4)待圖像分析前,向細胞內(nèi)添加熒光素工作液,,37℃孵育5-10min,,然后進行圖像分析。2.活ti成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,,混勻,。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復凍融。3)腹腔注射(.),,按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射,,以小鼠為例,每只小鼠體重假定20g,,每只小鼠用量3mg,;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期)后進行成像分析。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線,,從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期。注意事項1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin),、螢光素鉀鹽只是不同別名,,以CAS號115144-35-9為準。2)注射方式,、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線,確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間,。3)如果要進行ATP的檢測,,盡量避免外源ATP的污染,如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,,在進行熒光素的溶解時應使用ATP-free無菌水。4)為避免反復凍融,,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,,如有條件,,可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存。D-熒光素鉀鹽如何選擇合作公司,?揚州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽
可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達,。熒光素酶報告基因有許多優(yōu)點:①非放射性,;②比CAT及其他報告基因速度快,;③比CAT靈敏100倍;④熒光素酶在哺乳細胞中的半衰期為3小時,,在植物中的半衰期為3.5小時,。由于半衰期短,,故啟動子的改變會即時導致熒光素酶活性的改變,,而熒光素酶不會積累,。相反,,CAT在哺乳細胞中的半衰期為50小時,。熒光素酶濃度在10—16mol/L(10pS/L)到10-8mol/L(1mg/L)范圍內(nèi),,熒光信號強度與酶濃度成正比,。在理想條件下,,可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶,。檢測步驟:1.用生物信息學方法分析并預測啟動子區(qū)可能的轉錄因子結合位點,。2.設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段,將此片段插入到熒光素酶報告基因質(zhì)粒(pGL3-basic)中,。3.篩選陽性克隆,,測序。擴增克隆并提純質(zhì)粒備用,。4.擴增轉錄因子質(zhì)粒,,提純備用,。同時準備相應的空載質(zhì)粒對照,,提純備用,。5.培養(yǎng)293(或其它目的細胞),,并接種于24孔板中,,生長10-24小時(80%匯合度),。6.將報告基因質(zhì)粒與轉錄因子表達質(zhì)粒共轉染細胞,。7.提取蛋白并用于熒光素酶檢測,。8.加入底物,,測定熒光素酶的活性。9.計算相對熒光強度,,并與空載對照比較,。羥基丁酸試劑盒D-熒光素鉀鹽使用的是什么技術,?
室溫培育30min后加入細胞孔板中,,置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。2)單克隆細胞篩選轉染24h后胰酶消化細胞并按1∶6比例接種到新6孔板中,,同時加入實驗確定的濃度G418,,隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細胞抗性克隆的出現(xiàn),。分別挑選單一抗性克隆至96孔板,,待其逐漸增殖后轉入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng),。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時用LuciferaseAs-sayAystem檢測熒光素酶活性,。檢測時,,各克隆按1×105個/孔接種到24孔板,,24h后細胞裂解液裂解12000rpm,,4℃離心10min,,收集裂解物,,取上清10μl加入96孔白板中,,向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物,,停留2s后,,取10s的熒光值(RLU),,每個克隆設3個復孔,保留RLU值高的細胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng),,再過5代后進行熒光素酶活性檢測。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代,,熒光素酶活性更高的幾個克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數(shù)量細胞克隆的熒光值檢測7-luc陽性克隆細胞按細胞數(shù)將篩出的MCF-4×104,、2×104、1×104,、5000,、2500、1250,、625,、312和156分別接種到96孔黑板中,另外一組只有細胞,,一組只有培養(yǎng)基作對照,,設置2個復孔,常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次,。
