更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲(chóng),,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類(lèi)臍菇,,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲(chóng)中,,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入,。一些生物,,如叩頭蟲(chóng),,含有多種不同的熒光素酶,,能夠催化同一熒光素底物,,而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲(chóng)有2000多種,,而叩甲總科(包括螢火蟲(chóng),、叩頭蟲(chóng)和相關(guān)昆蟲(chóng))則有更多,,因此它們的熒光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。目前研究得更透徹的熒光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲(chóng)中的北美螢火蟲(chóng)(Photinuspyralis)。免疫熒光法免疫熒光法的基本原理是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素,,當(dāng)與其相對(duì)應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時(shí),,在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見(jiàn)發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位,,檢測(cè)出抗原或抗體,。常用的熒光素有①異硫氰酸熒光素(fluoreceinisothiocyante,F(xiàn)ITC),,為黃色,、橙黃色或褐黃色結(jié)晶粉末,有兩種異構(gòu)體,,易溶于水和酒精等溶劑,。分子量為389,更大吸收光譜為490~495,,更大發(fā)射光譜為520~530urn,,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光,是更常用的標(biāo)記抗體的熒光素,。②四甲基異氰酸羅達(dá)明,。D-熒光素鉀鹽的測(cè)試方法有哪幾種?鹽城ATPD-熒光素鉀鹽公司
短期保存:4℃干燥避光長(zhǎng)期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),,混勻。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。作者:思存鏈接:zhuanlan./p/來(lái)源:知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),,非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處,。高斯熒光素酶近年來(lái),其他熒光素酶(例如高斯熒光素酶)的使用有所增加,,因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,,并且不需要ATP的存在,。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì),可通過(guò)氧氣催化腔腸素氧化,,產(chǎn)生光,。來(lái)自于海洋足類(lèi)高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來(lái)。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(#AAT-12530)使用專有的發(fā)光配方來(lái)定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性,。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),,產(chǎn)sheng發(fā)光產(chǎn)物,該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光,。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定試劑盒特點(diǎn):提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度,。連云港熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明做D-熒光素鉀鹽測(cè)試價(jià)格是多少。
從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的***功效等,。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響,,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol純度:高級(jí)純()應(yīng)用:1)活細(xì)胞,、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析,;2)***用于報(bào)告基因分析,免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析,;Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測(cè)1)配制成100mM的儲(chǔ)存液(200×,,濃度30mg/ml)?;靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存,。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液,配制工作液(終濃度150μg/mL),。3)去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無(wú)殘留,。4)圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液,然后進(jìn)行圖像分析(或者細(xì)胞放在37℃短時(shí)間孵育后檢測(cè)可增強(qiáng)信號(hào)),。D-熒光素鉀鹽注:螢光素,、螢光素酶、螢火蟲(chóng)螢光素酶,、螢光素鉀鹽,、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱作熒光素、熒光素酶,、螢火蟲(chóng)熒光素酶,、熒光素鉀鹽、熒光素鈉鹽,。Protocol2:Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1)用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL),,。一旦使用,,保持冰冷且避光,。
