螢火蟲(chóng)熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號(hào)分子,，可以用來(lái)標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報(bào)告基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7,，利用G418篩選，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc,，并在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評(píng)價(jià)其發(fā)光能力,。通過(guò)建立裸鼠移植瘤模型，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測(cè)腫大的瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移情況,，為下一步監(jiān)測(cè)裸鼠移植瘤對(duì)藥物作用的變化情從而為分析藥物對(duì)腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0,、200、400,、600,、800、1000μg/ml設(shè)置6個(gè)濃度梯度,。在細(xì)胞接種24h后,，加入6孔板中，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)孔在10～14d內(nèi)全部死亡,。每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,，死亡更低的G418濃度，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細(xì)胞的濃度,。1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF－7細(xì)胞,，將細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)待細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%孔培養(yǎng)板中，TM即可轉(zhuǎn)染,。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。在250μl無(wú)血清、無(wú)雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無(wú)血清,、無(wú)雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000,，室溫培育5min。將上述2種稀釋液混勻,。D-熒光素鉀鹽使用的是什么技術(shù),？無(wú)錫專業(yè)做D-熒光素鉀鹽活題成像

    經(jīng)HE染色后觀察細(xì)胞的病理形態(tài)學(xué)?；铑}動(dòng)物成像技術(shù)是近期發(fā)展起來(lái)的一種新型穩(wěn)定可靠,是檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)分子及細(xì)胞事件的影像檢測(cè)技術(shù),，強(qiáng)有力手段。利用生物發(fā)光成像（BLI）可以對(duì)活題病灶的大小進(jìn)行無(wú)損傷直觀準(zhǔn)確檢測(cè),。我們有自己的獨(dú)自有機(jī)合成實(shí)驗(yàn)室,，可以生產(chǎn)合成各種化學(xué)發(fā)光試劑,，我們可以提供化學(xué)發(fā)光試劑、化學(xué)發(fā)光底物,、發(fā)光標(biāo)記物,、發(fā)光增強(qiáng)劑、染料探針類,、微生物和酶的顯色底物以及體外診斷試劑,。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇丙的酮酸三(環(huán)已胺)鹽PEP0c835bf4-aae2-43c1-be81-e57液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH吖啶酯-T4結(jié)合物吖啶酯-T3結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-N-乙胺基馬來(lái)酰亞胺吖啶磺酰胺鹽-T4結(jié)合物吖啶磺酰胺鹽-T3結(jié)合物生物素-T4結(jié)合物化學(xué)發(fā)光分析試劑及標(biāo)記物生物素-T3結(jié)合物生物素-NHS活性酯吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH吖啶酯NSP-DMOAE-NHS吖啶酯NSP-DMOAE-PE。鎮(zhèn)江游離酸D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明D-熒光素鉀鹽應(yīng)立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。

    luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：,，在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin),，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示,，并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口,，產(chǎn)品價(jià)格昂貴,。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果,。所以,，需要國(guó)產(chǎn)化的方式生產(chǎn)，一方面可以降低成本,，一方面可以增強(qiáng)使用效果,。作者：科遠(yuǎn)迪鏈接：zhuanlan./p/來(lái)源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處,。D-luciferin，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)發(fā)光原理哺乳動(dòng)物生物發(fā)光,，一般是將Fireflyluciferase基因（由554個(gè)氨基酸構(gòu)成,，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株,，當(dāng)細(xì)胞分裂,、轉(zhuǎn)移、分化時(shí),熒光素酶也會(huì)得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá),?；颉⒓?xì)胞和活題動(dòng)物都可被熒光素酶基因標(biāo)記。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)后,，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin,，potassiumsalt，以下均簡(jiǎn)稱熒光素),，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象。所發(fā)的光波長(zhǎng)在540-600nm,。這種酶在ATP,，氧存在的條件下，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光,。

