luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：,，在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示,，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,。但是該底物熒光素以前大多依賴進口,，產(chǎn)品價格昂貴,。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果,。所以,，需要國產(chǎn)化的方式生產(chǎn)，一方面可以降低成本,，一方面可以增強使用效果,。作者：科遠迪鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán),，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處,。D-luciferin，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說明書發(fā)光原理哺乳動物生物發(fā)光,，一般是將Fireflyluciferase基因（由554個氨基酸構(gòu)成,，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細胞染色體DNA上以表達熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株,，當(dāng)細胞分裂,、轉(zhuǎn)移、分化時,熒光素酶也會得到持續(xù)穩(wěn)定的表達,?；颉⒓毎突铑}動物都可被熒光素酶基因標記,。將標記好的細胞接種到實驗動物體內(nèi)后,，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin,，potassiumsalt，以下均簡稱熒光素),，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,。所發(fā)的光波長在540-600nm。這種酶在ATP,，氧存在的條件下,，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光。南京翌科生物科技有限公司的D-熒光素鉀鹽測試怎么樣,？熒光素D-熒光素鉀鹽濃度

注意事項1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）、螢光素鉀鹽只是不同別名,，以CAS號115144-35-9為準,。2）注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線,，確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間。3）如果要進行ATP的檢測,，盡量避免外源ATP的污染,，如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材，在進行熒光素的溶解時應(yīng)使用ATP-free無菌水,。4）為避免反復(fù)凍融,，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,，如有條件,，可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存。5）對于檢測靈敏度要求特別高的實驗,，建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品,。6）在進行D-熒光素鉀鹽的溶解時，應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS,，因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性,，此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響，從而影響檢測,。7）為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。8）本產(chǎn)品只作科研用途,！免疫熒光化學(xué)技術(shù)D-熒光素鉀鹽的活題成像技術(shù),。

    常見的熒光素酶有兩種，分別是螢火蟲熒光素酶（fireflyluciferase,，編碼基因是luc）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase,，編碼基因是Rluc）,，前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine,。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,，底物被氧化發(fā)光（不同底物光的顏色和波長不同），當(dāng)?shù)孜镞^量時,，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性,。***成像技術(shù)（opticalinvivoimaging）目前主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術(shù)，生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化學(xué)發(fā)光的原理,，將體外能穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株植入動物體內(nèi),，與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng)，利用光學(xué)系統(tǒng)檢測光強度,，間接反映出細胞數(shù)量的變化或細胞的定位,。這項技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個領(lǐng)域常用的有**或疾病動物模型的建立，并可用于病毒學(xué)研究,、siRNA研究,、干細胞研究、蛋白質(zhì)相互作用研究等,。以下主要介紹D-Luciferin（D熒光素）的分類：D-Luciferin：有三種,，分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素,。

    4）待圖像分析前,，向細胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min,，然后進行圖像分析,。2.活ti成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,，混勻,。2）用μm濾膜過濾除菌。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.）,，按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射,，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g,，每只小鼠用量3mg,；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期）后進行成像分析。注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,，從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期,。注意事項1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）,、螢光素鉀鹽只是不同別名，以CAS號115144-35-9為準,。2）注射方式,、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線,，確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間,。3）如果要進行ATP的檢測，盡量避免外源ATP的污染,，如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,，在進行熒光素的溶解時應(yīng)使用ATP-free無菌水。4）為避免反復(fù)凍融,，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化，如有條件,，可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存。D-熒光素也常用于身體的外部研究,。

    2）按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液,；3）腹腔注射10-15min后進行成像分析。（對每只動物模型做熒光素動力學(xué)研究以確定峰值信號獲取時間）Firefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素分子式：C11H8N2O3S2分子量：g/mol外觀：白色至淺黃色粉末溶解：,，形成近乎無色至淺黃色的清夜保存：-15°C避光應(yīng)用：1）活細胞,、組織或生物體內(nèi)luc標記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達的成像分析；2）***用于報告基因分析,，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析D-熒光素也常用于體外研究,，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析,；高通量測序和各種污染檢測,。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸），D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）,。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液，可溶于甲醇和DMSO,；后者易溶于水或緩沖液中,，使用方便，溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性,，特別適合體內(nèi)實驗,。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別,。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二,。D-熒光素鉀鹽的合作平臺有哪些,？免疫熒光化學(xué)技術(shù)

D-熒光素鉀鹽母液保存條件是-20℃避光。熒光素D-熒光素鉀鹽濃度

    室溫培育30min后加入細胞孔板中,，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng),。2)單克隆細胞篩選轉(zhuǎn)染24h后胰酶消化細胞并按1∶6比例接種到新6孔板中，同時加入實驗確定的濃度G418,，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細胞抗性克隆的出現(xiàn),。分別挑選單一抗性克隆至96孔板，待其逐漸增殖后轉(zhuǎn)入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng),。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時用LuciferaseAs-sayAystem檢測熒光素酶活性,。檢測時，各克隆按1×105個/孔接種到24孔板,，24h后細胞裂解液裂解12000rpm,，4℃離心10min，收集裂解物,，取上清10μl加入96孔白板中,，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物，停留2s后,，取10s的熒光值（RLU）,，每個克隆設(shè)3個復(fù)孔，保留RLU值高的細胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng),，再過5代后進行熒光素酶活性檢測,。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代，熒光素酶活性更高的幾個克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數(shù)量細胞克隆的熒光值檢測7-luc陽性克隆細胞按細胞數(shù)將篩出的MCF-4×104,、2×104,、1×104、5000,、2500,、1250、625,、312和156分別接種到96孔黑板中,，另外一組只有細胞，一組只有培養(yǎng)基作對照,，設(shè)置2個復(fù)孔,，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次。熒光素D-熒光素鉀鹽濃度

南京翌科生物科技有限公司是一家翌科生物基于團隊十余年的研發(fā)基礎(chǔ),，建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺,。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線，包括外泌體提取與檢測試劑,、非編碼 RNA 提取與檢測試劑,、轉(zhuǎn)染試劑,、microRNA 表達文庫、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子,、細胞,、動物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù)。公司堅持國產(chǎn)試劑自主研發(fā),，服務(wù)全國各級高校,、研究所、醫(yī)院,、第三方檢測機構(gòu),、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶。的公司,，是一家集研發(fā),、設(shè)計、生產(chǎn)和銷售為一體的專業(yè)化公司,。公司自創(chuàng)立以來,，投身于外泌體提取，非編碼RNA試劑,，檢測試劑,，轉(zhuǎn)染試劑，是商務(wù)服務(wù)的主力軍,。翌科生物不斷開拓創(chuàng)新，追求出色,，以技術(shù)為先導(dǎo),，以產(chǎn)品為平臺，以應(yīng)用為重點,，以服務(wù)為保證,，不斷為客戶創(chuàng)造更高價值，提供更優(yōu)服務(wù),。翌科生物始終關(guān)注商務(wù)服務(wù)市場,，以敏銳的市場洞察力，實現(xiàn)與客戶的成長共贏,。