8.取剩余裂解液測(cè)定LacZ的活性,其讀數(shù)作為內(nèi)標(biāo)用以矯正熒光素酶的讀數(shù),。9.用矯正后的讀數(shù)作圖,,分析數(shù)據(jù)。注:熒光素見(jiàn)光易氧化,,已稀釋未用的熒光素應(yīng)丟棄,。注意事項(xiàng):1.熒光素酶檢測(cè)試劑需在15-25℃條件下預(yù)平衡后再進(jìn)行反應(yīng),而后依據(jù)具體條件進(jìn)行自動(dòng)或手動(dòng)檢測(cè),。當(dāng)用液閃計(jì)數(shù)儀時(shí),,加入熒光素酶檢測(cè)試劑后立即輕輕混勻,。2.如果細(xì)胞裂解后不能立即對(duì)提取物進(jìn)行檢測(cè),,樣品可以在冰上保存大約5h,在-70℃可保存數(shù)月,。不要反復(fù)凍融以避免酶活性的降低,。3.利用上述方法檢測(cè)冷的樣品時(shí),其信號(hào)強(qiáng)度將下降5-15%,。4.在熒光素酶活性較高的情況下,,導(dǎo)致信號(hào)超出線性范圍(信號(hào)溢出)可用裂解液將樣品進(jìn)行稀釋。5.不要儲(chǔ)存稀釋過(guò)的樣品,。如果必須保存,,要在稀釋的樣品中加入BSA至終濃度為,這樣可以保持樣品的穩(wěn)定性,。6.一些熒光儀在進(jìn)行檢測(cè)前需要1-2s的穩(wěn)定,,因此建議在開(kāi)機(jī)后過(guò)一段時(shí)間再進(jìn)行檢測(cè)操作。熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)主要有哪些用途,?a.啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析,,將啟動(dòng)子區(qū)域序列(通常2k左右)進(jìn)行分段截短,或?qū)μ囟ㄎ稽c(diǎn)進(jìn)行突變,,再分別構(gòu)建入luciferase報(bào)告載體,,檢測(cè)其啟動(dòng)子活性。b.啟動(dòng)子SNP分析,,一些基因的啟動(dòng)子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性,。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試找哪家公司?
或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4)待圖像分析前,,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,,37℃孵育5-10min,然后進(jìn)行圖像分析,。2.***成像分析1)用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,混勻,。2)用μm濾膜過(guò)濾除菌,。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,。4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期)后進(jìn)行成像分析,。注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期,。注意事項(xiàng)1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲(chóng)熒光素(beetleluciferin)只只是不同公司在命名上的差異,都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylicacid,。2)注射方式、動(dòng)物類(lèi)型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,,確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),,盡量避免外源ATP的污染,,如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水,。D-熒光素鉀鹽測(cè)試需要滿足哪些條件,?南京體外研究D-熒光素鉀鹽
D-熒光素鉀鹽檢測(cè)的安全性如何保障?鹽城ATPD-熒光素鉀鹽公司
螢光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲(chóng)體內(nèi)的螢光素酶,,螢火蟲(chóng)發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期,,這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺(tái),。1991年,Promega發(fā)布了***代螢光素酶分析產(chǎn)品,,并啟動(dòng)了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計(jì)劃,,通過(guò)持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù)。Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月,,Promega***提出螢火蟲(chóng)螢光素酶(Luc)作為一種新興報(bào)告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性,。當(dāng)時(shí)的人們認(rèn)為,螢火蟲(chóng)螢光素酶具備的生物發(fā)光特性,、極高的靈敏度和快速簡(jiǎn)單的檢測(cè)流程等特點(diǎn),,可能會(huì)對(duì)分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響,。幾個(gè)月后,***代螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因載體和檢測(cè)試劑在Promega誕生,,使這項(xiàng)新技術(shù)正式并更***地為全球研究人員服務(wù),。隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新,,保持技術(shù)***的地位,。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。[1]1991螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng),。鹽城ATPD-熒光素鉀鹽公司
南京翌科生物科技有限公司致力于商務(wù)服務(wù),,以科技創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)***管理的追求。翌科生物作為翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),,建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái),。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,包括外泌體提取與檢測(cè)試劑,、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑,、轉(zhuǎn)染試劑,、microRNA 表達(dá)文庫(kù),、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子、細(xì)胞,、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù),。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校,、研究所,、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu),、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶,。的企業(yè)之一,為客戶提供良好的外泌體提取,,非編碼RNA試劑,,檢測(cè)試劑,轉(zhuǎn)染試劑,。翌科生物致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對(duì)用戶產(chǎn)品上的貼心,,為用戶帶來(lái)良好體驗(yàn)。翌科生物始終關(guān)注自身,,在風(fēng)云變化的時(shí)代,,對(duì)自身的建設(shè)毫不懈怠,高度的專注與執(zhí)著使翌科生物在行業(yè)的從容而自信,。