螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號分子,，可以用來標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報告基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7,，利用G418篩選，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc,，并在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評價其發(fā)光能力,。通過建立裸鼠移植瘤模型，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長及轉(zhuǎn)移情況,，為下一步監(jiān)測裸鼠移植瘤對藥物作用的變化情從而為分析藥物對腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0,、200、400,、600,、800、1000μg/ml設(shè)置6個濃度梯度,。在細(xì)胞接種24h后,，加入6孔板中，每個濃度設(shè)2個孔在10～14d內(nèi)全部死亡,。每天觀察細(xì)胞生長情況,，死亡更低的G418濃度，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細(xì)胞的濃度,。1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對數(shù)生長期的MCF－7細(xì)胞,，將細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)待細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%孔培養(yǎng)板中，TM即可轉(zhuǎn)染。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。在250μl無血清,、無雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無血清、無雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000,，室溫培育5min,。將上述2種稀釋液混勻。D-熒光素鉀鹽的發(fā)射波長是多少,？淮安熒光素D-熒光素鉀鹽試劑

    這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨(dú)特的底物,，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍,。這種新型的報告基因有著***的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步的技術(shù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ),。[1]2015NanoBRET?技術(shù)NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質(zhì)標(biāo)簽的理想特征,。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）的供體。一項(xiàng)針對各種能量受體熒光基團(tuán)的深入研究發(fā)現(xiàn),，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關(guān)的一些挑戰(zhàn),。可將這些熒光基團(tuán)添加到蛋白質(zhì)配基等分子中以測量靶蛋白的結(jié)合,，或與HaloTag?配基耦聯(lián)以進(jìn)行活細(xì)胞中蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)相互作用的檢測,。[1]2016NanoBiT?技術(shù)隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學(xué)家努力將該報告基因改造為多亞基系統(tǒng),，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?,。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個氨基酸的小標(biāo)簽和一個更大，更精細(xì)的NanoLuc?亞基,，LgBiT,。這兩部分結(jié)構(gòu)互補(bǔ)結(jié)合，重組為一個明亮的螢光素酶,。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,，從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測定；也可以和HiBiT一樣高,，從而允許自我組裝,。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究。無錫熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽溶液怎么保存D-熒光素鉀鹽熒光素酶和ATP水平分析,。

    就可以用高敏感度的CCD相機(jī)對動物體內(nèi)進(jìn)行***觀察而不會傷害到動物本身,。在螢光素酶中加入正確的螢光素底物就可以放出熒光，而發(fā)出的光子可以被光敏感元件,，如螢光探測器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測到,。這就使得對包括***在內(nèi)的多種生命活動進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能。例如，螢光素酶已經(jīng)被用于商業(yè)化的次世代焦磷酸定序技術(shù),，借由dNTP接上DNA鏈時水解放出的焦磷酸,，透過另外一個硫酸鹽腺甘酸轉(zhuǎn)移酶反應(yīng)，螢光素酶能將產(chǎn)物ATP與螢光素轉(zhuǎn)化為冷光,，機(jī)器借此探測光線并定序,。螢光素酶也可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂。法醫(yī)可以用含有螢光素酶的溶液來檢測犯罪現(xiàn)場中殘留的血跡,。醫(yī)院用螢光素酶的發(fā)光來發(fā)現(xiàn)特定的疾病,。螢光素酶還可以作為“報告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中，例如,，用于在轉(zhuǎn)染過螢光素酶的細(xì)胞中檢測特定啟動子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平,；這一技術(shù)被稱為報告基因檢測法或螢光素酶檢測法（LuciferaseAssay）。螢光素酶是一個熱敏感蛋白,，因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護(hù)能力,。此外，螢光素酶水母素的發(fā)光強(qiáng)度與環(huán)境中鈣離子濃度相關(guān),，因此可用于檢測生物體內(nèi)的鈣,。

    熒光素鈉[1]，橙紅色粉末,，無氣味,，有吸濕性；易溶于水,，溶液呈黃紅色,，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光，酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn),，微溶于乙醇；比較大吸收波長(水),?；拘畔⑺幤访Q熒光素鈉拼音名Yingguangsuna英文名FLUORESCEINSODIUM來源(分子式)與標(biāo)準(zhǔn)本品為9-(鄰羧基苯基)-6-羥基-3H-噸-3-酮二鈉鹽。按干燥品計算,，含C20H10Na2O5不得少于,。類別診斷用藥。劑量滴眼2%溶液貯藏密封保存,。制劑熒光素鈉注射液2化學(xué)性質(zhì)編輯中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名稱：FluoresceindisodiumsaltCAS號：518-47-8[2]熒光素鈉分子式：C20H10Na2O5分子量：等級：BSMDL號：MFCD00167039Beilstein號：3833041EC號：208-253-0熒光素鈉[1]3性狀描述編輯本品為橙紅色粉末,；無臭，幾乎無味,；有引濕性,。本品在水中易溶,，在乙醇中略溶。橙紅色粉末,，無氣味,，有吸濕性；易溶于水,，溶液呈黃紅色,，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光，酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn),，微溶于乙醇；比較大吸收波長(水),。4檢查資料編輯氯化物取本品,，分取溶液10ml，依法檢查（附錄ⅧA）,，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液制成的對照液比較，不得更濃（）,。硫酸鹽取上述氯化物項(xiàng)下剩余的溶液25ml,，依法檢查。做D-熒光素鉀鹽測試工作液是先用現(xiàn)配,。

    2）按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液,；3）腹腔注射10-15min后進(jìn)行成像分析。（對每只動物模型做熒光素動力學(xué)研究以確定峰值信號獲取時間）Firefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素分子式：C11H8N2O3S2分子量：g/mol外觀：白色至淺黃色粉末溶解：,，形成近乎無色至淺黃色的清夜保存：-15°C避光應(yīng)用：1）活細(xì)胞,、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析；2）***用于報告基因分析,，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析D-熒光素也常用于體外研究,，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析,；高通量測序和各種污染檢測,。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸），D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）,。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液，可溶于甲醇和DMSO,；后者易溶于水或緩沖液中,，使用方便，溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性,，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn),。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二,。D-熒光素鉀鹽使用的注意事項(xiàng),。常用熒光試劑

D-熒光素鉀鹽測試需要哪些必備條件？淮安熒光素D-熒光素鉀鹽試劑

    后者能夠易溶于水或緩沖液中,，使用方便,，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn),。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實(shí)質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件：4℃冰袋運(yùn)輸,；短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,，配制成30mg/mL的儲存液(100-200×)，混勻,。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融,。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析,。2.***成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液，混勻,。2）用μm濾膜過濾除菌,。立即使用，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融,。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,，以小鼠為例,，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg,；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺期）后進(jìn)行成像分析,。注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線，從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期,。 淮安熒光素D-熒光素鉀鹽試劑