作者：普拉特澤生物鏈接：zhuanlan./p/來(lái)源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處,。首先我們?cè)趦龃娴倪^(guò)程中要減少冰晶的形成，尤其是大冰晶的形成：緩慢凍存細(xì)胞,，可使細(xì)胞內(nèi)避免產(chǎn)生大的冰晶,。那么我們?cè)撛鯓觾龃婕?xì)胞呢？一,、慢凍細(xì)胞1,、常規(guī)程序：使用程序降溫盒當(dāng)溫度在-25℃以上時(shí)，1-2℃/min,。當(dāng)溫度在-25℃以下時(shí),，5-10℃/min。當(dāng)溫度達(dá)到-100℃時(shí),，可迅速轉(zhuǎn)入液氮中,。2、簡(jiǎn)易程序：冷凍管管口朝上,，放入紗布袋內(nèi),，紗布袋系以線(xiàn)繩，通過(guò)線(xiàn)繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,，按每分鐘下降1-2℃的速度,，在40min內(nèi)降至液氮表面過(guò)夜，次晨投入液氮中,。3,、傳統(tǒng)程序：冷凍管置于4℃10min，-20℃30min,，-80℃16-18h（或隔夜）,，液氮長(zhǎng)期儲(chǔ)存。二,、低溫保護(hù)劑常用的低溫保護(hù)劑是DMSO,，它是一種滲透保護(hù)劑,，可迅速透入細(xì)胞,，提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，降低冰點(diǎn),，延緩凍結(jié)過(guò)程,，能使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外，在胞外形成冰晶,，減少胞內(nèi)冰晶,，從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷。三、細(xì)胞凍存方法1,、預(yù)先配制凍存液：凍存液比例多種,，根據(jù)細(xì)胞的特性進(jìn)行調(diào)整凍存液的比例：5%—10%DMSO+20%—90%血清+0%—70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液；2,、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液的保質(zhì)期是多久？南京通用型細(xì)胞凍存液公司

    細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用,。除此之外,，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買(mǎi)、寄贈(zèng),、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞,。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低,，加之在緩慢凍結(jié)條件下,，細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成,，從而避免細(xì)胞損傷,。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開(kāi)始為-1到-2℃/min,，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速,，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。細(xì)胞凍存技術(shù)作為一種保存細(xì)胞的有效方法,，在生物學(xué)領(lǐng)域已有深入***的應(yīng)用,。因?yàn)檎Ｇ闆r下，直接冷凍細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生冰晶對(duì)細(xì)胞造成傷害,，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。所以需要通過(guò)添加冷凍保護(hù)劑配制細(xì)胞凍存液，來(lái)保護(hù)細(xì)胞,。凍存保護(hù)劑根據(jù)其是否穿透細(xì)胞膜可分為滲透性和非滲透性?xún)深?lèi),。滲透性冷凍保護(hù)劑多是一些小分子物質(zhì)，可以透過(guò)細(xì)胞膜滲透到細(xì)胞內(nèi),。包括二甲基亞砜,。南京懸浮細(xì)胞凍存液應(yīng)用100ml無(wú)血清細(xì)胞凍存液儲(chǔ)存條件是2-8℃下12 個(gè)月,。

