4）待圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,，37℃孵育5-10min,，然后進(jìn)行圖像分析。2.活ti成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液，混勻,。2）用μm濾膜過濾除菌,。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融,。3）腹腔注射（.）,，按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射，以小鼠為例,，每只小鼠體重假定20g,，每只小鼠用量3mg；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析,。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）,、螢光素鉀鹽只是不同別名,，以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn)。2）注射方式,、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間,。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無菌水,。4）為避免反復(fù)凍融，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化,，如有條件，可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊４?。D-熒光素鉀鹽找南京翌科生物科技有限公司,。南京熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽活題成像原理

    luciferin)的分子結(jié)構(gòu)如右圖所示：，在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng),，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，分子結(jié)構(gòu)如右圖所示,，并產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,。但是該底物熒光素以前大多依賴進(jìn)口，產(chǎn)品價(jià)格昂貴,。而且由于該產(chǎn)品容易降解,、受潮影響使用效果。所以，需要國產(chǎn)化的方式生產(chǎn),，一方面可以降低成本,，一方面可以增強(qiáng)使用效果。作者：科遠(yuǎn)迪鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權(quán)歸作者所有,。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。D-luciferin,，potassiumsalt熒光素產(chǎn)品說明書發(fā)光原理哺乳動(dòng)物生物發(fā)光,，一般是將Fireflyluciferase基因（由554個(gè)氨基酸構(gòu)成，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶,，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株,，當(dāng)細(xì)胞分裂、轉(zhuǎn)移,、分化時(shí),熒光素酶也會(huì)得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá),。基因,、細(xì)胞和活題動(dòng)物都可被熒光素酶基因標(biāo)記,。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)后，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin,，potassiumsalt,，以下均簡稱熒光素)，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生長發(fā)生光現(xiàn)象,。所發(fā)的光波長在540-600nm,。這種酶在ATP，氧存在的條件下,，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光,。南京熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽哪家好D-熒光素鉀鹽測(cè)試適用范圍包括哪些？

    或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至mg/mL的工作液濃度,。3）去除細(xì)胞培養(yǎng)基,。4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,，37℃孵育5-10min,，然后進(jìn)行圖像分析。2.***成像分析1）用無菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液,，混勻。2）用μm濾膜過濾除菌,。立即使用,，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融。3）腹腔注射（.）,，按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,。4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期,。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）只只是不同公司在命名上的差異,都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylicacid。2）注射方式,、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間,。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無菌水,。

    更為人所知的發(fā)光生物是螢火蟲，而其所采用不同的熒光素酶與其他發(fā)光生物如熒光菇（發(fā)光類臍菇,，Omphalotusolearius）或許多海洋生物都不相同,。在螢火蟲中，發(fā)光反應(yīng)所需的氧氣是從被稱為腹部氣管（abdominaltrachea）的管道中輸入,。一些生物,，如叩頭蟲，含有多種不同的熒光素酶,，能夠催化同一熒光素底物,，而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種,，而叩甲總科（包括螢火蟲,、叩頭蟲和相關(guān)昆蟲）則有更多，因此它們的熒光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）,。免疫熒光法免疫熒光法的基本原理是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素，當(dāng)與其相對(duì)應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時(shí),，在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素,，在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位，檢測(cè)出抗原或抗體,。常用的熒光素有①異硫氰酸熒光素（fluoreceinisothiocyante,，F(xiàn)ITC），為黃色、橙黃色或褐黃色結(jié)晶粉末,，有兩種異構(gòu)體,，易溶于水和酒精等溶劑。分子量為389,，更大吸收光譜為490～495,，更大發(fā)射光譜為520～530urn，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光,，是更常用的標(biāo)記抗體的熒光素,。②四甲基異氰酸羅達(dá)明。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽測(cè)試價(jià)格,。

    每孔加入100μl養(yǎng)24h后,，Luciferin使其終濃度為150μg/ml，PBS,，再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測(cè),，分析發(fā)光強(qiáng)度與細(xì)胞數(shù)之間的相關(guān)性。4)細(xì)胞生長曲線繪制MCF7-luc細(xì)胞和作為對(duì)照取表達(dá)熒光素酶的MCF-7細(xì)胞,，接種于24孔板,，接種密度為2×104/孔。細(xì)胞接種后1～7d,，每天胰蛋白酶消化其中3孔細(xì)胞,，用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定細(xì)胞數(shù)。以細(xì)胞生長天數(shù)為橫坐標(biāo),，細(xì)胞數(shù)目為縱坐標(biāo),，分別繪制兩種細(xì)胞生長曲線。二．動(dòng)物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠,，4～5周齡,，體重（15±2）g，雌雄各3只,。取對(duì)數(shù)生長期的MCF-7用PBS重懸為2．5×10/ml懸液,，每只裸鼠左右背側(cè)近腋部皮下接種100μl，共接種6只,。接種后第5d采用德國BERTHOLD公司的活題成像系統(tǒng)檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度,。以后每5d觀測(cè)一連續(xù)觀測(cè)30d。觀測(cè)前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉（計(jì)量為：35mg/kg體重）,，按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin（invivograde），10min后,，進(jìn)行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長情況,，定量分析各時(shí)間點(diǎn)的熒光值。繪制腫大的瘤皮下生長曲線.MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學(xué)觀察MCF-7-luc細(xì)胞裸鼠皮下接種后25d，脫頸處死小鼠,，取腫大的瘤組織,，制成石蠟切片，切片厚度為3μm,。D-熒光素鉀鹽的發(fā)射波長是多少,？揚(yáng)州D-熒光素鉀鹽發(fā)射波長

D-熒光素鉀鹽測(cè)試需要哪些必備條件？南京熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽活題成像原理

    附錄ⅧB）,，與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液制成的對(duì)照液比較,，不得更濃（）。干燥失重取本品,，在105℃干燥至恒重,，減失重量不得過%（附錄ⅧL）。鋅鹽取本品,，加氯化鈉的飽和水溶液10ml溶解后,，加稀鹽酸2ml，搖勻,，濾過,，濾液中加亞鐵**鉀試液1ml，不得發(fā)生渾濁,。5鑒別方法編輯(1)取本品的水溶液(1→2000)1滴,，點(diǎn)于濾紙上，即生成黃色斑點(diǎn),，趁濕置溴蒸氣中,，1分鐘后再使與氨蒸氣接觸，斑點(diǎn)即變?yōu)樯罘奂t色,。(2)本品的水溶液顯強(qiáng)烈的熒光,，用大量的水稀釋后仍極明顯；但加酸使成酸性后,，熒光即消失,；再加堿使成堿性，熒光又顯出,。(3)本品熾灼灰化后顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）,。6含量測(cè)定編輯取本品約，精密稱定,，加水20ml溶解后,，加稀鹽酸5ml使熒光素析出，用丁醇－氯仿(1:1)提取4次,，每次20ml,，合并提取液,，用水10ml洗滌，洗液再用異丁醇－氯仿(1:1)5ml振搖提取,，合并提取液,，置105℃恒重的容器中，在水浴上通風(fēng)蒸發(fā)至干,，殘?jiān)靡掖?0ml溶解后,，再置水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重,，精密稱定,，殘?jiān)亓颗c相乘，即得供試量中含有C20H10Na2O5的重量,。熒光素鈉是一種有機(jī)化合物,，分子式為C20H10Na2O5，橙紅色粉末,，無氣味,，有吸濕性；易溶于水,，溶液呈黃紅色,，并帶極強(qiáng)的黃綠色熒光。南京熒光素酶編碼基因D-熒光素鉀鹽活題成像原理