本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域：,，尤其涉及一種細胞凍存液,，具體涉及一種用于干細胞的凍存液。背景技術(shù)：：臍帶血是胎兒娩出,、臍帶結(jié)扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液,，通常是廢棄不用的。近十幾年的研究發(fā)現(xiàn),，臍帶血中含有可以重建人體造血和免疫系統(tǒng)的造血干細胞,，可用于造血干細胞移植，***80多種疾病,。因此,，臍帶血已成為造血干細胞的重要來源，特別是無血緣關(guān)系造血干細胞的來源,。也是一種非常重要的人類生物資源,。干細胞***是將具有不斷自我繁殖能力和多向化潛能的干細胞在體外培養(yǎng)后，再將其移植入患者受損或缺損組織中,，從而實現(xiàn)對損傷組織的補充和修復(fù),。目前干細胞采集后，需要加入保存液進行冷凍保存,，細胞凍存液是細胞凍存過程中的**試劑,，關(guān)系到細胞復(fù)蘇后的活性及數(shù)量等問題，現(xiàn)有的細胞凍存液,，一方面營養(yǎng)成分單一,，配比不當(dāng)，導(dǎo)致細胞存活率低,、穩(wěn)定性差,；另一方面大多都是異種血清，會引入外源蛋白從而增加細胞污染和過敏的風(fēng)險,，不適用于臨床,。因此，為有效開展干細胞移植及建立干細胞庫,，亟需開發(fā)一種成本低,、細胞存活率高、成分簡單的細胞凍存液,，對于生物醫(yī)學(xué)具有重要的研究與應(yīng)用價值,。技術(shù)實現(xiàn)要素：為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷。無血清細胞凍存液的保存條件是2-8℃,。細胞凍存液索萊寶

    常須將培養(yǎng)物進行冷凍保存,，并在需要的時候重新復(fù)蘇和培養(yǎng),。目前，細胞凍存**常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,，主要采用加適量保護局的緩慢冷凍法保存細胞,。無血清非程序細胞凍存液，添加了細胞沉降穩(wěn)定劑可防止或延緩細胞在凍存過程中的沉降,，防止細胞互相擠壓，影響細胞凍存效果,。另外添加了細胞膜保護劑,。滲透性細胞膜內(nèi)保護劑、非滲透性細胞保護劑等多種冷凍保護劑,，它們在溶液中同水分子結(jié)合,，發(fā)生水合作用，弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而減少冰晶的形成,，能**降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷,，有效提高細胞復(fù)蘇率和活力。同時無任何外源血清成分,，減少細胞污染機會,，并且無需繁瑣的程序凍存步驟，節(jié)省了大量時間和精力,。內(nèi)***：＜支原體：陰性微生物檢查：陰性滲透壓：280-340m0smol/kgPH：純度：>98%保存溫度：4℃避光保存有效期：24個月應(yīng)用：?干細胞儲存?T淋巴細胞,、NK細胞等免疫細胞的儲存?其他額種類型哺乳動物細胞的儲存產(chǎn)品特性：?無需程序降溫，直接置于-80℃冰箱,，后置于液氮保存?1類醫(yī)療器械生產(chǎn)許可?無血清培養(yǎng)基生產(chǎn)可用于臨床,。連云港內(nèi)皮細胞凍存液說明書做無血清細胞凍存液品牌有哪些？

    對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或等同替換,，均屬于本發(fā)明的保護范圍,。實施例1細胞凍存液的制備以1l體積為標準，按照下列組分的含量,，稱取對應(yīng)的重量：上述兩組分充分混勻形成細胞凍存液,。實施例2臍帶血細胞的凍存采用實施例1所述細胞凍存液，在凍存前24小時,，將該凍存液置于2-8℃進行溫度平衡,，以臍帶血細胞為例制備細胞懸液，取800ul細胞懸液,，按按細胞懸液(v):細胞凍存液(v)＝4:1計算加入細胞凍存液的體積200ul,，并以穩(wěn)定速率加入細懸液中，這一過程需要在15min之內(nèi)完成,，同時需要不斷進行混合,，使得細胞凍存液能夠在細胞懸液中均勻分布,。隨后，將充分混勻的細胞溶液分裝至,，進行程序性降溫至-80℃后轉(zhuǎn)至液氮中儲存,。從液氮系統(tǒng)中取出凍存的臍帶血細胞樣品，等待1～2min使殘余液氮揮發(fā)之后,，迅速放入37℃水浴中,，待可見冰塊剛好要消失至黃豆大小體積時，取出細胞樣品計算細胞存活率,。細胞存活率結(jié)果如表1所示,。實施例3間充質(zhì)干細胞的凍存采用實施例1所述細胞凍存液，在凍存前24小時,，將該凍存液置于2-8℃進行溫度平衡,，以間充質(zhì)干細胞為例制備細胞懸液，取800ul細胞懸液,，按按細胞懸液(v):細胞凍存液(v)＝4:1計算加入細胞凍存液的體積200ul,，并以穩(wěn)定速率加入細懸液中。

