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熒光素酶活性

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-05-30

    這是一種小分子(19kDa)單體酶,,具有獨(dú)特的底物,,其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報(bào)告基因有著***的應(yīng)用前景,,為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ),。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征,。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)的供體。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn),,紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測(cè)定相關(guān)的一些挑戰(zhàn),。可將這些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測(cè)量靶蛋白的結(jié)合,,或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì):蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè),。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng),,即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?,。該系統(tǒng)由兩部分組成:11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大,更精細(xì)的NanoLuc?亞基,,LgBiT,。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合,重組為一個(gè)明亮的螢光素酶,。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,,從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測(cè)定,;也可以和HiBiT一樣高,從而允許自我組裝,。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究,。D-熒光素鉀鹽的合作平臺(tái)有哪些?熒光素酶活性

    熒光素鈉[1],,橙紅色粉末,,無氣味,有吸濕性,;易溶于水,,溶液呈黃紅色,并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光,,酸化后消失,,中和或堿化后又出現(xiàn),微溶于乙醇,;比較大吸收波長(zhǎng)(水),。基本信息藥品名稱熒光素鈉拼音名Yingguangsuna英文名FLUORESCEINSODIUM來源(分子式)與標(biāo)準(zhǔn)本品為9-(鄰羧基苯基)-6-羥基-3H-噸-3-酮二鈉鹽,。按干燥品計(jì)算,,含C20H10Na2O5不得少于。類別診斷用藥,。劑量滴眼2%溶液貯藏密封保存,。制劑熒光素鈉注射液2化學(xué)性質(zhì)編輯中文名稱:熒光素鈉中文別名:熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名稱:FluoresceindisodiumsaltCAS號(hào):518-47-8[2]熒光素鈉分子式:C20H10Na2O5分子量:等級(jí):BSMDL號(hào):MFCD00167039Beilstein號(hào):3833041EC號(hào):208-253-0熒光素鈉[1]3性狀描述編輯本品為橙紅色粉末;無臭,,幾乎無味,;有引濕性。本品在水中易溶,,在乙醇中略溶,。橙紅色粉末,無氣味,,有吸濕性,;易溶于水,溶液呈黃紅色,,并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光,,酸化后消失,中和或堿化后又出現(xiàn),,微溶于乙醇,;比較大吸收波長(zhǎng)(水)。4檢查資料編輯氯化物取本品,,分取溶液10ml,,依法檢查(附錄ⅧA),,與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液制成的對(duì)照液比較,不得更濃(),。硫酸鹽取上述氯化物項(xiàng)下剩余的溶液25ml,,依法檢查。上海游離酸D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商D-熒光素鉀鹽長(zhǎng)期保存是有效期一年,。

    螢光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世,。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期,,這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺(tái)。1991年,,Promega發(fā)布了***代螢光素酶分析產(chǎn)品,并啟動(dòng)了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計(jì)劃,,通過持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù),。Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月,Promega***提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報(bào)告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性,。當(dāng)時(shí)的人們認(rèn)為,,螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性、極高的靈敏度和快速簡(jiǎn)單的檢測(cè)流程等特點(diǎn),,可能會(huì)對(duì)分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響,。幾個(gè)月后,***代螢火蟲螢光素酶報(bào)告基因載體和檢測(cè)試劑在Promega誕生,,使這項(xiàng)新技術(shù)正式并更***地為全球研究人員服務(wù),。隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新,,保持技術(shù)***的地位,。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。[1]1991螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng),。

    具體實(shí)驗(yàn)流程:注:該操作流程通常用來檢測(cè)轉(zhuǎn)染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細(xì)胞中熒光素酶表達(dá)的活性,,不適用于對(duì)細(xì)菌熒光素酶進(jìn)行檢測(cè)。1.實(shí)驗(yàn)***天,,消化并接種細(xì)胞(根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇合適的細(xì)胞)于35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿,,置于5%CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜,。2.等細(xì)胞密度達(dá)到70%時(shí)用Luciferase報(bào)告基因質(zhì)粒,、LacZ的表達(dá)質(zhì)粒及其它質(zhì)粒(根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)確定)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞(根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)選擇轉(zhuǎn)染方法,如磷酸鈣沉淀法,、PEI,、lipofectamine2000等均可),。3.轉(zhuǎn)染24-36h后,吸取培養(yǎng)液,,用預(yù)冷的PBS(無鈣和鎂離子)洗滌細(xì)胞,。注:熒光酶的酶促反應(yīng)會(huì)被痕量的鈣所抑制,故用磷酸鈣轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在收集細(xì)胞前應(yīng)充分洗滌除去含鈣介質(zhì),。4.在每個(gè)培養(yǎng)皿中加入350μl預(yù)冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細(xì)胞,。5.在細(xì)胞裂解期間,準(zhǔn)備足量的ml微量離心管,,將ATPbuffer與luciferinbuffer以1:,,每管100μl。6.依次取等體積的細(xì)胞裂解液(100μl)至步驟5中的離心管中,,迅速混勻,,在發(fā)光儀(Luminometer)上讀取吸光值。注:發(fā)光反應(yīng)會(huì)迅速衰減,,將細(xì)胞裂解液加入反應(yīng)液后5s內(nèi)必須讀取吸光值,。7.確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試哪個(gè)公司好,?

    是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因,,即NanoLuc?螢光素酶,。這是一種小分子(19kDa)單體酶,具有獨(dú)特的底物,,其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍,。這種新型的報(bào)告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景,為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ),。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征,。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)的供體。一項(xiàng)針對(duì)各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn),,紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測(cè)定相關(guān)的一些挑戰(zhàn),。可將這些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測(cè)量靶蛋白的結(jié)合,,或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì):蛋白質(zhì)相互作用的檢測(cè),。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng),,即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?,。該系統(tǒng)由兩部分組成:11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大,更精細(xì)的NanoLuc?亞基,LgBiT,。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合,。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試真的靠譜嗎?專業(yè)做D-熒光素鉀鹽活題成像

D-熒光素鉀鹽母液保存條件是-20℃避光,。熒光素酶活性

    2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇**酸三(環(huán)已胺)鹽PEP病毒保存液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4結(jié)合物吖啶酯-T3結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-N-乙胺基馬來酰亞胺吖啶磺酰胺鹽-T4結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-T3結(jié)合物生物素-T4結(jié)合物化學(xué)發(fā)光分析試劑及標(biāo)記物生物素-T3結(jié)合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲,,游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素運(yùn)輸和保存冰袋運(yùn)輸;-20℃干燥避光保存,;有效期一年,。使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鈉鹽,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),,混勻,。立即使用。熒光素酶活性

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