其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶,。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）,。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,，而鈣離子的存在常?？梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）。[1]熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧熒光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光,。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈，只有越10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M,。熒光素或熒光素酶不是特定的分子，而是對于所有能夠產(chǎn)生熒光的底物和其對應(yīng)的酶的統(tǒng)稱,，雖然它們各不相同,。不同的能夠控制發(fā)光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發(fā)光反應(yīng)。更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲,，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇,，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同。在螢火蟲中,，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入,。一些生物，如叩頭蟲,，含有多種不同的熒光素酶,，能夠催化同一熒光素底物。熒光素酶作用下的D-熒光素鉀鹽,。鹽城D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長

    重組為一個明亮的螢光素酶,。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低，從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測定,；也可以和HiBiT一樣高,，從而允許自我組裝,。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究，我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的,。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽，具有多種功能,，例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時,，可以創(chuàng)建內(nèi)源性報告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,，人們認(rèn)識到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測定的組分檢測多種分析物,。由此產(chǎn)生的平臺（現(xiàn)稱為“Lumit”）提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法。熒光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,，其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶,。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）,。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,，而鈣離子的存在常?？梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）。熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸,。鹽城D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長做D-熒光素鉀鹽測試哪個公司好,？

    后者能夠易溶于水或緩沖液中，使用方便,，溶劑無毒性,，特別適合體內(nèi)實驗。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別,。產(chǎn)品性質(zhì)運輸和保存運輸條件：4℃冰袋運輸；短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,，配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),，混勻。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,，37℃孵育5-10min,，然后進(jìn)行圖像分析,。2.***成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,，混勻,。2）用μm濾膜過濾除菌。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.）,，按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g,，每只小鼠用量3mg,；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,，從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期,。

    因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象，并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān),。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin),，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的，約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身,。熒光素的半衰期約三個小時,，只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶。(1)熒光素不會影響動物的正常生理功能,。(2)熒光素是280道爾頓的小分子,，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障,。(3)熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快,，可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動物體內(nèi)。腹腔注射擴(kuò)散較慢,，持續(xù)發(fā)光長,。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光，10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的更高點,，在更高點持續(xù)約20~30min后開始衰減,，約3h后熒光素排除，發(fā)光全部消失，更佳檢測時間是在注射后15~35min之間,；若進(jìn)行熒光素靜脈注射,，擴(kuò)散快，但發(fā)光持續(xù)時間很短,?？蒲腥藛T根據(jù)大量的實驗總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg，即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素,。(4)觀察時間的間隔沒有更短限制,，只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動物體內(nèi)有一定的代謝過程,。D-熒光素鉀鹽適用于哪些領(lǐng)域？

    luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：,，在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin),，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示,，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口,，產(chǎn)品價格昂貴,。而且由于該產(chǎn)品容易降解、受潮影響使用效果,。所以,，需要國產(chǎn)化的方式生產(chǎn)，一方面可以降低成本,，一方面可以增強(qiáng)使用效果,。作者：科遠(yuǎn)迪鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán),，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處,。D-luciferin，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說明書發(fā)光原理哺乳動物生物發(fā)光,，一般是將Fireflyluciferase基因（由554個氨基酸構(gòu)成,，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株,，當(dāng)細(xì)胞分裂,、轉(zhuǎn)移、分化時,熒光素酶也會得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá),?；颉⒓?xì)胞和活題動物都可被熒光素酶基因標(biāo)記。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實驗動物體內(nèi)后,，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin,，potassiumsalt，以下均簡稱熒光素),，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,。所發(fā)的光波長在540-600nm。這種酶在ATP,，氧存在的條件下,，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光。D-熒光素鉀鹽檢測的安全性如何保障,？鹽城D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長

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    隨后30年里，Promega不斷在螢光素酶實驗工具領(lǐng)域推陳出新,，保持技術(shù)帶跑的人的地位,。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。1991螢光素酶檢測系統(tǒng)（LAR）Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem（LAR）,，為靈敏,、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報告基因一起,，為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具,。1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)（DLR）DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化,，在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展,。此外，pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因,，luc+,。這個改造一種報告基因以實現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報告基因上，通過生物信息學(xué)和合成方法,，實現(xiàn)了更大的改進(jìn),。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶,。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測的關(guān)鍵,。此后。鹽城D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長