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鎮(zhèn)江D-熒光素鉀鹽

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-06-28

    產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,,普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域,,特別是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光,。當(dāng)熒光素過量時(shí),,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見下圖),。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,,構(gòu)建原位**模型,之后注入熒光素底物,,通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強(qiáng)度變化,從而實(shí)時(shí)監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評價(jià)等,。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響,,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征,。注:在抗**藥物藥效評價(jià)試驗(yàn)中,,由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定**大小,,受**生長所發(fā)生的**內(nèi)部壞死影響,生物自發(fā)光并不能很***的評價(jià)**生長,,在抗**藥效評價(jià)有較高要求的實(shí)驗(yàn)中,,建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測**生長。D-熒光素也常用于體外研究,,包括熒光素酶和ATP水平分析;報(bào)告基因分析,;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),,D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽)。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液??扇苡诩状己虳MSO,。 D-熒光素鉀鹽測試方法是體外生物發(fā)光檢測,。鎮(zhèn)江D-熒光素鉀鹽

    可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑(Renillareniformis)分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比,,海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素,,產(chǎn)生480nm的藍(lán)光,。與螢火蟲螢光素酶類似,海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報(bào)告檢測,。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒(#AAT-12535)提供了一種快速,靈敏的方法,,可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性,,與海腎螢光素酶相互作用后,該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物,。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒特點(diǎn):該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個(gè)試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分各類螢光素酶底物,,輔因子和物理特性:近幾十年來,,腺苷三磷酸(ATP)生物發(fā)光技術(shù)得到了很大的發(fā)展,已經(jīng)在細(xì)胞增殖,、細(xì)胞毒性和生物量計(jì)數(shù)等方面廣泛應(yīng)用,。蘇州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽做D-熒光素鉀鹽測試找哪家公司?

    Q:熒光素酶作為報(bào)告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢,?Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上,,同時(shí)具有更寬的動態(tài)范圍,便于數(shù)值分析比較,,不需要熒光顯微鏡,而且在***實(shí)驗(yàn)中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白,,同時(shí)由于沒有內(nèi)源活性,、其本底信號很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進(jìn)行失蹤定位,,并且其觀測不需裂解細(xì)胞,,方便進(jìn)行適時(shí)觀察,。Q:海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比,相對活性如何,?在氧、鎂和ATP的存在下,,螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素,而來源于海洋腔腸(Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素,。雙報(bào)告基因技術(shù)(Dual-reporterassays),結(jié)合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試。Q:雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)轉(zhuǎn)染效率很低而且復(fù)孔重復(fù)不出來是什么原因,?轉(zhuǎn)染效率低的話可以從三個(gè)方面改善,,首先要確保細(xì)胞狀態(tài)是好的,通常我們選出處于分裂期的細(xì)胞,,另外陽性對照您可以選擇過表達(dá)的熒光蛋白質(zhì)粒,,還有就是DNA的質(zhì)量尤為重要,更好是先酶切驗(yàn)證,。這個(gè)實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果很靈敏,有一定差異是正常的,,通常只要確保它在一個(gè)數(shù)量級之內(nèi)即可,。如果差異超出這個(gè)范圍可以從兩方面改善,一是記住保持樣本的均一性,。

    其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶,。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP),。沒有熒光素酶的情況下,,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光,。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。熒光素或熒光素酶不是特定的分子,,而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,,雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng),。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,,而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇(發(fā)光類臍菇,Omphalotusolearius)或許多海洋生物都不相同,。在螢火蟲中,,發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管(abdominaltrachea)的管道中輸入,。一些生物,,如叩頭蟲,含有多種不同的熒光素酶,,能夠催化同一熒光素底物。熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽,。

    故根據(jù)熒光反應(yīng)的情況可以檢測樣品中的微生物含量,。APT熒光檢測儀***用于食品,、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測,。1970年,科學(xué)家***次測定了螢火蟲熒光素酶的結(jié)構(gòu),;1985年,,科學(xué)家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因,并在大腸桿菌中表達(dá),,從而得到了具有活性的熒光素酶,;1986年,科學(xué)家們測定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列,。隨后,各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功,,熒光素酶的研究和應(yīng)用不斷發(fā)展。目前,,熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用到醫(yī)學(xué)、生命科學(xué),、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)等許多領(lǐng)域,。以醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?yàn)槔?*們將熒光素酶基因嵌入到*細(xì)胞中,再注入熒光素,,使*細(xì)胞發(fā)光,通過探測熒光,,就能監(jiān)測*細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。同理,,用這種方法能對致病基因,、***免疫機(jī)制等進(jìn)行研究,對某些疾病進(jìn)行診斷,,監(jiān)測疫苗、藥物和治療方法的效力,。D-熒光素鉀鹽使用的注意事項(xiàng),。連云港體外研究D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

D-熒光素鉀鹽測試需要哪些必備條件?鎮(zhèn)江D-熒光素鉀鹽

    常見的熒光素酶有兩種,,分別是螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase,,編碼基因是luc)和海腎熒光素酶(Renillaluciferase,編碼基因是Rluc),,前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine,。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下,,底物被氧化發(fā)光(不同底物光的顏色和波長不同),當(dāng)?shù)孜镞^量時(shí),,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性,。***成像技術(shù)(opticalinvivoimaging)目前主要采用生物發(fā)光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術(shù),生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化學(xué)發(fā)光的原理,,將體外能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株植入動物體內(nèi),,與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng),,利用光學(xué)系統(tǒng)檢測光強(qiáng)度,,間接反映出細(xì)胞數(shù)量的變化或細(xì)胞的定位,。這項(xiàng)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域常用的有**或疾病動物模型的建立,,并可用于病毒學(xué)研究,、siRNA研究,、干細(xì)胞研究、蛋白質(zhì)相互作用研究等,。以下主要介紹D-Luciferin(D熒光素)的分類:D-Luciferin:有三種,,分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素,。鎮(zhèn)江D-熒光素鉀鹽