    熒光素鈉[1],，橙紅色粉末，無(wú)氣味,，有吸濕性,；易溶于水，溶液呈黃紅色,，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光,，酸化后消失，中和或堿化后又出現(xiàn),，微溶于乙醇,；比較大吸收波長(zhǎng)(水)?；拘畔⑺幤访Q熒光素鈉拼音名Yingguangsuna英文名FLUORESCEINSODIUM來(lái)源(分子式)與標(biāo)準(zhǔn)本品為9-(鄰羧基苯基)-6-羥基-3H-噸-3-酮二鈉鹽,。按干燥品計(jì)算，含C20H10Na2O5不得少于,。類別診斷用藥,。劑量滴眼2%溶液貯藏密封保存。制劑熒光素鈉注射液2化學(xué)性質(zhì)編輯中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名稱：FluoresceindisodiumsaltCAS號(hào)：518-47-8[2]熒光素鈉分子式：C20H10Na2O5分子量：等級(jí)：BSMDL號(hào)：MFCD00167039Beilstein號(hào)：3833041EC號(hào)：208-253-0熒光素鈉[1]3性狀描述編輯本品為橙紅色粉末,；無(wú)臭,，幾乎無(wú)味；有引濕性,。本品在水中易溶,，在乙醇中略溶。橙紅色粉末,，無(wú)氣味,，有吸濕性；易溶于水,，溶液呈黃紅色,，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光，酸化后消失，中和或堿化后又出現(xiàn),，微溶于乙醇,；比較大吸收波長(zhǎng)(水)。4檢查資料編輯氯化物取本品,，分取溶液10ml,，依法檢查（附錄ⅧA），與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液制成的對(duì)照液比較,，不得更濃（）,。硫酸鹽取上述氯化物項(xiàng)下剩余的溶液25ml，依法檢查,。D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽,。

    2）按10μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液；3）腹腔注射10-15min后進(jìn)行成像分析,。（對(duì)每只動(dòng)物模型做熒光素動(dòng)力學(xué)研究以確定峰值信號(hào)獲取時(shí)間）Firefly,freeacid/D-螢火蟲(chóng)熒光素分子式：C11H8N2O3S2分子量：g/mol外觀：白色至淺黃色粉末溶解：,，形成近乎無(wú)色至淺黃色的清夜保存：-15°C避光應(yīng)用：1）活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析,；2）***用于報(bào)告基因分析,，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析,；報(bào)告基因分析,；高通量測(cè)序和各種污染檢測(cè)。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸）,，D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）,。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,，可溶于甲醇和DMSO,；后者易溶于水或緩沖液中，使用方便,，溶劑d0926aa8-0148-40da-80fa-f65性,，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的差別,。相關(guān)列表魯米諾/3-氨基苯二甲酰肼/發(fā)光氨異魯米諾/4-氨基鄰苯二甲酰肼吖啶酯DMAE-NHS吖啶酰肼NSP-SA-ADH吖啶酯ME-DMAE-NHS哌嗪-N,N'-二。做D-熒光素鉀鹽測(cè)試哪個(gè)公司好,？宿遷專業(yè)做D-熒光素鉀鹽哪家好

光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性,。無(wú)錫專業(yè)做D-熒光素鉀鹽活題成像

    luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光,。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。分析熒光素或熒光素酶不是特定的分子,，而是對(duì)于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對(duì)應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,，雖然它們各不相同。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來(lái)催化不同的發(fā)光反應(yīng),。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲(chóng),，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇，Omphalotusoleariu'）或許多海洋生物都不相同,。在螢火蟲(chóng)中,，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入。一些生物,，如叩頭蟲(chóng)，含有多種不同的熒光素酶,，能夠催化同一熒光素底物,，而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲(chóng)有2000多種,，而叩甲總科（包括螢火蟲(chóng),、叩頭蟲(chóng)和相關(guān)昆蟲(chóng)）則有更多，因此它們的熒光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。目前研究得更透徹的熒光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲(chóng)中的北美螢火蟲(chóng)（Photinuspyrali'）,。應(yīng)用熒光素酶可以在實(shí)驗(yàn)室中用基因工程的方法生成，并被用于多種不同的實(shí)驗(yàn),。無(wú)錫專業(yè)做D-熒光素鉀鹽活題成像