可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達(dá),。熒光素酶報(bào)告基因有許多優(yōu)點(diǎn)：①非放射性；②比CAT及其他報(bào)告基因速度快,；③比CAT靈敏100倍,；④熒光素酶在哺乳細(xì)胞中的半衰期為3小時(shí)，在植物中的半衰期為3．5小時(shí),。由于半衰期短,，故啟動(dòng)子的改變會(huì)即時(shí)導(dǎo)致熒光素酶活性的改變，而熒光素酶不會(huì)積累,。相反,，CAT在哺乳細(xì)胞中的半衰期為50小時(shí)。熒光素酶濃度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范圍內(nèi),，熒光信號強(qiáng)度與酶濃度成正比,。在理想條件下，可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶,。檢測步驟：1．用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測啟動(dòng)子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),。2．設(shè)計(jì)引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動(dòng)子片段，將此片段插入到熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（pGL3-basic）中,。3．篩選陽性克隆,，測序。擴(kuò)增克隆并提純質(zhì)粒備用,。4．?dāng)U增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒,，提純備用。同時(shí)準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對照,，提純備用,。5．培養(yǎng)293（或其它目的細(xì)胞），并接種于24孔板中,，生長10-24小時(shí)（80%匯合度）,。6．將報(bào)告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。7．提取蛋白并用于熒光素酶檢測,。8．加入底物,，測定熒光素酶的活性。9．計(jì)算相對熒光強(qiáng)度，并與空載對照比較,。做D-熒光素鉀鹽測試哪個(gè)公司好,？鹽城熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好

    8．取剩余裂解液測定LacZ的活性，其讀數(shù)作為內(nèi)標(biāo)用以矯正熒光素酶的讀數(shù),。9.用矯正后的讀數(shù)作圖,，分析數(shù)據(jù)。注：熒光素見光易氧化,，已稀釋未用的熒光素應(yīng)丟棄,。注意事項(xiàng)：1．熒光素酶檢測試劑需在15-25℃條件下預(yù)平衡后再進(jìn)行反應(yīng)，而后依據(jù)具體條件進(jìn)行自動(dòng)或手動(dòng)檢測,。當(dāng)用液閃計(jì)數(shù)儀時(shí),，加入熒光素酶檢測試劑后立即輕輕混勻。2．如果細(xì)胞裂解后不能立即對提取物進(jìn)行檢測,，樣品可以在冰上保存大約5h,，在-70℃可保存數(shù)月,。不要反復(fù)凍融以避免酶活性的降低,。3．利用上述方法檢測冷的樣品時(shí)，其信號強(qiáng)度將下降5-15%,。4．在熒光素酶活性較高的情況下,，導(dǎo)致信號超出線性范圍（信號溢出）可用裂解液將樣品進(jìn)行稀釋。5．不要儲存稀釋過的樣品,。如果必須保存,，要在稀釋的樣品中加入BSA至終濃度為，這樣可以保持樣品的穩(wěn)定性,。6．一些熒光儀在進(jìn)行檢測前需要1-2s的穩(wěn)定,，因此建議在開機(jī)后過一段時(shí)間再進(jìn)行檢測操作。熒光素酶報(bào)告基因檢測主要有哪些用途,？a.啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析,，將啟動(dòng)子區(qū)域序列（通常2k左右）進(jìn)行分段截短,，或?qū)μ囟ㄎ稽c(diǎn)進(jìn)行突變,，再分別構(gòu)建入luciferase報(bào)告載體，檢測其啟動(dòng)子活性,。b.啟動(dòng)子SNP分析,，一些基因的啟動(dòng)子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性。南通螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽試劑D-熒光素鉀鹽檢測的安全性如何保障,？

    酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇；比較大吸收波長（水）,。中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉,；熒光橙紅鈉；熒光素二鈉英文名FLUORESCEINSODIUM等級：BS物性數(shù)據(jù)編輯播報(bào)1.性狀：未確定2.密度（g/cm3,25/4℃）：.相對蒸汽密度（g/cm3,空氣=1）：未確定4.熔點(diǎn)（oC）：3205.沸點(diǎn)（oC,常壓）：未確定6.沸點(diǎn)（oC,8kPa）：未確定7.折射率：未確定8.閃點(diǎn)（oC）：未確定9.比旋光度（o）：未確定10.自燃點(diǎn)或引燃溫度（oC）：未確定11.蒸氣壓（kPa,25oC）：未確定12.飽和蒸氣壓（kPa,60oC）：未確定13.燃燒熱（KJ/mol）：未確定14.臨界溫度（oC）：未確定15.臨界壓力（KPa）：未確定16.油水（辛醇/水）分配系數(shù)的對數(shù)值：未確定17.上限（%,V/V）：未確定18.下限（%,V/V）：未確定19.溶解性：溶于水及乙醇,，帶有強(qiáng)的綠色熒光,，水溶性好。

