用吸管吸出細(xì)胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混勻,；離心,，1000rpm,，5min,；棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,，計(jì)數(shù),，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶,，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng),；次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng),。注意事項(xiàng)：取錯(cuò)細(xì)胞：拿錯(cuò)凍存管,。（快快快，匆忙之中,，難免出錯(cuò),，況且－170多度，凍手?。┙鉀Q：（1）核查記錄冊及凍存管上細(xì)胞的名稱、時(shí)間是否一致,。（2）拿細(xì)胞時(shí)戴手套,！2.水浴時(shí)間太長：2min還沒融化。（凍存管的壁較厚,，隔熱）解決：（1）適當(dāng)提高水浴溫度（37度－40度）,。（2）要是冬天，就選用保溫盒,。3.冰盒內(nèi)時(shí)間太長：復(fù)蘇1h后,，還沒有加入新的培養(yǎng)液。（高濃度DMSO防止胞內(nèi)形成冰晶,，凍存時(shí)保護(hù)細(xì)胞,，但復(fù)蘇融解后，浸泡時(shí)間太久會,，對細(xì)胞有毒性）解決：提前預(yù)定超凈臺,，減少復(fù)蘇后插在冰盒里等待的時(shí)間。4.失去耐心：復(fù)蘇三四天后,，細(xì)胞沒有任何動(dòng)靜,，認(rèn)為失敗，倒掉所有細(xì)胞,。（有些細(xì)胞復(fù)蘇后一星期,，才有起色）解決：不要換液，耐心等待,，兩周后再做決定,。一,、細(xì)胞凍存液1.無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品概述:一種即用型、無需程序降溫的細(xì)胞凍存液,適用于哺乳動(dòng)物低溫保存,。無需配制,，使用簡單，細(xì)胞復(fù)活率高,。產(chǎn)品特點(diǎn)：(1)安全：無血清,。南京做無血清細(xì)胞凍存液的公司哪家便宜。鎮(zhèn)江專業(yè)做細(xì)胞凍存液

    無需繁瑣費(fèi)時(shí)的程序凍存步驟或價(jià)格高昂的程序降溫儀,，可直接重懸細(xì)胞后置于-80℃,，次日轉(zhuǎn)移到液氮完成整個(gè)凍存過程，節(jié)省大量的時(shí)間和精力,。產(chǎn)品特點(diǎn)：1)即用型細(xì)胞凍存液,，隨用隨取，2-8℃穩(wěn)定保存1年以上,；2)無需繁瑣的程序凍存步驟或昂貴的程序降溫儀,，直接放入-80℃冰箱，節(jié)省大量的時(shí)間和精力,；3)細(xì)胞復(fù)蘇率高達(dá)90%以上,，適用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的凍存；4)不含血清,，批次間差異?。?)能夠有效維持干細(xì)胞的多向分化潛能,；6)化學(xué)成分明確,，沒有添加任何外源蛋白，減少細(xì)胞污染機(jī)會,，同時(shí)減少外源蛋白對細(xì)胞正常生長和分化的影響,。使用說明(一)細(xì)胞凍存1)選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞(細(xì)胞匯合度90%左右)，并保證在凍存前24h內(nèi)換液一次,，收集細(xì)胞,，并將細(xì)胞制備成單細(xì)胞懸液(貼壁細(xì)胞可能需要用胰酶消化)，計(jì)數(shù),；2)將細(xì)胞懸液1000r/min離心5min,，棄上清；3)向細(xì)胞沉淀物中加入細(xì)胞凍存液,，輕輕吹打,，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞密度達(dá)到5×10?~1×10?個(gè)/mL；4)將上述細(xì)胞懸液按1mL或,，分裝于無菌細(xì)胞凍存管內(nèi),，擰緊管蓋，并做好標(biāo)記,；5)將細(xì)胞凍存管直接置于-80℃冰箱中,，24h后移入液氮長期保存。(二)細(xì)胞復(fù)蘇1)從液氮罐中取出凍存的細(xì)胞,，立即放入37℃水浴鍋中快速解凍,。索萊寶通用細(xì)胞凍存液無血清細(xì)胞凍存液如何選擇合作公司？

