室溫培育30min后加入細胞孔板中，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng),。2)單克隆細胞篩選轉染24h后胰酶消化細胞并按1∶6比例接種到新6孔板中,，同時加入實驗確定的濃度G418，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細胞抗性克隆的出現(xiàn),。分別挑選單一抗性克隆至96孔板,，待其逐漸增殖后轉入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng)。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時用LuciferaseAs-sayAystem檢測熒光素酶活性,。檢測時,，各克隆按1×105個/孔接種到24孔板,，24h后細胞裂解液裂解12000rpm，4℃離心10min,，收集裂解物,，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物,，停留2s后,，取10s的熒光值（RLU），每個克隆設3個復孔,，保留RLU值高的細胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng),，再過5代后進行熒光素酶活性檢測。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代,，熒光素酶活性更高的幾個克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數(shù)量細胞克隆的熒光值檢測7-luc陽性克隆細胞按細胞數(shù)將篩出的MCF-4×104,、2×104、1×104,、5000,、2500、1250,、625,、312和156分別接種到96孔黑板中，另外一組只有細胞,，一組只有培養(yǎng)基作對照,，設置2個復孔，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次,。南京地區(qū)有哪些做D-熒光素鉀鹽測試的公司,。免疫化學熒光

    從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展狀態(tài)或藥物的***功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響,，根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征,。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級純（）應用：1）活細胞、組織或生物體內luc標記基因和熒光素酶-融合基因體內/體外表達的成像分析,；2）***用于報告基因分析,，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析；Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）配制成100mM的儲存液（200×,，濃度30mg/ml）,。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存,。2）用預熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液,，配制工作液(終濃度150μg/mL)。3）去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基直至無殘留,。4）圖像分析前立即向細胞內添加1×熒光素工作液,，然后進行圖像分析（或者細胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強信號）,。D-熒光素鉀鹽注：螢光素、螢光素酶,、螢火蟲螢光素酶,、螢光素鉀鹽、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱作熒光素,、熒光素酶,、螢火蟲熒光素酶、熒光素鉀鹽,、熒光素鈉鹽,。Protocol2：Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1）用無菌的DPBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL),，,。一旦使用，保持冰冷且避光,。熒光粉和熒光劑的區(qū)別D-熒光素鉀鹽的配置是什么,？

    我們將與LgBiT具有極強親和作用的。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質標簽,，具有多種功能,，例如當與基于CRIPSR的標簽一起使用時，可以創(chuàng)建內源性報告基因模型,。[1]2020Lumit?技術隨著NanoBiT?技術的發(fā)展,，人們認識到可以利用該系統(tǒng)通過結合免疫測定的組分檢測多種分析物。由此產生的平臺（現(xiàn)稱為“Lumit”）提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法,。螢光素酶（英語：Luciferase）是自然界中能夠產生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,，其中**有代表性的是一種學名為Photinuspyralis的螢火蟲體內的螢光素酶。在相應化學反應中,，熒光的產生是來自于螢光素的氧化,，有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有螢光素酶的情況下,，螢光素與氧氣反應的速率非常慢,，而鈣離子的存在常?？梢赃M一步加速反應（與肌肉收縮的情況相似）,。螢光生成反應通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應的能量都被轉化為光,。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,，只有約10%的能量被轉化為光，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M,。螢光素或螢光素酶不是特定的分子,。

    其中更有代表性的是一種學名為Photinuspyralis的螢火蟲體內的熒光素酶,。在相應化學反應中，熒光的產生是來自于螢光素的氧化,，有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）,。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應的速率非常慢,，而鈣離子的存在常?？梢赃M一步加速反應（與肌肉收縮的情況相似）。[1]熒光生成反應通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應非常節(jié)省能量,，幾乎所有輸入反應的能量都被轉化為光,。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈，只有越10%的能量被轉化為光,，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M,。熒光素或熒光素酶不是特定的分子，而是對于所有能夠產生熒光的底物和其對應的酶的統(tǒng)稱,，雖然它們各不相同,。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇,，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,，發(fā)光反應所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入,。一些生物，如叩頭蟲,，含有多種不同的熒光素酶,，能夠催化同一熒光素底物。做D-熒光素鉀鹽測試品牌有哪些,？

    或分裝于-20℃避光保存,，避免反復凍融。2）用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3）去除細胞培養(yǎng)基,。4）待圖像分析前，向細胞內添加熒光素工作液,，37℃孵育5-10min,，然后進行圖像分析。2.***成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,，混勻。2）用μm濾膜過濾除菌。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復凍融。3）腹腔注射（.）,，按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射,。4）注射入體內10-15min（待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期）后進行成像分析。注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線,，從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期,。注意事項1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）只只是不同公司在命名上的差異,都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylicacid。2）注射方式,、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線，確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間,。3）如果要進行ATP的檢測,，盡量避免外源ATP的污染，如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,，在進行熒光素的溶解時應使用ATP-free無菌水,。D-熒光素鉀鹽使用的注意事項。揚州ATPD-熒光素鉀鹽供應商

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    產品描述D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物,，普遍應用于整個生物技術領域，特別是體內***成像技術,。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下,，熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當熒光素過量時,，產生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關性（見下圖）,。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的慢病毒轉染入細胞后構建穩(wěn)定表達細胞株，構建原位**模型,，之后注入熒光素底物,，通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強度變化，從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展狀態(tài)或進行藥物藥效評價等,。也可以利用ATP對此反應體系的影響,，根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。注：在抗**藥物藥效評價試驗中,，由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達標定**大小,，受**生長所發(fā)生的**內部壞死影響，生物自發(fā)光并不能很***的評價**生長,，在抗**藥效評價有較高要求的實驗中,，建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測**生長。D-熒光素也常用于體外研究,，包括熒光素酶和ATP水平分析,；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測,。目前有三種產品形式：D-熒光素（游離酸）,，D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,。可溶于甲醇和DMSO,。 免疫化學熒光

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