隨后30年里，Promega不斷在螢光素酶實(shí)驗(yàn)工具領(lǐng)域推陳出新，保持技術(shù)帶跑的人的地位,。這里提到的螢光素酶即熒光素酶,。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)（LAR）Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏,、非放射性的報(bào)告基因檢測拉開了序幕,。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報(bào)告基因一起，為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具,。1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測系統(tǒng)（DLR）DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個(gè)樣本中依次檢測兩個(gè)報(bào)告基因的試劑,。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化，在提高報(bào)告基因檢測的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展,。此外,，pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因，luc+,。這個(gè)改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上,，通過生物信息學(xué)和合成方法，實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn),。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上,，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測的關(guān)鍵,。此后,。D-熒光素鉀鹽測試適用范圍包括哪些？上海熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好
GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲,，游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素活題成像用D-luciferin,potassiumsalt熒光素鉀鹽介紹一,、活題成像技術(shù)簡介活題生物發(fā)光成像技術(shù)能夠讓研究人員直接快速的測量各種哎癥模型中腫大的瘤的生長、轉(zhuǎn)移以及對藥物的反應(yīng),。在藥效學(xué)評價(jià)方面,，熒光素酶哎癥模型可用于哎癥體內(nèi)用藥在整體動(dòng)物水平上進(jìn)行長期療效跟蹤觀察。利用無創(chuàng)傷活題成像對哎細(xì)胞生長的檢測，可對哎癥治的好之前和過程中的哎細(xì)胞的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)觀測和評估,。熒光素酶的發(fā)光是生物發(fā)光,，不需要激發(fā)光，但需要底物熒光素(D-Luciferin),。熒光素酶的底物熒光素,，約280道爾頓。熒光素的水溶性和脂溶性都非常好,，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障,。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的，約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身,。熒光素,。常州D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商南京D-熒光素鉀鹽測試公司有哪幾家。
是新型底物開發(fā)的一個(gè)早期實(shí)例,。[1]2012NanoLuc?螢光素酶基于定向進(jìn)化和新型底物開發(fā)方面的經(jīng)驗(yàn),，研究人員從蝦的螢光素酶改造設(shè)計(jì)出一種新型螢光素酶報(bào)告基因，即NanoLuc?螢光素酶,。這是一種小分子（19kDa）單體酶,，具有獨(dú)特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍,。這種新型的報(bào)告基因有著范圍廣的應(yīng)用前景,，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征,。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體,。一項(xiàng)針對各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn)，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn),?？蓪⑦@些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測,。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生,，Promega的科學(xué)家努力將該報(bào)告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?,。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個(gè)氨基酸的小標(biāo)簽和一個(gè)更大,，更精細(xì)的NanoLuc?亞基，LgBiT,。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合,。
可運(yùn)用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析其相對活性。c.驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用,，將該序列（通常為啟動(dòng)子區(qū)域）插入報(bào)告基因載體,，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)細(xì)胞***轉(zhuǎn)過表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子,，可分析轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)是否提高熒光素酶活性。d.可以分析信號通路是否***,，將該信號通路的下游響應(yīng)原件序列構(gòu)建入報(bào)告基因載體,，在不同上游信號條件下，熒光素酶活性**了通路的下游響應(yīng),。例如在GPCR研究中,，將cAMPresponseelement（CRE）載入報(bào)告基因載體，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株后,，可以用于分析GPRC的***與6b7a976f-99ae-4c48-8159-4bd篩選。又如,，將HIF1α的響應(yīng)原件hypoxia-responsiveelement(HRE)插入luciferase報(bào)告載體構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,，可以用于低氧相關(guān)通路的研究。e.驗(yàn)證microRNA的靶序列,，將待測的3’UTR序列插入報(bào)告基因載體,，再共轉(zhuǎn)入該microRNA，如果熒光素酶活性下降,，則提示為其靶序列,。Q：在[信諾金達(dá)]做熒光素酶報(bào)告基因檢測，需要提供什么,？實(shí)驗(yàn)結(jié)果包括哪些,？您需要提供：1.基因序列或模板，需提供詳細(xì)的轉(zhuǎn)錄因子,、目的基因或microRNA信息,；2.實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，[信諾金達(dá)]默認(rèn)為使用293T細(xì)胞,，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,，[信諾金達(dá)]會(huì)為您提供實(shí)驗(yàn)流程及完整報(bào)告一份，包括實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù),、圖片,、分析結(jié)果等。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽比較靠譜,。
而是對于所有能夠產(chǎn)生螢光的底物和其對應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的螢光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng),。**為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,，而其所采用不同的螢光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同,。在螢火蟲中,，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物，如叩頭蟲,，含有多種不同的螢光素酶,，能夠催化同一螢光素底物，而發(fā)出不同顏色的螢光,。螢火蟲有2000多種,，而叩甲總科（包括螢火蟲、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多,，因此它們的螢光素酶對于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。如今研究得**透徹的螢光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）。[1]螢光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成,，并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn),。螢光素酶的基因可以被合成并插入到生物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。研究者利用基因工程已經(jīng)使得小鼠,、家蠶,、馬鈴薯等一些生物可以合成螢光素酶。間接體外成像是一種強(qiáng)大的研究手段,，可以對整個(gè)動(dòng)物體中的細(xì)胞群落進(jìn)行分析：將不同類型的細(xì)胞（骨髓干細(xì)胞,、T細(xì)胞等）標(biāo)記上（即表達(dá)）螢光素酶。做D-熒光素鉀鹽測試工作液是先用現(xiàn)配,。泰州專業(yè)做D-熒光素鉀鹽活題成像原理
D-熒光素鉀鹽一般都是使用什么技術(shù),。上海熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好
螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號分子，可以用來標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報(bào)告基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7,，利用G418篩選,，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc，并在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評價(jià)其發(fā)光能力,。通過建立裸鼠移植瘤模型,，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長及轉(zhuǎn)移情況，為下一步監(jiān)測裸鼠移植瘤對藥物作用的變化情從而為分析藥物對腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0,、200,、400、600,、800,、1000μg/ml設(shè)置6個(gè)濃度梯度。在細(xì)胞接種24h后,，加入6孔板中,，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)孔在10～14d內(nèi)全部死亡。每天觀察細(xì)胞生長情況,，死亡更低的G418濃度,，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細(xì)胞的濃度,。1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對數(shù)生長期的MCF－7細(xì)胞，將細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)待細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%孔培養(yǎng)板中,，TM即可轉(zhuǎn)染,。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在250μl無血清,、無雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無血清,、無雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000，室溫培育5min,。將上述2種稀釋液混勻,。上海熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好