隨后30年里，Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新,，保持技術(shù)帶跑的人的地位,。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)（LAR）Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測(cè)試劑LuciferaseAssaySystem（LAR）,，為靈敏,、非放射性的報(bào)告基因檢測(cè)拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報(bào)告基因一起,，為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具,。1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)（DLR）DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個(gè)樣本中依次檢測(cè)兩個(gè)報(bào)告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化,，在提高報(bào)告基因檢測(cè)的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展,。此外，pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因,，luc+,。這個(gè)改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上,，通過生物信息學(xué)和合成方法，實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn),。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上,，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測(cè)和儲(chǔ)藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測(cè)的關(guān)鍵,。此后,。D-熒光素鉀鹽的測(cè)試方法有哪幾種？熒光試劑

    常見的熒光素酶有兩種,，分別是螢火蟲熒光素酶（fireflyluciferase,，編碼基因是luc）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase，編碼基因是Rluc）,，前者的底物是D-Luciferin,，后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,，底物被氧化發(fā)光（不同底物光的顏色和波長不同）,，當(dāng)?shù)孜镞^量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性,。***成像技術(shù)（opticalinvivoimaging）目前主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術(shù),，生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化學(xué)發(fā)光的原理，將體外能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株植入動(dòng)物體內(nèi),，與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng),，利用光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)光強(qiáng)度，間接反映出細(xì)胞數(shù)量的變化或細(xì)胞的定位,。這項(xiàng)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域常用的有**或疾病動(dòng)物模型的建立,，并可用于病毒學(xué)研究、siRNA研究,、干細(xì)胞研究,、蛋白質(zhì)相互作用研究等。以下主要介紹D-Luciferin（D熒光素）的分類：D-Luciferin：有三種,，分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽,、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素。宿遷D-熒光素鉀鹽應(yīng)用D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司怎么樣,？

    從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的***功效等,。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征,。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級(jí)純（）應(yīng)用：1）活細(xì)胞,、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析；2）***用于報(bào)告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析,；Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測(cè)1）配制成100mM的儲(chǔ)存液（200×,，濃度30mg/ml）?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存,。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲(chǔ)存液，配制工作液(終濃度150μg/mL),。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無殘留,。4）圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析（或者細(xì)胞放在37℃短時(shí)間孵育后檢測(cè)可增強(qiáng)信號(hào)）,。D-熒光素鉀鹽注：螢光素,、螢光素酶、螢火蟲螢光素酶,、螢光素鉀鹽,、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱作熒光素、熒光素酶,、螢火蟲熒光素酶,、熒光素鉀鹽、熒光素鈉鹽,。Protocol2：Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1）用無菌的DPBS（w/oMg2+,、Ca2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL)，,。一旦使用,，保持冰冷且避光,。

    Q：熒光素酶作為報(bào)告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢(shì),？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同時(shí)具有更寬的動(dòng)態(tài)范圍,，便于數(shù)值分析比較,，不需要熒光顯微鏡，而且在***實(shí)驗(yàn)中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白,，同時(shí)由于沒有內(nèi)源活性,、其本底信號(hào)很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢(shì)在于可以進(jìn)行失蹤定位,，并且其觀測(cè)不需裂解細(xì)胞,，方便進(jìn)行適時(shí)觀察。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比,，相對(duì)活性如何,？在氧、鎂和ATP的存在下，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素,，而來源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素,。雙報(bào)告基因技術(shù)（Dual-reporterassays）,結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測(cè)試和海腎熒光素酶測(cè)試。Q：雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)轉(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因,？轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個(gè)方面改善,，首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的，通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞,，另外陽性對(duì)照您可以選擇過表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒,，還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要，更好是先酶切驗(yàn)證,。這個(gè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果很靈敏,，有一定差異是正常的，通常只要確保它在一個(gè)數(shù)量級(jí)之內(nèi)即可,。如果差異超出這個(gè)范圍可以從兩方面改善,，一是記住保持樣本的均一性。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試哪個(gè)公司好,？

    并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè),。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法,。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),，這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力，尤其是在高通量應(yīng)用中,。該檢測(cè)原理還促進(jìn)了其它ATP檢測(cè)平臺(tái)的誕生,，尤其是用于研究ATP酶（如激酶）的Kinase-Glo?（2004年）和ADP-Glo?（2009年）酶檢測(cè)系統(tǒng)。[1]2003Caspase-Glo?3/7檢測(cè)除了可以利用螢火蟲螢光素酶反應(yīng)測(cè)定樣品中螢光素酶或ATP的含量外,，還可以檢測(cè)底物（luciferin）濃度的變化,。通過將luciferin與可被不同酶類識(shí)別并產(chǎn)生反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)偶聯(lián)，能對(duì)這些酶進(jìn)行靈敏的“加樣-讀數(shù)”檢測(cè),，如半胱天冬酶（caspase）和其它蛋白酶,。[1]2007One-Glo?螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)隨著對(duì)螢火蟲螢光素酶化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)一步了解以及Promega生物學(xué)家和化學(xué)家團(tuán)隊(duì)的建立，一種改進(jìn)的luciferin面世,，能更好地用于典型的報(bào)告基因檢測(cè)應(yīng)用,。這種新的底物——fluoroluciferin，是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因，即NanoLuc?螢光素酶,。D-熒光素鉀鹽適用于哪些領(lǐng)域,？常州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽生物公司

D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長是多長？熒光試劑

    而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生螢光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱，雖然它們各不相同,。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的螢光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng),。**為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲，而其所采用不同的螢光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇,，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同,。在螢火蟲中，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入,。一些生物,，如叩頭蟲，含有多種不同的螢光素酶,，能夠催化同一螢光素底物,，而發(fā)出不同顏色的螢光。螢火蟲有2000多種,，而叩甲總科（包括螢火蟲,、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多，因此它們的螢光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。如今研究得**透徹的螢光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）,。[1]螢光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成，并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn),。螢光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠、家蠶,、馬鈴薯等一些生物可以合成螢光素酶,。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段，可以對(duì)整個(gè)動(dòng)物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析：將不同類型的細(xì)胞（骨髓干細(xì)胞,、T細(xì)胞等）標(biāo)記上（即表達(dá)）螢光素酶,。熒光試劑