更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同,。在螢火蟲中,,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入,。一些生物,,如叩頭蟲,,含有多種不同的熒光素酶,,能夠催化同一熒光素底物,,而發(fā)出不同顏色的熒光,。螢火蟲有2000多種,而叩甲總科(包括螢火蟲,、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲)則有更多,,因此它們的熒光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。目前研究得更透徹的熒光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲(Photinuspyralis)。免疫熒光法免疫熒光法的基本原理是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素,,當(dāng)與其相對(duì)應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時(shí),,在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位,,檢測(cè)出抗原或抗體,。常用的熒光素有①異硫氰酸熒光素(fluoreceinisothiocyante,F(xiàn)ITC),,為黃色,、橙黃色或褐黃色結(jié)晶粉末,有兩種異構(gòu)體,,易溶于水和酒精等溶劑,。分子量為389,更大吸收光譜為490~495,,更大發(fā)射光譜為520~530urn,,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光,是更常用的標(biāo)記抗體的熒光素,。②四甲基異氰酸羅達(dá)明,。D-熒光素鉀鹽應(yīng)立即使用,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。常州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽試劑
2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇**酸三(環(huán)已胺)鹽PEP病毒保存液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4結(jié)合物吖啶酯-T3結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-N-乙胺基馬來(lái)酰亞胺吖啶磺酰胺鹽-T4結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-T3結(jié)合物生物素-T4結(jié)合物化學(xué)發(fā)光分析試劑及標(biāo)記物生物素-T3結(jié)合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲,游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素運(yùn)輸和保存冰袋運(yùn)輸,;-20℃干燥避光保存;有效期一年,。使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鈉鹽,,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),混勻,。立即使用,。熒光 熒光增白劑光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。
并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè),。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,,現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),,這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力,,尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生,,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測(cè)系統(tǒng),。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,,還可以檢測(cè)底物(luciferin)濃度的變化。通過(guò)將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),,能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè),,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立,,一種改進(jìn)的luciferin面世,,能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用。這種新的底物——fluoroluciferin,,是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因,,即NanoLuc?螢光素酶,。
熒光素也就是FDAFDA可透過(guò)細(xì)胞膜并作為熒光素積蓄在活細(xì)胞內(nèi)。由于熒光素較BCECF或Calcein的親水性低,,因此熒光素從細(xì)胞中滲漏的量也高,。FDA也可用于流式細(xì)胞儀。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為488nm和530nm,。熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,,其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,,熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有熒光素酶的情況下,,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,,而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似),。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,,而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng),。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試真的靠譜嗎,?
短期保存:4℃干燥避光長(zhǎng)期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),,混勻,。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基。作者:思存鏈接:zhuanlan./p/來(lái)源:知乎著作權(quán)歸作者所有,。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),,非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。高斯熒光素酶近年來(lái),,其他熒光素酶(例如高斯熒光素酶)的使用有所增加,,因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,并且不需要ATP的存在,。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì),,可通過(guò)氧氣催化腔腸素氧化,產(chǎn)生光,。來(lái)自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來(lái),。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(#AAT-12530)使用專有的發(fā)光配方來(lái)定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),,產(chǎn)sheng發(fā)光產(chǎn)物,,該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定試劑盒特點(diǎn):提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度,。南京D-熒光素鉀鹽測(cè)試公司哪家便宜,。D-熒光素鉀鹽試劑
D-熒光素也常用于身體的外部研究。常州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽試劑
后者能夠易溶于水或緩沖液中,,使用方便,,溶劑無(wú)毒性,特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn),。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,,在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件:4℃冰袋運(yùn)輸,;短期保存:4℃干燥避光長(zhǎng)期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期長(zhǎng)期保存:有效期一年工作液:先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測(cè)1)用無(wú)菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,配制成30mg/mL的儲(chǔ)存液(100-200×),,混勻,。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4)待圖像分析前,,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,,37℃孵育5-10min,然后進(jìn)行圖像分析,。2.***成像分析1)用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,混勻,。2)用μm濾膜過(guò)濾除菌,。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融,。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,,以小鼠為例,,每只小鼠體重假定20g,每只小鼠用量3mg,;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期)后進(jìn)行成像分析,。注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期,。 常州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽試劑
南京翌科生物科技有限公司是一家翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),,建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái)。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,,包括外泌體提取與檢測(cè)試劑,、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑、轉(zhuǎn)染試劑,、microRNA 表達(dá)文庫(kù),、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子、細(xì)胞,、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù),。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校,、研究所,、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu),、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶,。的公司,致力于發(fā)展為創(chuàng)新務(wù)實(shí),、誠(chéng)實(shí)可信的企業(yè),。翌科生物作為翌科生物基于團(tuán)隊(duì)十余年的研發(fā)基礎(chǔ),建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺(tái),。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,,包括外泌體提取與檢測(cè)試劑,、非編碼 RNA 提取與檢測(cè)試劑、轉(zhuǎn)染試劑,、microRNA 表達(dá)文庫(kù),、臨床大數(shù)據(jù)庫(kù)及涵蓋分子、細(xì)胞,、動(dòng)物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù),。公司堅(jiān)持國(guó)產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國(guó)各級(jí)高校,、研究所,、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu),、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶,。的企業(yè)之一,為客戶提供良好的外泌體提取,,非編碼RNA試劑,,檢測(cè)試劑,轉(zhuǎn)染試劑,。翌科生物繼續(xù)堅(jiān)定不移地走高質(zhì)量發(fā)展道路,,既要實(shí)現(xiàn)基本面穩(wěn)定增長(zhǎng),又要聚焦關(guān)鍵領(lǐng)域,,實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型再突破,。翌科生物始終關(guān)注商務(wù)服務(wù)市場(chǎng),以敏銳的市場(chǎng)洞察力,,實(shí)現(xiàn)與客戶的成長(zhǎng)共贏,。