附錄ⅧB),,與標準硫酸鉀溶液制成的對照液比較,不得更濃(),。干燥失重取本品,,在105℃干燥至恒重,,減失重量不得過%(附錄ⅧL),。鋅鹽取本品,加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后,,加稀鹽酸2ml,,搖勻,,濾過,,濾液中加亞鐵**鉀試液1ml,,不得發(fā)生渾濁,。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,,點于濾紙上,,即生成黃色斑點,,趁濕置溴蒸氣中,,1分鐘后再使與氨蒸氣接觸,,斑點即變?yōu)樯罘奂t色,。(2)本品的水溶液顯強烈的熒光,,用大量的水稀釋后仍極明顯,;但加酸使成酸性后,熒光即消失;再加堿使成堿性,,熒光又顯出。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(附錄Ⅲ),。6含量測定編輯取本品約,,精密稱定,,加水20ml溶解后,,加稀鹽酸5ml使熒光素析出,,用丁醇-氯仿(1:1)提取4次,每次20ml,,合并提取液,,用水10ml洗滌,,洗液再用異丁醇-氯仿(1:1)5ml振搖提取,,合并提取液,,置105℃恒重的容器中,,在水浴上通風蒸發(fā)至干,,殘渣用乙醇10ml溶解后,,再置水浴上蒸干,,并在105℃干燥至恒重,,精密稱定,,殘渣重量與相乘,即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量,。熒光素鈉是一種有機化合物,,分子式為C20H10Na2O5,,橙紅色粉末,,無氣味,,有吸濕性,;易溶于水,,溶液呈黃紅色,,并帶極強的黃綠色熒光,。南京靠譜的D-熒光素鉀鹽測試公司,。
重組為一個明亮的螢光素酶,。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,從而可以進行蛋白質(zhì)相互作用的測定,;也可以和HiBiT一樣高,,從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究,,我們將與LgBiT具有極強親和作用的,。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標簽,具有多種功能,,例如當與基于CRIPSR的標簽一起使用時,,可以創(chuàng)建內(nèi)源性報告基因模型。[1]2020Lumit?技術隨著NanoBiT?技術的發(fā)展,,人們認識到可以利用該系統(tǒng)通過結合免疫測定的組分檢測多種分析物,。由此產(chǎn)生的平臺(現(xiàn)稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法。熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,,其中更有代表性的是一種學名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶,。在相應化學反應中,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,,有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷(ATP),。沒有熒光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應的速率非常慢,,而鈣離子的存在常??梢赃M一步加速反應(與肌肉收縮的情況相似)。熒光生成反應通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸,。D-熒光素鉀鹽測試怎么樣,?羅丹明b-聚乙二醇-生物素
光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關性。揚州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽
經(jīng)HE染色后觀察細胞的病理形態(tài)學,?;铑}動物成像技術是近期發(fā)展起來的一種新型穩(wěn)定可靠,是檢測動物體內(nèi)分子及細胞事件的影像檢測技術,強有力手段,。利用生物發(fā)光成像(BLI)可以對活題病灶的大小進行無損傷直觀準確檢測,。我們有自己的獨自有機合成實驗室,可以生產(chǎn)合成各種化學發(fā)光試劑,,我們可以提供化學發(fā)光試劑,、化學發(fā)光底物,、發(fā)光標記物、發(fā)光增強劑,、染料探針類,、微生物和酶的顯色底物以及體外診斷試劑。相關列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇丙的酮酸三(環(huán)已胺)鹽PEP0c835bf4-aae2-43c1-be81-e57液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4結合物吖啶酯-T3結合物吖啶磺酰胺鹽-N-乙胺基馬來酰亞胺吖啶磺酰胺鹽-T4結合物吖啶磺酰胺鹽-T3結合物生物素-T4結合物化學發(fā)光分析試劑及標記物生物素-T3結合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PE,。揚州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽
南京翌科生物科技有限公司是一家翌科生物基于團隊十余年的研發(fā)基礎,建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉化平臺,。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,,包括外泌體提取與檢測試劑、非編碼 RNA 提取與檢測試劑,、轉染試劑,、microRNA 表達文庫、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子,、細胞,、動物的綜合科技服務等 100 多種試劑和科研外包服務。公司堅持國產(chǎn)試劑自主研發(fā),,服務全國各級高校,、研究所、醫(yī)院,、第三方檢測機構,、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的公司,,致力于發(fā)展為創(chuàng)新務實,、誠實可信的企業(yè)。翌科生物擁有一支經(jīng)驗豐富,、技術創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團隊,,以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供外泌體提取,非編碼RNA試劑,,檢測試劑,,轉染試劑。翌科生物繼續(xù)堅定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路,,既要實現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長,,又要聚焦關鍵領域,實現(xiàn)轉型再突破,。翌科生物始終關注商務服務市場,,以敏銳的市場洞察力,實現(xiàn)與客戶的成長共贏,。