后者能夠易溶于水或緩沖液中,，使用方便，溶劑無毒性,，特別適合體內(nèi)實驗,。配成溶液后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別,。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件：4℃冰袋運(yùn)輸；短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,，配制成30mg/mL的儲存液(100-200×),，混勻。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4）待圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液，37℃孵育5-10min,，然后進(jìn)行圖像分析,。2.***成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,，混勻,。2）用μm濾膜過濾除菌。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.）,，按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g,，每只小鼠用量3mg,；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線,，從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期,。 D-熒光素鉀鹽測試方法是體外生物發(fā)光檢測。無錫體外研究D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號分子,，可以用來標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報告基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7,，利用G418篩選，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc,，并在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評價其發(fā)光能力,。通過建立裸鼠移植瘤模型，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長及轉(zhuǎn)移情況,，為下一步監(jiān)測裸鼠移植瘤對藥物作用的變化情從而為分析藥物對腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0,、200、400,、600,、800、1000μg/ml設(shè)置6個濃度梯度,。在細(xì)胞接種24h后,，加入6孔板中，每個濃度設(shè)2個孔在10～14d內(nèi)全部死亡,。每天觀察細(xì)胞生長情況,，死亡更低的G418濃度,，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細(xì)胞的濃度。1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對數(shù)生長期的MCF－7細(xì)胞,，將細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)待細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%孔培養(yǎng)板中,，TM即可轉(zhuǎn)染。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。在250μl無血清,、無雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無血清、無雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000,，室溫培育5min,。將上述2種稀釋液混勻。連云港游離酸D-熒光素鉀鹽濃度D-熒光素鉀鹽應(yīng)立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。

    熒光素鈉[1],，橙紅色粉末,，無氣味，有吸濕性,；易溶于水,，溶液呈黃紅色，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光,，酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇,；比較大吸收波長(水),。基本信息藥品名稱熒光素鈉拼音名Yingguangsuna英文名FLUORESCEINSODIUM來源(分子式)與標(biāo)準(zhǔn)本品為9-(鄰羧基苯基)-6-羥基-3H-噸-3-酮二鈉鹽,。按干燥品計算,，含C20H10Na2O5不得少于。類別診斷用藥,。劑量滴眼2%溶液貯藏密封保存,。制劑熒光素鈉注射液2化學(xué)性質(zhì)編輯中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉;熒光橙紅鈉;熒光素二鈉英文名稱：FluoresceindisodiumsaltCAS號：518-47-8[2]熒光素鈉分子式：C20H10Na2O5分子量：等級：BSMDL號：MFCD00167039Beilstein號：3833041EC號：208-253-0熒光素鈉[1]3性狀描述編輯本品為橙紅色粉末；無臭,，幾乎無味,；有引濕性。本品在水中易溶,，在乙醇中略溶,。橙紅色粉末，無氣味,，有吸濕性,；易溶于水，溶液呈黃紅色,，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光,，酸化后消失，中和或堿化后又出現(xiàn),，微溶于乙醇,；比較大吸收波長(水)。4檢查資料編輯氯化物取本品,，分取溶液10ml,，依法檢查（附錄ⅧA），與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液制成的對照液比較,，不得更濃（）,。硫酸鹽取上述氯化物項下剩余的溶液25ml，依法檢查,。

    熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠催化熒光素產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,，其中**有7a70d2e3-5dda-4f49-84be-c6的是來自螢火蟲體內(nèi)(Fire?y)和海腎(Renilla)體內(nèi)的兩類螢光素酶，分別命名為F-Luciferase和R-Luciferase,，同時近年來研究得較多的來源于高斯氏菌的高斯熒光素酶（Gaussluciferase）,。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中,，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence),，可通過熒光測定儀設(shè)備測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應(yīng)用于啟動子轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控及miRNA靶基因驗證等方向研究,。螢火蟲螢光素酶**通用和**常見的報告基因是北美螢火蟲photinuspyralis的熒光素酶,，該蛋白質(zhì)不需要翻譯后修飾即可獲得酶活性。高濃度（體內(nèi)）甚至沒有毒性,，可用于原核和真核細(xì)胞,。Amplite?螢光素酶報告基因檢測試劑盒（12518）使用無DTT**配方來定量活細(xì)胞和細(xì)胞提取物中的螢光素酶活性。該測定基于螢火蟲熒光素酶,，螢火蟲熒光素酶是一種單體的61kD酶,，可催化熒光素的兩步氧化，在560nm處產(chǎn)生光,。Amplite?螢光素酶報告基因檢測試劑盒特點：具有優(yōu)化的“混合讀取”測定規(guī)程,，可與HTS液體處理儀器兼容具有高靈敏度。D-熒光素鉀鹽短期保存條件是4℃干燥避光,。

    包括熒光素酶和ATP水平分析,；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測,。目前有三種產(chǎn)品形式：D-熒光素（游離酸）,，D-熒光素鹽（鈉鹽和鉀鹽）,。主要差別在于溶解特性：前者的水溶性以及緩沖體系的溶解性都較弱，除非溶于弱堿如低濃度NaOH和KOH溶液,?？扇苡诩状己虳MSO；后者能夠易溶于水或緩沖液中,，使用方便,，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實驗,。配成溶液后的這三種產(chǎn)品,，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別。產(chǎn)品性質(zhì)運(yùn)輸和保存運(yùn)輸條件：4℃冰袋運(yùn)輸,；短期保存：4℃干燥避光長期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期長期保存：有效期一年工作液：先用現(xiàn)配使用方法1.體外生物發(fā)光檢測1）用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽,，配制成30mg/mL的儲存液(100-200×)，混勻,。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融,。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基。4）待圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析,。2.活題成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液，混勻,。2）用μm濾膜過濾除菌,。立即使用，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融,。3）腹腔注射（.）。D-熒光素鉀鹽檢測是個人合作嗎,？常州熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽使用說明

D-熒光素鉀鹽運(yùn)輸條件是4℃冰袋運(yùn)輸,。無錫體外研究D-熒光素鉀鹽應(yīng)用

    附錄ⅧB），與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對照液比較,，不得更濃（）,。干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重,，減失重量不得過%（附錄ⅧL）,。鋅鹽取本品,，加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后，加稀鹽酸2ml,，搖勻,，濾過，濾液中加亞鐵**鉀試液1ml,，不得發(fā)生渾濁。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,，點于濾紙上,，即生成黃色斑點，趁濕置溴蒸氣中,，1分鐘后再使與氨蒸氣接觸,，斑點即變?yōu)樯罘奂t色。(2)本品的水溶液顯強(qiáng)烈的熒光,，用大量的水稀釋后仍極明顯,；但加酸使成酸性后，熒光即消失,；再加堿使成堿性,，熒光又顯出。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）,。6含量測定編輯取本品約,，精密稱定，加水20ml溶解后,，加稀鹽酸5ml使熒光素析出,，用丁醇－氯仿(1:1)提取4次，每次20ml,，合并提取液,，用水10ml洗滌，洗液再用異丁醇－氯仿(1:1)5ml振搖提取,，合并提取液,，置105℃恒重的容器中，在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干,，殘渣用乙醇10ml溶解后,，再置水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重,，精密稱定,，殘渣重量與相乘，即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量,。熒光素鈉是一種有機(jī)化合物,，分子式為C20H10Na2O5,，橙紅色粉末，無氣味,，有吸濕性,；易溶于水，溶液呈黃紅色,，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光,。無錫體外研究D-熒光素鉀鹽應(yīng)用