隨后30年里,,Promega不斷在螢光素酶實驗工具領(lǐng)域推陳出新,,保持技術(shù)帶跑的人的地位,。這里提到的螢光素酶即熒光素酶,。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)(LAR)Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem(LAR),為靈敏,、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕,。LAR與螢火蟲螢光素酶(luc)報告基因一起,為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具,。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)(DLR)DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑,。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化,在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展,。此外,,pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因,luc+,。這個改造一種報告基因以實現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報告基因上,,通過生物信息學(xué)和合成方法,,實現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶(Enliten)基礎(chǔ)上,,改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶,。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測的關(guān)鍵。此后,。D-熒光素鉀鹽長期保存條件是-20℃干燥避光,。揚(yáng)州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽公司
從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的***功效等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響,,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征,。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式:NaC11H7N2O3S2·H2O分子量:g/mol純度:高級純()應(yīng)用:1)活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析,;2)***用于報告基因分析,,免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析;Protocol1:InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1)配制成100mM的儲存液(200×,,濃度30mg/ml),。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存,。2)用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液,,配制工作液(終濃度150μg/mL)。3)去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無殘留,。4)圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液,,然后進(jìn)行圖像分析(或者細(xì)胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強(qiáng)信號)。D-熒光素鉀鹽注:螢光素,、螢光素酶,、螢火蟲螢光素酶、螢光素鉀鹽,、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱作熒光素,、熒光素酶、螢火蟲熒光素酶,、熒光素鉀鹽,、熒光素鈉鹽。Protocol2:Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL),,。一旦使用,,保持冰冷且避光,。無錫熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽濃度D-熒光素鉀鹽測試比較好的公司有哪幾個?
螢光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,,螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍(lán)色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世,。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的早期,這一現(xiàn)象被認(rèn)為是發(fā)展生物分析的有力平臺,。1991年,,Promega發(fā)布了***代螢光素酶分析產(chǎn)品,并啟動了基于螢光素酶的進(jìn)一步創(chuàng)新計劃,,通過持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù),。Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月,Promega***提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報告基因技術(shù)的應(yīng)用可能性,。當(dāng)時的人們認(rèn)為,,螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性、極高的靈敏度和快速簡單的檢測流程等特點(diǎn),,可能會對分子生物學(xué)家的研究產(chǎn)生重要的影響,。幾個月后,***代螢火蟲螢光素酶報告基因載體和檢測試劑在Promega誕生,,使這項新技術(shù)正式并更***地為全球研究人員服務(wù),。隨后30年里,,Promega不斷在螢光素酶實驗工具領(lǐng)域推陳出新,,保持技術(shù)***的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶,。[1]1991螢光素酶檢測系統(tǒng),。
按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,以小鼠為例,,每只小鼠體重假定20g,,每只小鼠用量3mg;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺期)后進(jìn)行成像分析,。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,,從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期。注意事項1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin),、螢光素鉀鹽只是不同別名,,以CAS號115144-35-9為準(zhǔn)。2)注射方式,、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線,確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間,。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測,,盡量避免外源ATP的污染,如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,在進(jìn)行熒光素的溶解時應(yīng)使用ATP-free無菌水,。4)為避免反復(fù)凍融,,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,,如有條件,,可以對儲存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊4妗?)對于檢測靈敏度要求特別高的實驗,建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品,。6)在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時,,應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS,因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性,,此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響,,從而影響檢測。7)為了您的安全和健康,。南京翌科生物科技有限公司的D-熒光素鉀鹽測試怎么樣,?
其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有熒光素酶的情況下,,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,,而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似),。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,,而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng),。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同,。在螢火蟲中,,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入。一些生物,,如叩頭蟲,,含有多種不同的熒光素酶,,能夠催化同一熒光素底物。D-熒光素鉀鹽一般都是使用什么技術(shù),。宿遷D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長
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通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學(xué),例如Bright-Glo?,、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測,。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理,并實現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報告基因檢測,。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,,現(xiàn)在已經(jīng)實現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),,這使得CellTiter-Glo?能有效測定細(xì)胞活力,,尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測原理還促進(jìn)了其它ATP檢測平臺的誕生,,尤其是用于研究ATP酶(如激酶)的Kinase-Glo?(2004年)和ADP-Glo?(2009年)酶檢測系統(tǒng),。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,還可以檢測底物(luciferin)濃度的變化,。通過將luciferin與可被不同酶類識別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián),,能對這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測,如半胱天冬酶(caspase)和其它蛋白酶,。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測系統(tǒng)隨著對螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊的建立,,一種改進(jìn)的luciferin面世,能更好地用于典型的報告基因檢測應(yīng)用,。這種新的底物——fluoroluciferin,。揚(yáng)州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽公司
南京翌科生物科技有限公司總部位于仙林街道緯地路9號江蘇生命科技園F7棟301-3室,是一家翌科生物基于團(tuán)隊十余年的研發(fā)基礎(chǔ),,建立了行業(yè)前端的外泌體與非編碼 RNA 研究和轉(zhuǎn)化平臺。公司目前擁有豐富的產(chǎn)品線,,包括外泌體提取與檢測試劑,、非編碼 RNA 提取與檢測試劑、轉(zhuǎn)染試劑,、microRNA 表達(dá)文庫,、臨床大數(shù)據(jù)庫及涵蓋分子、細(xì)胞,、動物的綜合科技服務(wù)等 100 多種試劑和科研外包服務(wù),。公司堅持國產(chǎn)試劑自主研發(fā),服務(wù)全國各級高校,、研究所,、醫(yī)院,、第三方檢測機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等數(shù)千家客戶,。的公司,。翌科生物擁有一支經(jīng)驗豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專業(yè)研發(fā)團(tuán)隊,,以高度的專注和執(zhí)著為客戶提供外泌體提取,,非編碼RNA試劑,檢測試劑,,轉(zhuǎn)染試劑,。翌科生物不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,,以技術(shù)為先導(dǎo),,以產(chǎn)品為平臺,以應(yīng)用為重點(diǎn),,以服務(wù)為保證,,不斷為客戶創(chuàng)造更高價值,提供更優(yōu)服務(wù),。翌科生物創(chuàng)始人金芳芳,,始終關(guān)注客戶,創(chuàng)新科技,,竭誠為客戶提供良好的服務(wù),。