    可用于需要低檢測限的測定具有用于研究基因調(diào)控和功能的快速,，簡單且均一的生物發(fā)光測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基的使用兼容高斯熒光素酶近年來,，其他熒光素酶（例如高斯熒光素酶）的使用有所增加，因?yàn)檫@些報(bào)告基因較小,，并且不需要ATP的存在,。高斯熒光素酶是一種20kD的蛋白質(zhì)，可通過氧氣催化腔腸素氧化,，產(chǎn)生光,。來自于海洋足類高斯氏菌的生物發(fā)光酶在表達(dá)后可有效地從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中分泌出來。Amplite?高斯熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒使用專有的發(fā)光配方來定量細(xì)胞培養(yǎng)基中的熒光素酶活性,。當(dāng)該試劑與高斯熒光素酶相互作用時(shí),，產(chǎn)***光產(chǎn)物，該發(fā)光產(chǎn)物提供強(qiáng)發(fā)光,。Amplite高斯熒光素酶報(bào)告基因測定試劑盒特點(diǎn)：提供了與HTS液體處理儀器兼容的所有基本組件它們具有高靈敏度,，可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號在大量檢測板之間提供一致的信號與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑（Renillareniformis）分離的36kDa蛋白。與螢火蟲熒光素酶相比,，海腎熒光素酶的底物和輔因子要求不同,。海腎熒光素酶在氧氣存在下使用腔腸素，產(chǎn)生480nm的藍(lán)光,。與螢火蟲螢光素酶類似,。D-熒光素鉀鹽的使用說明。

    海腎螢光素酶因其底物要求和光輸出方面的差異而可用于雙重報(bào)告檢測,。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因測定Amplite?Renilla螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒提供了一種快速,，靈敏的方法，可以使用專有的發(fā)光配方在基于細(xì)胞的檢測中檢海腎螢光素酶的活性,，與海腎螢光素酶相互作用后,，該試劑產(chǎn)生具有強(qiáng)光的產(chǎn)物。Amplite?海腎熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒特點(diǎn)：該測定法與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長培養(yǎng)基兼容該試劑盒可以測量野生型和合成hRluc基因的原始表達(dá)或基因表達(dá)每個(gè)試劑盒均包含可以方便96孔和384孔板檢測所必不可少的組分,。熒光素酶是生物體內(nèi)催化熒光素等物質(zhì)氧化發(fā)光的一類酶的總稱,。自然界中，不同的發(fā)光生物擁有不同的熒光素酶,，除了螢火蟲熒光素酶（FireflyLuciferase）之外,，還有發(fā)光細(xì)菌體內(nèi)的細(xì)菌熒光素酶,、發(fā)光海星的海星熒光素酶等。目前,，人們對螢火蟲熒光素酶的研究**多,、應(yīng)用***。一則關(guān)于手機(jī)上的細(xì)菌的新聞里,，**在用ATP熒光檢測儀檢測手機(jī)表面的細(xì)菌,。ATP是一種在動(dòng)物、植物和細(xì)菌等活細(xì)胞中都存在的能量物質(zhì),，由前述的反應(yīng)式可知,，ATP與熒光素、熒光素酶反應(yīng)發(fā)出熒光,。檢測樣品中的微生物越多,，ATP就越多，熒光反應(yīng)的光亮就越大,。D-熒光素鉀鹽的活題成像技術(shù),。無錫ATPD-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

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    每孔加入100μl養(yǎng)24h后,，Luciferin使其終濃度為150μg/ml,，PBS，再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測,，分析發(fā)光強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)之間的相關(guān)性,。4)細(xì)胞生長曲線繪制MCF7-luc細(xì)胞和作為對照取表達(dá)熒光素酶的MCF-7細(xì)胞,，接種于24孔板,，接種密度為2×104/孔。細(xì)胞接種后1～7d,，每天胰蛋白酶消化其中3孔細(xì)胞,，用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定細(xì)胞數(shù)。以細(xì)胞生長天數(shù)為橫坐標(biāo),，細(xì)胞數(shù)目為縱坐標(biāo),，分別繪制兩種細(xì)胞生長曲線。二．動(dòng)物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠,，4～5周齡,，體重（15±2）g，雌雄各3只,。取對數(shù)生長期的MCF-7用PBS重懸為2．5×10/ml懸液,，每只裸鼠左右背側(cè)近腋部皮下接種100μl，共接種6只,。接種后第5d采用德國BERTHOLD公司的活題成像系統(tǒng)檢測信號強(qiáng)度,。以后每5d觀測一連續(xù)觀測30d,。觀測前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉（計(jì)量為：35mg/kg體重），按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin（invivograde）,，10min后,，進(jìn)行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長情況，定量分析各時(shí)間點(diǎn)的熒光值,。繪制腫大的瘤皮下生長曲線.MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學(xué)觀察MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下接種后25d,，脫頸處死小鼠，取腫大的瘤組織,，制成石蠟切片,，切片厚度為3μm。鹽城熒光素D-熒光素鉀鹽哪家好