    適用于凍存各種細(xì)胞系、原代細(xì)胞3.無(wú)需程序降溫,，可直接放置-80℃凍存,，操作簡(jiǎn)單4.不含血清，**減少細(xì)胞污染5.因不含血清,，批次間差異小6.無(wú)需液氮,，-80℃冰箱長(zhǎng)期凍存7.可培養(yǎng)板整板凍存，例如雜交瘤細(xì)胞凍存時(shí)可節(jié)省篩選過(guò)程溫馨提示：1.化學(xué)組成明確,，以DMEM為母液,，含有DMSO，不含牛血清或其他蛋白成分,。2.獨(dú)特的細(xì)胞保護(hù)配方,，在凍存過(guò)程中細(xì)胞可直接放入-70℃冰箱，無(wú)需繁瑣的程序降溫操作,。3.不含牛血清或其他蛋白成分,，不引入造成細(xì)胞種子污染的外源因子，如各種牛源病毒和支原體等,。4.不含牛血清或其他蛋白成分,，同樣適用于無(wú)血清培養(yǎng)的細(xì)胞凍存。5.不含牛血清或其他蛋白成分,，非常適合用于凍存那些在使用常規(guī)含牛血清凍存液過(guò)程中容易聚團(tuán)的細(xì)胞,，如各種293細(xì)胞等。6.包裝設(shè)計(jì)為10ml×5,，無(wú)需再次分裝,，而且在使用過(guò)程中不易造成不同使用者或不同細(xì)胞間的交叉污染。7.經(jīng)過(guò)Hela,、RD,、HEK-293、293T,、SP2/0,、K562和P815等多種細(xì)胞的測(cè)試，復(fù)蘇后細(xì)胞存活率均高于用常規(guī)含牛血清凍存液,。8.建議凍存24hr后,，復(fù)蘇一支，確認(rèn)細(xì)胞正常,，再銷(xiāo)毀正在培養(yǎng)的剩余細(xì)胞,，避免意外。

    去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗,。3.去除PBS，加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái);4.離心1000rpm,，5min;5.去除胰蛋白酶,，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,，計(jì)數(shù),，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的**終密度為5×106/ml～1×107/ml;6.將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱(chēng),，凍存時(shí)間及操作者;8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),，可增至-5℃～-10℃/min;到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi),。space(二)細(xì)胞復(fù)蘇1.從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中,，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化,。2.從37℃水浴中取出凍存管，打開(kāi)蓋子,，用吸管吸出細(xì)胞懸液,，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混勻;3.離心,，1000rpm,，5min;4.棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,，計(jì)數(shù),，調(diào)整細(xì)胞密度。10%-15%（常見(jiàn)為10%）的DMSO或甘油,，含10%-20%血清的凍存培養(yǎng)液,。一般來(lái)講血清含量可以在10%-90%之間調(diào)整，凍存液中加入血清一方面可以為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng),，另一方面可以在細(xì)胞凍存過(guò)程中提供非滲透性保護(hù)物質(zhì),，如蔗糖。南京做無(wú)血清細(xì)胞凍存液的公司哪家便宜,。

    無(wú)需繁瑣費(fèi)時(shí)的程序凍存步驟或價(jià)格高昂的程序降溫儀,，可直接重懸細(xì)胞后置于-80℃，次日轉(zhuǎn)移到液氮完成整個(gè)凍存過(guò)程,，節(jié)省大量的時(shí)間和精力,。產(chǎn)品特點(diǎn)：1)即用型細(xì)胞凍存液,，隨用隨取，2-8℃穩(wěn)定保存1年以上,；2)無(wú)需繁瑣的程序凍存步驟或昂貴的程序降溫儀,，直接放入-80℃冰箱，節(jié)省大量的時(shí)間和精力,；3)細(xì)胞復(fù)蘇率高達(dá)90%以上,，適用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的凍存；4)不含血清,，批次間差異?。?)能夠有效維持干細(xì)胞的多向分化潛能,；6)化學(xué)成分明確,，沒(méi)有添加任何外源蛋白，減少細(xì)胞污染機(jī)會(huì),，同時(shí)減少外源蛋白對(duì)細(xì)胞正常生長(zhǎng)和分化的影響,。使用說(shuō)明(一)細(xì)胞凍存1)選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞(細(xì)胞匯合度90%左右)，并保證在凍存前24h內(nèi)換液一次,，收集細(xì)胞,，并將細(xì)胞制備成單細(xì)胞懸液(貼壁細(xì)胞可能需要用胰酶消化)，計(jì)數(shù),；2)將細(xì)胞懸液1000r/min離心5min,，棄上清；3)向細(xì)胞沉淀物中加入細(xì)胞凍存液,，輕輕吹打,，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞密度達(dá)到5×10?~1×10?個(gè)/mL,；4)將上述細(xì)胞懸液按1mL或,，分裝于無(wú)菌細(xì)胞凍存管內(nèi)，擰緊管蓋,，并做好標(biāo)記,；5)將細(xì)胞凍存管直接置于-80℃冰箱中，24h后移入液氮長(zhǎng)期保存,。(二)細(xì)胞復(fù)蘇1)從液氮罐中取出凍存的細(xì)胞,，立即放入37℃水浴鍋中快速解凍。無(wú)血清細(xì)胞凍存液儲(chǔ)存需要滿(mǎn)足哪些條件,？biosharp無(wú)血清細(xì)胞凍存液

