰期短,,故啟動(dòng)子的改變會(huì)即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變,而熒光素酶不會(huì)積累,。相反,,CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí)。熒光素酶濃度在10—16mol/L(10pS/L)到10-8mol/L(1mg/L)范圍內(nèi),,熒光信號(hào)強(qiáng)度與酶濃度成正比,。在理想條件下,可檢測(cè)到l0-20mol/L的熒光素酶,。檢測(cè)步驟:1.用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測(cè)啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),。2.設(shè)計(jì)引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動(dòng)子片段,將此片段插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒(pGL3-basic)中,。3.篩選陽(yáng)性克隆,,測(cè)序。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用,。4.?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒,,提純備用。同時(shí)準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對(duì)照,提純備用,。5.培養(yǎng)293(或其它目的細(xì)胞),,并接種于24孔板中,生長(zhǎng)10-24小時(shí)(80%匯合度),。6.將報(bào)告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,。7.提取蛋白并用于熒光素酶檢測(cè)。8.加入底物,,測(cè)定熒光素酶的活性,。9.計(jì)算相對(duì)熒光強(qiáng)度,并與空載對(duì)照比較,。D-熒光素鉀鹽檢測(cè)公司招代理嗎,?

    SodiumSalt/D熒光素鈉鹽分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol純度:高級(jí)純()應(yīng)用:1)體外化學(xué)發(fā)光分析(invitro);2)***成像實(shí)驗(yàn)(invivo),;3)高靈敏度ATP分析,;步驟:Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用mL蒸餾水溶解gD-熒光素鈉鹽,配制成100mM的儲(chǔ)存液(200×,,濃度30mg/ml),。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存,。2)用組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液,,配置工作液(終濃度150μg/mL)。3)去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基,。4)待圖像分析前,,向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液,然后進(jìn)行圖像分析,。Protocol2:Invivoanalysis/***成像分析1)用無(wú)菌的PBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL),,。一旦使用,,保持冰冷且避光。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,,普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,,尤其是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,,熒光素(底物)能夠被氧化發(fā)光(見(jiàn)下圖),。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí),產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性,。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后,,導(dǎo)入研究動(dòng)物如大,、小鼠體內(nèi),之后注入熒光素,,通過(guò)生物發(fā)光成像技術(shù)(BLI)來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化,。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試品牌有哪些?無(wú)錫熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明

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    附錄ⅧB(niǎo)),,與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對(duì)照液比較,不得更濃(),。干燥失重取本品,,在105℃干燥至恒重,減失重量不得過(guò)%(附錄ⅧL),。鋅鹽取本品,,加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后,加稀鹽酸2ml,,搖勻,濾過(guò),,濾液中加亞鐵**鉀試液1ml,,不得發(fā)生渾濁。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,,點(diǎn)于濾紙上,,即生成黃色斑點(diǎn),趁濕置溴蒸氣中,,1分鐘后再使與氨蒸氣接觸,,斑點(diǎn)即變?yōu)樯罘奂t色。(2)本品的水溶液顯強(qiáng)烈的熒光,,用大量的水稀釋后仍極明顯,;但加酸使成酸性后,熒光即消失,;再加堿使成堿性,,熒光又顯出。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)(附錄Ⅲ),。6含量測(cè)定編輯取本品約,,精密稱定,加水20ml溶解后,,加稀鹽酸5ml使熒光素析出,,用丁醇-氯仿(1:1)提取4次,每次20ml,,合并提取液,,用水10ml洗滌,,洗液再用異丁醇-氯仿(1:1)5ml振搖提取,合并提取液,,置105℃恒重的容器中,,在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干,殘?jiān)靡掖?0ml溶解后,,再置水浴上蒸干,,并在105℃干燥至恒重,精密稱定,,殘?jiān)亓颗c相乘,,即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量。熒光素鈉是一種有機(jī)化合物,,分子式為C20H10Na2O5,,橙紅色粉末,無(wú)氣味,,有吸濕性,;易溶于水,溶液呈黃紅色,,并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光,。蘇州熒光素鉀鹽D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長(zhǎng)

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