5)對于檢測靈敏度要求特別高的實驗,建議使用新鮮配制的本產(chǎn)品。6)在進(jìn)行D-熒光素鉀鹽的溶解時,,應(yīng)使用無鈣鎂離子的DPBS,因鈣鎂離子可能會抑制熒光素酶的活性,,此外鎂離子可能會對熒光素的氧化造成影響,從而影響檢測。7)為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。8)本產(chǎn)品只作科研用途!熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠催化熒光素產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,,其中更有代表性的是來自螢火蟲體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類螢光素酶,,分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase,同時近年來研究得較多的來源于高斯氏菌的高斯熒光素酶(Gaussluciferase),。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,,在luciferin氧化的過程中,會發(fā)出生物熒光(bioluminescence),,可通過熒光測定儀設(shè)備測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光,,常應(yīng)用于啟動子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗證等方向研究。螢火蟲螢光素酶更通用和更常見的報告基因是北美螢火蟲photinuspyralis的熒光素酶,,該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性,。高濃度(體內(nèi))甚至沒有毒性,可用于原核和真核細(xì)胞,。運輸和保存運輸條件:4℃冰袋運輸,。D-熒光素鉀鹽長期保存條件是-20℃干燥避光。徐州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽
我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的,。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時,,可以創(chuàng)建內(nèi)源性報告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,,人們認(rèn)識到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測定的組分檢測多種分析物,。由此產(chǎn)生的平臺(現(xiàn)稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法。螢光素酶(英語:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,,其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP),。沒有螢光素酶的情況下,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,,而鈣離子的存在常??梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似)。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,,幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光,。與之形成鮮明對比的是人類使用的白熾燈,只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M,。螢光素或螢光素酶不是特定的分子,。鎮(zhèn)江熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽應(yīng)用D-熒光素也常用于身體的外部研究。
重組為一個明亮的螢光素酶,。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,,從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測定;也可以和HiBiT一樣高,,從而允許自我組裝,。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究,我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的,。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,,具有多種功能,例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時,,可以創(chuàng)建內(nèi)源性報告基因模型,。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,人們認(rèn)識到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測定的組分檢測多種分析物,。由此產(chǎn)生的平臺(現(xiàn)稱為“Lumit”)提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法,。熒光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶,。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,,熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷(ATP),。沒有熒光素酶的情況下,,螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,而鈣離子的存在常??梢赃M(jìn)一步加速反應(yīng)(與肌肉收縮的情況相似),。熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步:螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸。
就可以用高敏感度的CCD相機(jī)對動物體內(nèi)進(jìn)行***觀察而不會傷害到動物本身,。在螢光素酶中加入正確的螢光素底物就可以放出熒光,,而發(fā)出的光子可以被光敏感元件,如螢光探測器或改進(jìn)后的光學(xué)顯微鏡探測到,。這就使得對包括***在內(nèi)的多種生命活動進(jìn)程進(jìn)行觀察成為可能,。例如,螢光素酶已經(jīng)被用于商業(yè)化的次世代焦磷酸定序技術(shù),,借由dNTP接上DNA鏈時水解放出的焦磷酸,,透過另外一個硫酸鹽腺甘酸轉(zhuǎn)移酶反應(yīng),螢光素酶能將產(chǎn)物ATP與螢光素轉(zhuǎn)化為冷光,,機(jī)器借此探測光線并定序,。螢光素酶也可以被用于檢測血庫中所存血液中的紅血球是否開始破裂,。法醫(yī)可以用含有螢光素酶的溶液來檢測犯罪現(xiàn)場中殘留的血跡。醫(yī)院用螢光素酶的發(fā)光來發(fā)現(xiàn)特定的疾病,。螢光素酶還可以作為“報告蛋白”被用于分子生物學(xué)研究中,,例如,用于在轉(zhuǎn)染過螢光素酶的細(xì)胞中檢測特定啟動子的轉(zhuǎn)錄情況或用于探測細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平,;這一技術(shù)被稱為報告基因檢測法或螢光素酶檢測法(LuciferaseAssay),。螢光素酶是一個熱敏感蛋白,因此經(jīng)常被用于研究蛋白熱變性過程中熱休克蛋白的保護(hù)能力,。此外,,螢光素酶水母素的發(fā)光強(qiáng)度與環(huán)境中鈣離子濃度相關(guān),因此可用于檢測生物體內(nèi)的鈣,。ATP作用下的D-熒光素鉀鹽什么樣,。
4)待圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,,37℃孵育5-10min,,然后進(jìn)行圖像分析。2.活ti成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌,。立即使用,,或分裝于-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,。3)腹腔注射(.),,按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,以小鼠為例,,每只小鼠體重假定20g,,每只小鼠用量3mg;4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺期)后進(jìn)行成像分析,。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期,。注意事項1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin),、螢光素鉀鹽只是不同別名,以CAS號115144-35-9為準(zhǔn),。2)注射方式,、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線,,確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間,。3)如果要進(jìn)行ATP的檢測,,盡量避免外源ATP的污染,如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,,在進(jìn)行熒光素的溶解時應(yīng)使用ATP-free無菌水,。4)為避免反復(fù)凍融,本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化,,如有條件,可以對儲存液充氮氣或氬氣后保存,。D-熒光素鉀鹽合作需要交押金嗎,?淮安專業(yè)做D-熒光素鉀鹽供應(yīng)商
D-熒光素鉀鹽檢測是個人合作嗎?徐州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽
產(chǎn)品描述D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,,普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域,,特別是體內(nèi)***成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下,,熒光素底物能夠被氧化發(fā)光,。當(dāng)熒光素過量時,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性(見下圖),。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,,構(gòu)建原位**模型,之后注入熒光素底物,,通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強(qiáng)度變化,,從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評價等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響,,根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征,。注:在抗**藥物藥效評價試驗中,由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定**大小,,受**生長所發(fā)生的**內(nèi)部壞死影響,,生物自發(fā)光并不能很***的評價**生長,在抗**藥效評價有較高要求的實驗中,,建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測**生長,。D-熒光素也常用于體外研究,包括熒光素酶和ATP水平分析,;報告基因分析,;高通量測序和各種污染檢測。目前有三種產(chǎn)品形式:D-熒光素(游離酸),,D-熒光素鹽(鈉鹽和鉀鹽),。主要差別在于溶解特性:前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱,除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,??扇苡诩状己虳MSO,。 徐州螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