無(wú)血清細(xì)胞凍存液一般都是使用什么技術(shù),。南京通用型細(xì)胞凍存液公司

    凍存成功的兩大必要條件細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)按照標(biāo)準(zhǔn)凍存程序操作為什凍存細(xì)胞需要加入保護(hù)劑在不附加任何保護(hù)劑下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶,，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷,、電解質(zhì)升高,、滲透壓改變、脫水,、PH改變,、蛋白變性等,，能引起細(xì)胞死亡,。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑，可使冰點(diǎn)降低,。在緩慢的凍結(jié)條件下,，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在負(fù)130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成,。實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備凍存管,、15毫升離心管、移液管,、移液槍,、qiang頭等放入無(wú)菌超凈工作臺(tái)，以紫外線(xiàn)照射30分鐘,。采用通風(fēng)機(jī)通風(fēng)3分鐘,。以75%酒精擦拭操作臺(tái)和雙手。準(zhǔn)備好冰盒,。將離心機(jī)調(diào)節(jié)至800轉(zhuǎn),，3分鐘。水浴箱調(diào)節(jié)至37度恒溫,。取細(xì)胞完全培養(yǎng)基,、DMSO、胰蛋白酶等,，放于水浴箱中預(yù)熱,。首先消毒雙手和超凈臺(tái)。取約10毫升細(xì)胞完全培養(yǎng)基放于15毫升離心管中,。配置細(xì)胞凍存液：凍存液應(yīng)該提前配制,，置于室溫備用，防止臨時(shí)配制產(chǎn)生的熱量損傷細(xì)胞,，按無(wú)血清培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1的比例配置細(xì)胞凍存液,，其中加大凍存液中血清的比例對(duì)于保存某些脆弱的干細(xì)胞以及一些比較珍貴的細(xì)胞很有好處的。按比例加好凍存液組分后,，輕輕吸打混勻,，置于室溫下待用。南京通用型細(xì)胞凍存液公司

南京翌科生物科技有限公司總部位于仙林街道緯地路9號(hào)江蘇生命科技園F7棟301-3室,，是一家翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),，建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái),。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線(xiàn)，包括外泌體提取與檢測(cè)試劑,、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑,、轉(zhuǎn)染試劑、microRNA 表達(dá)文庫(kù),、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子,、細(xì)胞、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù),。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā),，服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校、研究所,、醫(yī)院,、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶(hù),。的公司,。翌科生物擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專(zhuān)業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì),，以高度的專(zhuān)注和執(zhí)著為客戶(hù)提供外泌體提取,，非編碼RNA試劑，檢測(cè)試劑,，轉(zhuǎn)染試劑,。翌科生物不斷開(kāi)拓創(chuàng)新，追求出色,，以技術(shù)為先導(dǎo),，以產(chǎn)品為平臺(tái)，以應(yīng)用為重點(diǎn),，以服務(wù)為保證,，不斷為客戶(hù)創(chuàng)造更高價(jià)值，提供更優(yōu)服務(wù),。翌科生物始終關(guān)注商務(wù)服務(wù)行業(yè),。滿(mǎn)足市場(chǎng)需求，提高產(chǎn)品價(jià)值,，是我們前行的力量,。