    隔夜取出凍存管直接放液氮凍存,?；蛑苯硬捎贸绦蛐越禍睾懈鼮榉奖恪Ｗ髡撸悍?*研究僧鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有,。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán),，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。1,、細(xì)胞活力及濃度細(xì)胞應(yīng)在生長良好,、致密度約為80-90％、數(shù)目一般為106-107/ml,，活力達(dá)90%以上的狀態(tài)下凍存,。細(xì)胞活力差的細(xì)胞在凍存后的成活率很小，因此,，一定要在細(xì)胞旺盛分裂時(shí)期凍存。2,、注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)DMSO應(yīng)為試劑級等級,，無菌且無色，可以用微米濾膜過濾,，或者直接購買無菌產(chǎn)品,。以5-10ml小體積分裝，4℃避光保存,，勿作多次解凍,。使用DMSO前，不需要進(jìn)行高壓滅菌,，它本身就有滅菌的作用,。高壓滅菌反而會破壞它的分子結(jié)構(gòu)，以至于降低冷凍保存效果,。在常溫下,，DMSO對人體有害，故在配制時(shí)**好帶上手套?；靹駾MSO要快,，因?yàn)镈MSO對細(xì)胞有毒性，混合后應(yīng)盡快凍存,。尤為值得注意的是細(xì)胞中加入凍存液后,，一定要混勻，防止DMSO沉淀,。3,、提前配制凍存液凍存液應(yīng)該提前配制，置于室溫備用,，防止臨時(shí)配制產(chǎn)生的熱量損傷細(xì)胞,。4、實(shí)行細(xì)胞慢凍的原則緩慢冷凍,，可使細(xì)胞逐步脫水,，細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶，導(dǎo)致細(xì)胞損害,。對于大多數(shù)細(xì)胞來說,，每分鐘降1-3℃是合適的。相反,。

    其中DMSO的含量是10%,，血清的含量是10%，統(tǒng)稱為含血清細(xì)胞凍存液,。含血清細(xì)胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘,，再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)（或隔夜）,，后來才移至液氮罐中進(jìn)行長期的儲存。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個(gè)小時(shí),，以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量的死亡。）可見,，含血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞時(shí)遇到的問題：1.凍存細(xì)胞時(shí)需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液,，此步可省略)2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步驟繁瑣,，耗時(shí)耗力3.含血清,，細(xì)胞污染(病毒、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高4.血清批次,、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異5.需液氮凍存,，且不能原位（如孔板）凍存Cellregen無血清細(xì)胞凍存液是不含血清和動(dòng)物源成分,，含DMSO、糖類,、氨基酸等成分的一款通用型細(xì)胞凍存液,。Cellregen無血清細(xì)胞凍存液的凍存方法是：將細(xì)胞凍存懸液（凍存管或孔板）直接放置-80℃冰箱長期保存?？梢?，Cellregen無血清細(xì)胞凍存液相對于含血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢有：1.即用型，無需現(xiàn)配,，直接將細(xì)胞懸浮于凍存液中即可2.通用型,。做無血清細(xì)胞凍存液真的靠譜嗎？

    細(xì)胞類型細(xì)胞存活率間充質(zhì)干細(xì)胞％臍帶血細(xì)胞99％nk細(xì)胞96％表1不同細(xì)胞凍存后的細(xì)胞存活率,。細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,，減少細(xì)胞代謝，以便長期儲存的一種技術(shù),。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,，起到了細(xì)胞保種的作用。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用,。除此之外,，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈,、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞,。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低,，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出,，減少了冰晶形成,，從而避免細(xì)胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活,。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/min,，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃),。細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中,，在培養(yǎng)器具,、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi)，而且細(xì)胞一旦離開***開始原代培養(yǎng),。無血清細(xì)胞凍存液研究領(lǐng)域,。無錫懸浮細(xì)胞凍存液使用說明

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    細(xì)胞凍存技術(shù)作為一種保存細(xì)胞的有效方法,，在生物學(xué)領(lǐng)域已有深入***的應(yīng)用,。因?yàn)檎Ｇ闆r下，直接冷凍細(xì)胞會產(chǎn)生冰晶對細(xì)胞造成傷害,，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。所以需要通過添加冷凍保護(hù)劑配制細(xì)胞凍存液，來保護(hù)細(xì)胞,。凍存保護(hù)劑根據(jù)其是否穿透細(xì)胞膜可分為滲透性和非滲透性兩類,。滲透性冷凍保護(hù)劑多是一些小分子物質(zhì)，可以透過細(xì)胞膜滲透到細(xì)胞內(nèi),。包括二甲基亞砜(DMSO),、甘油、乙二醇,、丙二醇,、甲醇、乙醇,、丙醇,、和甲酰胺等。這類保護(hù)劑能夠在細(xì)胞冷凍懸液完全凝固之前,，穿過細(xì)胞膜滲透到細(xì)胞內(nèi),，在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,，從而保護(hù)細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷,。同時(shí)，細(xì)胞內(nèi)水分也不會過分外滲,，避免了細(xì)胞過分脫水皺縮,。非滲透性冷凍保護(hù)劑一般是些大分子物質(zhì)，不能滲透到細(xì)胞內(nèi),。該類保護(hù)劑主要包括聚yi烯吡ge烷酮,、蔗糖、聚乙二醇,、葡聚糖,、白蛋白及***等。其保護(hù)機(jī)制的假設(shè)很多,，其中一種可能是,，聚yi烯吡ge烷酮等大分子物質(zhì)可以優(yōu)先同溶液中的水分子相結(jié)合,，降低溶液中自由水的含量。使冰點(diǎn)降低,。減少冰晶的形成,；同時(shí)，由于其分子量大,，使溶液中電解質(zhì)濃度降低,，從而減輕溶質(zhì)損傷。鎮(zhèn)江專業(yè)做細(xì)胞凍存液