重組為一個明亮的螢光素酶,。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低,，從而可以進(jìn)行蛋白質(zhì)相互作用的測定；也可以和HiBiT一樣高,，從而允許自我組裝,。[1]2017HiBiT?技術(shù)基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究，我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的,。HiBiT作為一種易于檢測且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,，具有多種功能，例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時，可以創(chuàng)建內(nèi)源性報告基因模型,。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,，人們認(rèn)識到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測定的組分檢測多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺（現(xiàn)稱為“Lumit”）提供了具有高靈敏度的簡化免疫檢測法,。熒光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,，其中更有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的熒光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,，熒光的產(chǎn)生是來自于螢光素的氧化,，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有熒光素酶的情況下,，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,，而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）,。熒光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸,。D-熒光素鉀鹽使用濃度怎么樣？熒光素吸收波長

    從而實(shí)時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的***功效等,。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響,，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征。,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol純度：高級純（）應(yīng)用：1）活細(xì)胞,、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析,；2）***用于報告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析,；Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/體外生物發(fā)光檢測1）配制成100mM的儲存液（200×,，濃度30mg/ml）?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存,。2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液，配制工作液(終濃度150μg/mL),。3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無殘留,。4）圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析（或者細(xì)胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強(qiáng)信號）,。D-熒光素鉀鹽注：螢光素,、螢光素酶、螢火蟲螢光素酶,、螢光素鉀鹽、螢光素鉀鹽鹽也經(jīng)常被稱作熒光素,、熒光素酶,、螢火蟲熒光素酶、熒光素鉀鹽、熒光素鈉鹽,。Protocol2：Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1）用無菌的DPBS（w/oMg2+,、Ca2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL)，,。一旦使用,，保持冰冷且避光。揚(yáng)州游離酸D-熒光素鉀鹽生物公司D-熒光素鉀鹽使用的是什么技術(shù),？

    D-熒光素鉀鹽是一種化學(xué)品,。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域,，特別是體內(nèi)活題成像技術(shù),。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素底物能夠被氧化發(fā)光,。當(dāng)熒光素過量時,，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的慢病毒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株,，構(gòu)建原位腫大的瘤模型,，之后注入熒光素底物，通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強(qiáng)度變化,，從而實(shí)時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或進(jìn)行藥物藥效評價等,。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來指示能量或生命體征,。注：在抗腫大的瘤藥物藥效評價試驗(yàn)中,，由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達(dá)標(biāo)定腫大的瘤大小，受腫大的瘤生長所發(fā)生的腫大的瘤內(nèi)部壞死影響,，生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評價腫大的瘤生長,，在抗腫大的瘤藥效評價有較高要求的實(shí)驗(yàn)中，建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長,。D-熒光素也常用于體外研究,。

    LAR）Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測試劑LuciferaseAssaySystem（LAR），為靈敏,、非放射性的報告基因檢測拉開了序幕,。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報告基因一起，為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具,。[1]1995Dual-Luciferase?報告基因檢測系統(tǒng)（DLR）DLR是第一種允許在單個樣本中依次檢測兩個報告基因的試劑,。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化，在提高報告基因檢測的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展,。此外,，pGL3報告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因，luc+。這個改造一種報告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報告基因上,，通過生物信息學(xué)和合成方法,，實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn)。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上,，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶,。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測和儲藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測的關(guān)鍵。此后,，通過開發(fā)新的方法來改變螢火蟲螢光素酶檢測的信號動力學(xué),，例如Bright-Glo?、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測,。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡化了樣品處理,。D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長是多長？

    8．取剩余裂解液測定LacZ的活性,，其讀數(shù)作為內(nèi)標(biāo)用以矯正熒光素酶的讀數(shù),。9.用矯正后的讀數(shù)作圖，分析數(shù)據(jù),。注：熒光素見光易氧化,，已稀釋未用的熒光素應(yīng)丟棄。注意事項(xiàng)：1．熒光素酶檢測試劑需在15-25℃條件下預(yù)平衡后再進(jìn)行反應(yīng),，而后依據(jù)具體條件進(jìn)行自動或手動檢測,。當(dāng)用液閃計數(shù)儀時，加入熒光素酶檢測試劑后立即輕輕混勻,。2．如果細(xì)胞裂解后不能立即對提取物進(jìn)行檢測,，樣品可以在冰上保存大約5h，在-70℃可保存數(shù)月,。不要反復(fù)凍融以避免酶活性的降低,。3．利用上述方法檢測冷的樣品時，其信號強(qiáng)度將下降5-15%,。4．在熒光素酶活性較高的情況下,，導(dǎo)致信號超出線性范圍（信號溢出）可用裂解液將樣品進(jìn)行稀釋。5．不要儲存稀釋過的樣品,。如果必須保存,，要在稀釋的樣品中加入BSA至終濃度為，這樣可以保持樣品的穩(wěn)定性,。6．一些熒光儀在進(jìn)行檢測前需要1-2s的穩(wěn)定,，因此建議在開機(jī)后過一段時間再進(jìn)行檢測操作。熒光素酶報告基因檢測主要有哪些用途,？a.啟動子結(jié)構(gòu)分析,，將啟動子區(qū)域序列（通常2k左右）進(jìn)行分段截短,，或?qū)μ囟ㄎ稽c(diǎn)進(jìn)行突變，再分別構(gòu)建入luciferase報告載體,，檢測其啟動子活性。b.啟動子SNP分析,，一些基因的啟動子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性,。D-熒光素鉀鹽如何選擇合作公司？揚(yáng)州游離酸D-熒光素鉀鹽生物公司

D-熒光素鉀鹽檢測是個人合作嗎,？熒光素吸收波長

    GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素-NHS酯5(6)-羧基熒光素-NHS酯6-羧基熒光素D熒光素鈉鹽D-Luciferin,SodiumSaltD-熒光素鉀鹽D-Luciferin,PotassiumSaltD-熒光素螢火蟲,，游離酸D-LuciferinFirefly,freeacid螢火蟲熒光素酶fireflyluciferase海腎熒光素酶Renillaluciferase天然腔腸熒光素Coelenterazineh腔腸素hCoelenterazinef腔腸素fCoelenterazineh/腔腸素h腔腸熒光素活題成像用D-luciferin,potassiumsalt熒光素鉀鹽介紹一、活題成像技術(shù)簡介活題生物發(fā)光成像技術(shù)能夠讓研究人員直接快速的測量各種哎癥模型中腫大的瘤的生長,、轉(zhuǎn)移以及對藥物的反應(yīng),。在藥效學(xué)評價方面，熒光素酶哎癥模型可用于哎癥體內(nèi)用藥在整體動物水平上進(jìn)行長期療效跟蹤觀察,。利用無創(chuàng)傷活題成像對哎細(xì)胞生長的檢測,，可對哎癥治的好之前和過程中的哎細(xì)胞的變化進(jìn)行實(shí)時觀測和評估。熒光素酶的發(fā)光是生物發(fā)光,，不需要激發(fā)光,，但需要底物熒光素(D-Luciferin)。熒光素酶的底物熒光素,，約280道爾頓,。熒光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障,。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,，約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身。熒光素,。熒光素吸收波長