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熒光增白劑熒光特性的測(cè)定

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-06-02

    因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,,并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān)。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),,生成氧化熒光素(oxyluciferin),,并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,,約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身,。熒光素的半衰期約三個(gè)小時(shí),只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶。(1)熒光素不會(huì)影響動(dòng)物的正常生理功能,。(2)熒光素是280道爾頓的小分子,,水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障,。(3)熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快,,可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)。腹腔注射擴(kuò)散較慢,,持續(xù)發(fā)光長(zhǎng),。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光,10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的更高點(diǎn),,在更高點(diǎn)持續(xù)約20~30min后開始衰減,,約3h后熒光素排除,發(fā)光全部消失,,更佳檢測(cè)時(shí)間是在注射后15~35min之間,;若進(jìn)行熒光素靜脈注射,擴(kuò)散快,,但發(fā)光持續(xù)時(shí)間很短,。科研人員根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg,,即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素,。(4)觀察時(shí)間的間隔沒有更短限制,只要觀察的條件控制一致就可以,。雖然底物在動(dòng)物體內(nèi)有一定的代謝過程,。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試哪個(gè)公司好?熒光增白劑熒光特性的測(cè)定

    通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測(cè)的信號(hào)動(dòng)力學(xué),,例如Bright-Glo?,、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測(cè)。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡(jiǎn)化了樣品處理,,并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè),。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法,。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),,這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力,尤其是在高通量應(yīng)用中,。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生,,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測(cè)系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,,還可以檢測(cè)底物(luciferin)濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),,能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè),,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶,。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,一種改進(jìn)的luciferin面世,,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用,。這種新的底物——fluoroluciferin??贵w偶聯(lián)熒光素ATP作用下的D-熒光素鉀鹽什么樣,。

    并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè)。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法,。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力,,尤其是在高通量應(yīng)用中,。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測(cè)系統(tǒng),。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,,還可以檢測(cè)底物(luciferin)濃度的變化。通過將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),,能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè),,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,,一種改進(jìn)的luciferin面世,,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin,,是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因,,即NanoLuc?螢光素酶,。

    每孔加入100μl養(yǎng)24h后,Luciferin使其終濃度為150μg/ml,,PBS,,再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測(cè),分析發(fā)光強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)之間的相關(guān)性,。4)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線繪制MCF7-luc細(xì)胞和作為對(duì)照取表達(dá)熒光素酶的MCF-7細(xì)胞,,接種于24孔板,接種密度為2×104/孔,。細(xì)胞接種后1~7d,,每天胰蛋白酶消化其中3孔細(xì)胞,用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定細(xì)胞數(shù)。以細(xì)胞生長(zhǎng)天數(shù)為橫坐標(biāo),,細(xì)胞數(shù)目為縱坐標(biāo),,分別繪制兩種細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。二.動(dòng)物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠,,4~5周齡,,體重(15±2)g,雌雄各3只,。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF-7用PBS重懸為2.5×10/ml懸液,,每只裸鼠左右背側(cè)近腋部皮下接種100μl,共接種6只,。接種后第5d采用德國(guó)BERTHOLD公司的活題成像系統(tǒng)檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度,。以后每5d觀測(cè)一連續(xù)觀測(cè)30d。觀測(cè)前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉(計(jì)量為:35mg/kg體重),,按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin(invivograde),,10min后,進(jìn)行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長(zhǎng)情況,,定量分析各時(shí)間點(diǎn)的熒光值,。繪制腫大的瘤皮下生長(zhǎng)曲線.MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學(xué)觀察MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下接種后25d,脫頸處死小鼠,,取腫大的瘤組織,,制成石蠟切片,切片厚度為3μm,。D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長(zhǎng)是多長(zhǎng),?

    短期保存:4℃干燥避光長(zhǎng)期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),,混勻,。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。作者:思存鏈接:zhuanlan./p/來源:知乎著作權(quán)歸作者所有,。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處,。高斯熒光素酶近年來,,其他熒光素酶(例如高斯熒光素酶)的使用有所增加,因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,,并且不需要ATP的存在,。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì),,可通過氧氣催化腔腸素氧化,產(chǎn)生光,。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來,。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(#AAT-12530)使用專有的發(fā)光配方來定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),,產(chǎn)sheng發(fā)光產(chǎn)物,該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光,。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定試劑盒特點(diǎn):提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度,。D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。熒光增白熒光劑

D-熒光素鉀鹽如何選擇合作公司,?熒光增白劑熒光特性的測(cè)定

為了滿足人群日益提高的品質(zhì)消費(fèi)需求,我們也啟動(dòng)了一系列改良計(jì)劃,將貿(mào)易的個(gè)性化,、體驗(yàn)感與相關(guān)設(shè)施的完備、人性化服務(wù)相結(jié)合,用全新方案帶動(dòng)整體水平,。隨著商務(wù)服務(wù)越來越全球化,,數(shù)據(jù)隱私和安全法律開始改變。而且在不斷變革中服務(wù)供應(yīng)商也出現(xiàn)了中斷和碎片化,;但有一點(diǎn)可以肯定的是,,商務(wù)服務(wù)的變化只會(huì)繼續(xù)加速。研究表明,,商務(wù)服務(wù)可能過分依賴技術(shù)來推動(dòng)變革,,而不是做出戰(zhàn)略選擇進(jìn)行變革。這類外泌體提取,,非編碼RNA試劑,,檢測(cè)試劑,轉(zhuǎn)染試劑包括可復(fù)制的世界出名地點(diǎn)及景點(diǎn),,其意義,,旨在將其他地區(qū)及民族的景觀集中于一個(gè)地方以使游客品嘗及體驗(yàn)不同文化。該類游客重視游覽的文化性并欣賞從這類游覽體驗(yàn)到的各類文化元素及異域風(fēng)情,。近幾年來,,不少企業(yè)開始探索新的風(fēng)口,紛紛跨入海外翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),,建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái),。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,包括外泌體提取與檢測(cè)試劑,、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑,、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫,、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子,、細(xì)胞,、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā),,服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校,、研究所、醫(yī)院,、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu),、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。資本領(lǐng)域,,期待開辟新的天地,。不少地區(qū)都以成為了資本者們新的聚集地。但是,,相關(guān)地區(qū)正式實(shí)施新政后,,也讓不少遠(yuǎn)赴海外的中國(guó)資本者經(jīng)歷了一場(chǎng)前所未有的動(dòng)蕩。熒光增白劑熒光特性的測(cè)定

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