luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：,，在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin),，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示,，并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口,，產(chǎn)品價(jià)格昂貴,。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果,。所以,，需要國(guó)產(chǎn)化的方式生產(chǎn)，一方面可以降低成本,，一方面可以增強(qiáng)使用效果,。作者：科遠(yuǎn)迪鏈接：zhuanlan./p/來(lái)源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處,。D-luciferin，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)發(fā)光原理哺乳動(dòng)物生物發(fā)光,，一般是將Fireflyluciferase基因（由554個(gè)氨基酸構(gòu)成,，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株,，當(dāng)細(xì)胞分裂,、轉(zhuǎn)移、分化時(shí),熒光素酶也會(huì)得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá),?；颉⒓?xì)胞和活題動(dòng)物都可被熒光素酶基因標(biāo)記,。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)后,，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin，potassiumsalt,，以下均簡(jiǎn)稱熒光素),，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,。所發(fā)的光波長(zhǎng)在540-600nm。這種酶在ATP,，氧存在的條件下,，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光。D-熒光素也常用于身體的外部研究,。連云港熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽活題成像原理

    熒光素也就是FDAFDA可透過(guò)細(xì)胞膜并作為熒光素積蓄在活細(xì)胞內(nèi),。由于熒光素較BCECF或Calcein的親水性低，因此熒光素從細(xì)胞中滲漏的量也高,。FDA也可用于流式細(xì)胞儀,。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為488nm和530nm。熒光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,，其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲(chóng)體內(nèi)的熒光素酶,。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）,。沒(méi)有熒光素酶的情況下,，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,，而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）,。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,，而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng),。常州體外研究D-熒光素鉀鹽生物公司D-熒光素鉀鹽檢測(cè)的安全性如何保障,？

    4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,，37℃孵育5-10min,，然后進(jìn)行圖像分析。2.活ti成像分析1）用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,，混勻。2）用μm濾膜過(guò)濾除菌,。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.）,，按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g,，每只小鼠用量3mg,；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期,。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲(chóng)熒光素（beetleluciferin）、螢光素鉀鹽只是不同別名,，以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn),。2）注射方式、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),，盡量避免外源ATP的污染,，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水,。4）為避免反復(fù)凍融,，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存。為防止氧化,，如有條件,，可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊４妗?/p>

    可運(yùn)用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析其相對(duì)活性。c.驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用,，將該序列（通常為啟動(dòng)子區(qū)域）插入報(bào)告基因載體,，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)細(xì)胞***轉(zhuǎn)過(guò)表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子，可分析轉(zhuǎn)錄因子過(guò)表達(dá)是否提高熒光素酶活性,。d.可以分析信號(hào)通路是否***,，將該信號(hào)通路的下游響應(yīng)原件序列構(gòu)建入報(bào)告基因載體，在不同上游信號(hào)條件下,，熒光素酶活性**了通路的下游響應(yīng),。例如在GPCR研究中，將cAMPresponseelement（CRE）載入報(bào)告基因載體,，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株后,，可以用于分析GPRC的***與6b7a976f-99ae-4c48-8159-4bd篩選。又如,，將HIF1α的響應(yīng)原件hypoxia-responsiveelement(HRE)插入luciferase報(bào)告載體構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,，可以用于低氧相關(guān)通路的研究,。e.驗(yàn)證microRNA的靶序列，將待測(cè)的3’UTR序列插入報(bào)告基因載體,，再共轉(zhuǎn)入該microRNA,，如果熒光素酶活性下降，則提示為其靶序列,。Q：在[信諾金達(dá)]做熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè),，需要提供什么？實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括哪些,？您需要提供：1.基因序列或模板,，需提供詳細(xì)的轉(zhuǎn)錄因子、目的基因或microRNA信息,；2.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,，[信諾金達(dá)]默認(rèn)為使用293T細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,，[信諾金達(dá)]會(huì)為您提供實(shí)驗(yàn)流程及完整報(bào)告一份,，包括實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)、圖片,、分析結(jié)果等,。D-熒光素鉀鹽如何選擇合作公司？

    每孔加入100μl養(yǎng)24h后,，Luciferin使其終濃度為150μg/ml,，PBS,，再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測(cè),，分析發(fā)光強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)之間的相關(guān)性。4)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線繪制MCF7-luc細(xì)胞和作為對(duì)照取表達(dá)熒光素酶的MCF-7細(xì)胞,，接種于24孔板,，接種密度為2×104/孔。細(xì)胞接種后1～7d,，每天胰蛋白酶消化其中3孔細(xì)胞,，用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定細(xì)胞數(shù)。以細(xì)胞生長(zhǎng)天數(shù)為橫坐標(biāo),，細(xì)胞數(shù)目為縱坐標(biāo),，分別繪制兩種細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。二．動(dòng)物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠,，4～5周齡,，體重（15±2）g，雌雄各3只,。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF-7用PBS重懸為2．5×10/ml懸液,，每只裸鼠左右背側(cè)近腋部皮下接種100μl,，共接種6只。接種后第5d采用德國(guó)BERTHOLD公司的活題成像系統(tǒng)檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度,。以后每5d觀測(cè)一連續(xù)觀測(cè)30d,。觀測(cè)前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉（計(jì)量為：35mg/kg體重），按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin（invivograde）,，10min后,，進(jìn)行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長(zhǎng)情況，定量分析各時(shí)間點(diǎn)的熒光值,。繪制腫大的瘤皮下生長(zhǎng)曲線.MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學(xué)觀察MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下接種后25d,，脫頸處死小鼠，取腫大的瘤組織,，制成石蠟切片,，切片厚度為3μm。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試品牌有哪些,？南通體外研究D-熒光素鉀鹽公司

D-熒光素鉀鹽熒光素酶和ATP水平分析,。連云港熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽活題成像原理

    熒光素鈉[1]，橙紅色粉末,，無(wú)氣味,，有吸濕性；易溶于水,，溶液呈黃紅色,，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光，酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn),，微溶于乙醇；比較大吸收波長(zhǎng)(水),?；拘畔⑺幤访Q熒光素鈉拼音名Yingguangsuna英文名FLUORESCEINSODIUM來(lái)源(分子式)與標(biāo)準(zhǔn)本品為9-(鄰羧基苯基)-6-羥基-3H-噸-3-酮二鈉鹽。按干燥品計(jì)算,，含C20H10Na2O5不得少于,。類別診斷用藥。劑量滴眼2%溶液貯藏密封保存,。制劑熒光素鈉注射液2化學(xué)性質(zhì)編輯中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名稱：FluoresceindisodiumsaltCAS號(hào)：518-47-8[2]熒光素鈉分子式：C20H10Na2O5分子量：等級(jí)：BSMDL號(hào)：MFCD00167039Beilstein號(hào)：3833041EC號(hào)：208-253-0熒光素鈉[1]3性狀描述編輯本品為橙紅色粉末,；無(wú)臭，幾乎無(wú)味,；有引濕性,。本品在水中易溶，在乙醇中略溶,。橙紅色粉末,，無(wú)氣味,，有吸濕性；易溶于水,，溶液呈黃紅色,，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光，酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn),，微溶于乙醇；比較大吸收波長(zhǎng)(水),。4檢查資料編輯氯化物取本品,，分取溶液10ml，依法檢查（附錄ⅧA）,，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液制成的對(duì)照液比較,，不得更濃（）。硫酸鹽取上述氯化物項(xiàng)下剩余的溶液25ml,，依法檢查,。連云港熒光素鈉鹽D-熒光素鉀鹽活題成像原理

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