    嚴禁充裝液氧等易燃易爆及腐蝕性液體,，以免產(chǎn)生猛烈燃燒,、或?qū)θ萜鳟a(chǎn)生腐蝕。液氮是**溫液體（-196℃）,，在充裝時,，要穿長袖工作服、帶皮手套,，以避免液氮飛濺造成***,。貯存容器不得作貯運容器使用。若運輸液氮,。必須使用B型貯運容器,。因此類容器有特殊支撐結(jié)構(gòu),堅固可靠不易損壞。4．液氮容器在使用過程中,，每天都應(yīng)隨時檢查容器的使用情況,，如發(fā)現(xiàn)容器瓶蓋上和上部有水珠或結(jié)霜情況，說明容器質(zhì)量出現(xiàn)問題,，應(yīng)立即停止使用,。5．存入取出樣品要標記，拿取東西要輕拿輕放,。一,、細胞凍存方法：凍存液**好現(xiàn)配：按1：3：6（或1：2：7）配凍存液1份DMSO3份血清和6份培養(yǎng)基(養(yǎng)細胞時用什么培養(yǎng)基凍存時就用什么培養(yǎng)基)。取生長狀態(tài)量好的細胞進行凍存處理,，對于貼壁細胞：1吸出舊培養(yǎng)液加PBS沖洗一次2胰酶消化3加培養(yǎng)基中止消化,，有的細胞是加血清中止4離心收集細胞,，不同細胞離心率不一樣（以上*為貼壁細胞，懸浮細胞收集就用第四部）5吸出離心管上清液,，加1ML的凍存液重懸細胞,，移到凍存管，放4度半小時,，-20度兩小時,，-70度過夜，再放液氮長期保存懸浮細胞：直接離心收集,，PBS洗滌作者：英格恩鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有,。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán)。無血清細胞凍存液檢測的安全性如何保障,？

    再放入-80℃冰箱冷凍過夜，次日保存到液氮罐中,。目前更多使用程序降溫盒,，將細胞凍存管放于盒內(nèi)，直接置于超低溫冰箱,，程序降溫盒可控制每分鐘下降1℃,。目前也有商業(yè)化的快速凍存液，可不經(jīng)過程序降溫過程,，直接置于超低溫冰箱,。注：細胞凍存后可以長期保存，但為妥善起見,，凍存半年后,，**好取出一支凍存管的細胞復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察生長情況,，然后再繼續(xù)凍存,。懸浮細胞的凍存1.直接將細胞收集到離心管，棄上清3.以生長培養(yǎng)基（含20%胎牛血清）或100%胎牛血清重懸細胞至終濃度約107/ml,，加入10%的DMSO,。4.以每管1ml分裝至凍存管中。5.置于4oC30min,，再轉(zhuǎn)入-20℃2h后,，再放入-80℃冰箱冷凍過夜，次日保存到液氮罐中,；或置于程序降溫盒中,，按相關(guān)的操作指南進行操作。液氮罐使用注意事項1．初次使用前檢查容器內(nèi)膽是否清潔干燥,，外部有無凹陷及嚴重碰傷,，如有輕微凹陷及碰傷,，經(jīng)試驗其蒸發(fā)性能不變，仍可繼續(xù)使用,，如性能下降,，應(yīng)停止使用，避免經(jīng)濟損失,。2．液氮容器應(yīng)放在陰涼干燥處,，應(yīng)有良好的通風(fēng)，不應(yīng)放置在靠近熱源,，陽光直照,，以及風(fēng)口處，嚴禁放置液氮容器的房間緊閉門窗,，以免室內(nèi)因液氮蒸發(fā)使氧氣含量下降,，造成呼吸困難。3．只能用于充裝液氮,，凍存細胞和病毒用,。無血清細胞凍存液有效期一年。浙江細胞凍存液可以放多久

無血清細胞凍存液在2-8℃穩(wěn)定保存1年以上,。細胞凍存液索萊寶

    產(chǎn)品簡介：在細胞體外培養(yǎng)工作中,，為了達到長期保存細胞的生物活性的目的，須將細胞進行冷凍保存,，并在實驗需要的時候?qū)⑵渲匦聫?fù)蘇和培養(yǎng),。目前，細胞凍存更常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,，主要采用添加適量保護劑使細胞緩慢降溫至指定溫度范圍,，從而到達保護細胞的目的。EKBIOTech無血清細胞凍存液是EKBIO技術(shù)團隊在長期的細胞研究過程中針對細胞的凍存和復(fù)蘇不斷優(yōu)化實驗條件,，面向數(shù)百種細胞研發(fā)出的特點使用凍存液產(chǎn)品,。該產(chǎn)品添加了細胞沉降穩(wěn)定劑，可延緩細胞在凍存過程中的沉降速率,，防止細胞互相擠壓,，影響細胞凍存效果。另外,，添加了細胞膜保護劑,、滲透性細胞膜內(nèi)保護劑、非滲透性細胞保護劑等多種冷凍保護劑,，這些成分在溶液中同水分子結(jié)合,，發(fā)生水合作用，弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成，能極大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷,，有效提高細胞復(fù)蘇存活率,。該產(chǎn)品配方成分明確，不含血清,、不含動物源性蛋白,，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染,，保證凍存細胞的安全,；574d075a-6771-4443-9ef3-0ba適用于常規(guī)細胞系、原代細胞,，同時亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞,。與傳統(tǒng)凍存液相比。細胞凍存液索萊寶